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干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响
被引量：
3
1
作者
罗悦晨
周欣
+4 位作者
姬文婕
孙海英
卢芮伊
姜铁民
李玉明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期225-228,共4页
目的应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转...
目的应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株。用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能。结果成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80%。CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(P<0.05);流式细胞术结果显示,抑制NaV1.9的表达使细胞吞噬能力降低(P<0.05);Transwell小室法结果显示,干扰NaV1.9的表达使细胞迁移能力减弱(P<0.05)。结论建立了稳定干扰NaV1.9的RAW264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低。
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关键词
NAV1
9
RAW264
7
增殖
吞噬能力
迁移能力
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职称材料
重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
2
作者
杨国红
姬文婕
+2 位作者
周欣
毕莹
李玉明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期677-679,共3页
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验...
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验证,转染PT67包装细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达目的基因的包装细胞株,用反转录PCR(RT-PCR)和Western blot方法验证其在RAW 264.7细胞中的表达。结果:构建的pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体经双酶切和PCR鉴定正确,测序结果与ddVEGF-C序列一致,病毒滴度为2×107CFU/mL,RT-PCR和Western blot结果提示重组病毒感染RAW264.7细胞能正确表达ddVEGF-C。结论:成功构建了pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体,并建立了稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,为以VEGF-C基础的实验研究提供了新工具。
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关键词
ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser
逆转录病毒载体PT67
pLPCX
RAW264.7
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职称材料
题名
干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响
被引量：
3
1
作者
罗悦晨
周欣
姬文婕
孙海英
卢芮伊
姜铁民
李玉明
机构
天津医科大学
研究
生院
武警后勤学院附属医院心血管病研究所心脏中心
武警
后勤
学院
附属
医院
呼吸与重症医学科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期225-228,共4页
基金
国家自然科学基金(81070121
81170238)
+1 种基金
天津市自然科学基金(09ZCZDSF04200
11JCYBJC12000)
文摘
目的应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响。方法通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株。用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能。结果成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80%。CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(P<0.05);流式细胞术结果显示,抑制NaV1.9的表达使细胞吞噬能力降低(P<0.05);Transwell小室法结果显示,干扰NaV1.9的表达使细胞迁移能力减弱(P<0.05)。结论建立了稳定干扰NaV1.9的RAW264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低。
关键词
NAV1
9
RAW264
7
增殖
吞噬能力
迁移能力
Keywords
NaV]. 9
RAW264.7
proliferation
phagocytosis
migration
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
2
作者
杨国红
姬文婕
周欣
毕莹
李玉明
机构
天津医科大学
研究
生院
武警后勤学院附属医院心血管病研究所心脏中心
武警
后勤
学院
附属
医院
呼吸与危重症医学科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期677-679,共3页
基金
国家自然科学基金(81070121
81170238)
天津市卫生局重点项目(2010KZ122)
文摘
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验证,转染PT67包装细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达目的基因的包装细胞株,用反转录PCR(RT-PCR)和Western blot方法验证其在RAW 264.7细胞中的表达。结果:构建的pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体经双酶切和PCR鉴定正确,测序结果与ddVEGF-C序列一致,病毒滴度为2×107CFU/mL,RT-PCR和Western blot结果提示重组病毒感染RAW264.7细胞能正确表达ddVEGF-C。结论:成功构建了pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体,并建立了稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,为以VEGF-C基础的实验研究提供了新工具。
关键词
ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser
逆转录病毒载体PT67
pLPCX
RAW264.7
Keywords
△N△C/VEGF-C/Cys152Ser
retroviral vector
PT67
pLPCX
RAW 264. 7
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响
罗悦晨
周欣
姬文婕
孙海英
卢芮伊
姜铁民
李玉明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
杨国红
姬文婕
周欣
毕莹
李玉明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
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