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题名鞘氨醇-1-磷酸受体-1结合肽的筛选及功能验证
被引量：1
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作者
张华
樊霞
陈旭义
杨波
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机构
武警后勤学院附属医院检验科
武警辽宁总队医院检验科
脑系科中心
药剂科
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出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2013年第7期685-689,共5页
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基金
国家自然科学基金青年项目(11102235)
天津市自然科学基金重点项目(12JCZDJC24100)
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文摘
目的蛋白鞘氨醇-1-磷酸受体-1(sphingosine-1-phosphate receptor-1,S1P1)在血管新生中发挥着关键性作用,并在肿瘤细胞中高表达。研究通过筛选S1P1筛选胞外区结合的功能肽段,观察S1P1的抑制对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的影响。方法在大肠埃希菌BL21(DE3)中融合表达S1P1的胞外区1-46肽段,亲和纯化获得了GST-S1P11-46融合蛋白,并以此目的蛋白为靶标,采用固相包被的方法对噬菌体随机展示12肽库进行筛选,挑选有高亲和力的噬菌体,经测序得到阳性噬菌体的小肽序列;随后,将小肽偶连在匙孔蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)上,并通过Western blot、细胞免疫荧光、成管实验,观察偶联肽与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)表达的S1P1结合能力及对HUVEC管形成的影响,MTT检测偶联肽对肝癌细胞(human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2)增殖的影响。结果获得了与S1P1有较高亲和力的2种12肽。细胞实验证实偶联肽能结合细胞表面的S1P1受体,而且2种偶联肽均能抑制HepG2的增殖,并抑制HUVEC细胞的成管行为。结论利用噬菌体肽库筛选技术,成功筛选出了具有抑制作用的S1P1结合肽。
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关键词
鞘氨醇-1
磷酸受体-1
噬菌体展示肽
血管生成
偶联肽
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Keywords
Sphingosine 1-phosphate receptor-1
Phage displaying peptides
Angiogenesis
Coupled peptides
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分类号
R979.5
[医药卫生—药品]
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