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重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达被引量：7: 1; 作者杨钰冯杰 +5 位作者刘嫒张素辉许国洋冯将刘宗胜鲜思美《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1396-1401,共6页; 本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重... 展开更多; 关键词羊口疮病毒分离鉴定 F1L基因原核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的建立及应用被引量：11: 2; 作者鲜思美张素辉 +4 位作者杨钰邓诗吴健刘嫒刘宗胜《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第6期104-108,共5页; 为羊口疮（Orf）的分子流行病学调查、早期快速诊断及细胞培养物的检测等提供参考，根据GenBank 发表的羊口疮病毒（OrfV）B2L 基因序列设计合成1对引物，以 pMD18-T-B2L 重组质粒为阳性标准品，建立了检测 OrfV 核酸的 SYBR Green Ⅰ... 展开更多; 关键词羊口疮病毒检测方法; 在线阅读下载PDF 职称材料

琼脂扩散试验检测羊口疮病毒被引量：6: 3; 作者鲜思美吴健 +3 位作者杨钰刘宗胜刘嫒苏刚《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第8期23-25,共3页; 以羊口疮痂皮毒抗原接种家兔制备高免血清,经琼扩试验检测血清价为1∶16;通过抗原与兔抗羊口疮高免血清的方阵分析,确定兔抗羊口疮高免血清诊断抗体的最佳稀释度为1∶4;该诊断抗体对5份不同地区的羊口疮疑似病料都呈现特异性反应,不与... 展开更多; 关键词羊口疮病毒高免血清琼脂扩散试验检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

羊口疮病毒贵州株F1L基因克隆及生物信息学分析被引量：10: 4; 作者刘嫒杨钰 +4 位作者鲜思美刘宗胜吴健罗波陈永翠《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期53-60,共8页; 为分析羊口疮病毒贵州株(ORFV-GZ株)F1L基因的分子特点,预测编码蛋白的生物学功能,本试验对ORFV-GZ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件及方法,对ORFV-GZ株F1L基因进行列分析并对其编码蛋白进行了二级结构、... 展开更多; 关键词羊口疮病毒 F1L基因克隆生物信息学分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达被引量：7: 1; 作者杨钰冯杰刘嫒张素辉许国洋冯将刘宗胜鲜思美; 机构贵州大学重庆市畜牧科学院毕节市七星关区农牧局草地中心贵州省动物疫病研究所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1396-1401,共6页; 基金贵州省科学技术基金项目[黔科合J字(2010)2260] 贵州省科学技术基金项目[黔科合LH字(2014)7667] +1 种基金重庆市农发资金项目(14423) 毕节市科技局项目:贵州黑山羊羔羊口疮病防治技术攻关[毕科合字(2012)24号]; 文摘本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4ku,主要以包涵体形式存在,5h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性。; 关键词羊口疮病毒分离鉴定 F1L基因原核表达; Keywords Orf virus （ORFV） isolation and identification FIL gene prokaryotic expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的建立及应用被引量：11: 2; 作者鲜思美张素辉杨钰邓诗吴健刘嫒刘宗胜; 机构贵州大学动物科学学院贵州省动物疫病研究所重庆市畜牧科学院毕节市七星关区农牧局草地中心毕节市动物产品质量安全监督检验所; 出处《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第6期104-108,共5页; 基金贵州省科学技术基金项目[黔科合J字(2010)2260] 毕节市科技局项目"贵州黑山羊羔羊口疮病防治技术攻关"[毕科合字(2012)24号] 重庆市基本科研业务费专项"羊口疮病原分离鉴定及生物学特性研究"(11618); 文摘为羊口疮（Orf）的分子流行病学调查、早期快速诊断及细胞培养物的检测等提供参考，根据GenBank 发表的羊口疮病毒（OrfV）B2L 基因序列设计合成1对引物，以 pMD18-T-B2L 重组质粒为阳性标准品，建立了检测 OrfV 核酸的 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 方法，并进行了临床应用。结果表明：建立的 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 的线性关系良好，标准曲线的相关系数达到-1；最低检测限为1．0x10^3 copies／μL，比常规 PCR 方法高100倍，与山羊痘和口蹄疫疫苗毒均不发生交叉反应；组内变异系数为1．061％-2．873％，组间变异系数为0．397％-3．829％。用该方法检测5例 OrfV 感染临床病例和8份不同代次的 OrfV 细胞培养物，阳性率均为100％。SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可以用于 OrfV 的病原检测及定量分析。; 关键词羊口疮病毒检测方法; Keywords PCR ORFV real-time fluorescence quantification PCR detection method; 分类号 S858.26 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名琼脂扩散试验检测羊口疮病毒被引量：6: 3; 作者鲜思美吴健杨钰刘宗胜刘嫒苏刚; 机构贵州大学动物科学学院贵州省动物疫病研究所毕节市七星关区农牧局草地中心毕节市动物产品质量安全监督检验所; 出处《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第8期23-25,共3页; 基金贵州省科学技术基金项目[黔科合J字(2010)2260] 贵州大学引进人才科研项目[贵大人基合字(2009)024号] 毕节市科技局项目:贵州黑山羊羔羊口疮病防治技术攻关[毕科合字(2012)24号]; 文摘以羊口疮痂皮毒抗原接种家兔制备高免血清,经琼扩试验检测血清价为1∶16;通过抗原与兔抗羊口疮高免血清的方阵分析,确定兔抗羊口疮高免血清诊断抗体的最佳稀释度为1∶4;该诊断抗体对5份不同地区的羊口疮疑似病料都呈现特异性反应,不与山羊痘疫苗毒、口蹄疫疫苗毒和羊正常皮肤抗原发生交叉反应。琼脂扩散试验检测羊口疮病毒是一种简便、易于判断、实用性强的诊断方法。; 关键词羊口疮病毒高免血清琼脂扩散试验检测; Keywords Orf virus Hyperimmune serum Agar diffusion Testing Detection; 分类号 S852.654 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名羊口疮病毒贵州株F1L基因克隆及生物信息学分析被引量：10: 4; 作者刘嫒杨钰鲜思美刘宗胜吴健罗波陈永翠; 机构贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州大学动物科学学院毕节市动物产品质量安全监督检验所毕节市七星关区农牧局草地中心; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期53-60,共8页; 基金贵州省科学技术基金项目[黔科合J字(2010)2260] 贵州省科学技术基金项目[黔科合LH字(2014)7667] +2 种基金贵州大学2014年大学生创新创业训练计划项目[2014(016)]; 文摘为分析羊口疮病毒贵州株(ORFV-GZ株)F1L基因的分子特点,预测编码蛋白的生物学功能,本试验对ORFV-GZ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件及方法,对ORFV-GZ株F1L基因进行列分析并对其编码蛋白进行了二级结构、B细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和信号肽预测。结果显示,F1L基因PCR扩增产物大小为1 029bp,编码342个氨基酸;与OV-SA00株、NZ2株、OV-IA82株和D1701株相应序列核苷酸同源性分别为98.4%、97.9%、97.8%和96.8%,氨基酸的同源性分别为98.3%、97.6%、97.3%和95.3%;系统进化树显示,ORFV-GZ株F1L基因与FJ-GT株亲缘关系最近;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲所占比例较大,预测此蛋白可能存在7个B细胞优势抗原表位,两个跨膜区域,无信号肽区域。本试验结果将为贵州省ORFV免疫诊断及核酸疫苗研究提供理论依据。; 关键词羊口疮病毒 F1L基因克隆生物信息学分析; Keywords Orf virus（ORFV） F1Lgene clone bioinformatics analysis; 分类号 S858.26 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达	杨钰冯杰刘嫒张素辉许国洋冯将刘宗胜鲜思美	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2015	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的建立及应用	鲜思美张素辉杨钰邓诗吴健刘嫒刘宗胜	《贵州农业科学》 CAS 北大核心	2014	11	在线阅读下载PDF 职称材料
3	琼脂扩散试验检测羊口疮病毒	鲜思美吴健杨钰刘宗胜刘嫒苏刚	《中国兽医杂志》 CAS 北大核心	2014	6	在线阅读下载PDF 职称材料
4	羊口疮病毒贵州株F1L基因克隆及生物信息学分析	刘嫒杨钰鲜思美刘宗胜吴健罗波陈永翠	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2015	10	在线阅读下载PDF 职称材料