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重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
1
作者
杨国红
姬文婕
+2 位作者
周欣
毕莹
李玉明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期677-679,共3页
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验...
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验证,转染PT67包装细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达目的基因的包装细胞株,用反转录PCR(RT-PCR)和Western blot方法验证其在RAW 264.7细胞中的表达。结果:构建的pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体经双酶切和PCR鉴定正确,测序结果与ddVEGF-C序列一致,病毒滴度为2×107CFU/mL,RT-PCR和Western blot结果提示重组病毒感染RAW264.7细胞能正确表达ddVEGF-C。结论:成功构建了pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体,并建立了稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,为以VEGF-C基础的实验研究提供了新工具。
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关键词
ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser
逆转录病毒载体PT67
pLPCX
RAW264.7
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题名
重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
1
作者
杨国红
姬文婕
周欣
毕莹
李玉明
机构
天津医科大学研究生院
武警
后勤
学院
附属
医院
心血管病研究所心脏中心
武警后勤学院附属医院呼吸与危重症医学科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第7期677-679,共3页
基金
国家自然科学基金(81070121
81170238)
天津市卫生局重点项目(2010KZ122)
文摘
目的:构建重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser(ddVEGF-C)逆转录病毒载体,建立稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,并验证其表达。方法:利用PCR从pSecTag-ddVEGF-C中获取大鼠ddVEGF-C基因,克隆到pLPCX逆转录病毒载体,经PCR、双酶切和测序验证,转染PT67包装细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达目的基因的包装细胞株,用反转录PCR(RT-PCR)和Western blot方法验证其在RAW 264.7细胞中的表达。结果:构建的pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体经双酶切和PCR鉴定正确,测序结果与ddVEGF-C序列一致,病毒滴度为2×107CFU/mL,RT-PCR和Western blot结果提示重组病毒感染RAW264.7细胞能正确表达ddVEGF-C。结论:成功构建了pLPCX-ddVEGF-C逆转录病毒载体,并建立了稳定表达ddVEGF-C的PT67包装细胞株,为以VEGF-C基础的实验研究提供了新工具。
关键词
ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser
逆转录病毒载体PT67
pLPCX
RAW264.7
Keywords
△N△C/VEGF-C/Cys152Ser
retroviral vector
PT67
pLPCX
RAW 264. 7
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组大鼠ΔNΔC/VEGF-C/Cys152Ser逆转录病毒载体的构建及表达
杨国红
姬文婕
周欣
毕莹
李玉明
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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