土槿乙酸调节特异性免疫应答的初步研究 被引量：5

1

作者 李覃 王火 +4 位作者 陈虹 刘晓光 杨金娜 曹波 高颖 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期184-189,共6页

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)对T细胞介导特异性免疫应答的调节作用及分子机制。方法以二硝基氟苯(2,4-Dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),局部外涂PB进行干预后检测... 目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)对T细胞介导特异性免疫应答的调节作用及分子机制。方法以二硝基氟苯(2,4-Dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),局部外涂PB进行干预后检测耳肿胀度,并进一步观察PB体外作用对DTH小鼠淋巴细胞及抗原特异性T细胞增殖水平的影响,流式细胞术分析DTH小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量,Western blot方法检测p38MAPK的磷酸化活性表达水平。结果 PB能够明显减轻DTH小鼠耳片厚度和重量的增加,体外作用亦能有效抑制DTH小鼠淋巴细胞以及抗原特异性T淋巴细胞增殖,其免疫抑制作用机制可能与促进Treg产生、上调p38MAPK信号通路有关。结论 PB体内外均具良好的免疫抑制活性,可通过增加Treg细胞、抑制效应细胞增殖等途径发挥作用,有望研发成为新型抗炎免疫调节剂。 展开更多

关键词 土槿乙酸 免疫抑制 迟发型超敏反应 T细胞 TREG P38MAPK

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土槿乙酸抑制接触性超敏反应的药效学研究及机制探讨 被引量：5

2

作者 李覃 董小青 +4 位作者 王翼腾 刘晓光 王伟 周欣 陈虹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1552-1557,共6页

目的观察中药土槿皮主要活性成分土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)免疫调节作用的药效学,初步探究其可能的分子机制。方法以二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠接触性超敏反应(contact hypersensitivity,CHS)模型,口服... 目的观察中药土槿皮主要活性成分土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)免疫调节作用的药效学,初步探究其可能的分子机制。方法以二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠接触性超敏反应(contact hypersensitivity,CHS)模型,口服不同剂量PB进行干预,检测小鼠耳肿胀度,计算脾脏指数,并以苏木精-伊红染色观察小鼠耳部皮肤炎性细胞浸润情况,综合评价PB免疫抑制作用的药效学。随后,进一步以Western blot方法检测PB对CHS小鼠Akt磷酸化活性及对PPARγ蛋白表达的影响,通过荧光素酶报告基因分析PPARγ的转录激活。结果结果显示,不同剂量PB能够明显抑制CHS小鼠耳肿胀,降低脾脏指数,减轻耳部皮肤炎症程度,其免疫抑制作用机制可能与促进PPARγ表达及其转录激活、下调Akt信号通路有关。结论 PB可能通过调节PPARγ相关的Akt信号通路发挥免疫调节作用,为研制用于炎症免疫性疾病的新型免疫调节剂奠定了基础。 展开更多

关键词 土槿乙酸 接触性超敏反应 药效学 炎症 PPARΓ 信号通路 PPARΓ

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尿路致病性大肠杆菌iha基因敲除及其对细菌生物膜形成的影响 被引量：3

3

作者 张晓雷 毛立群 +1 位作者 葛新 董小青 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期671-675,共5页

目的构建尿路致病性大肠杆菌(UPEC)W140菌株的黏附素基因iha缺陷株,分析iha基因缺失对UPEC生物膜形成的影响。方法采用Red重组系统的3种质粒(pKD46、pKD3、pCP20)敲除W140菌株的iha基因。pKD46表达λ噬菌体的3个重组蛋白,转入W140菌株... 目的构建尿路致病性大肠杆菌(UPEC)W140菌株的黏附素基因iha缺陷株,分析iha基因缺失对UPEC生物膜形成的影响。方法采用Red重组系统的3种质粒(pKD46、pKD3、pCP20)敲除W140菌株的iha基因。pKD46表达λ噬菌体的3个重组蛋白,转入W140菌株使其具有同源重组能力。以pKD3携带的两侧带有翻转酶结合位点(FRT)的氯霉素抗性基因替换目的基因iha,再利用表达翻转酶重组酶的质粒pCP20将FRT之间的氯霉素抗性基因删除,从而获得iha基因敲除菌株。采用结晶紫染色法比较野生菌株与基因敲除菌株的细菌生物膜形成差异。结果 PCR验证和DNA测序表明,UPEC W140菌株染色体上的iha基因被成功敲除,得到iha基因缺陷株UPEC W140Δiha。基因缺陷菌株与野生菌株相比生物膜形成能力降低(P<0.01)。结论 iha基因及其编码产物参与UPEC生物膜的形成,通过抑制该基因的表达有望为控制尿路感染提供新的靶点。 展开更多

关键词 大肠杆菌 生物膜 尿路感染 基因敲除

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Th17/Treg平衡在类风湿关节炎中作用的研究进展 被引量：45

4

作者 杨金娜 刘晓光 +2 位作者 李覃 陈虹 张予阳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1045-1048,共4页

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性多关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病。虽然目前对于RA的确切发病机制尚不明确,但一般认为和T细胞相关。最近研究发现调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和Th17细胞在RA的发... 类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性多关节滑膜炎为主要特征的自身免疫性疾病。虽然目前对于RA的确切发病机制尚不明确,但一般认为和T细胞相关。最近研究发现调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)和Th17细胞在RA的发生发展中发挥重要作用。Th17细胞能够分泌促炎症因子IL-17,通过诱导基质金属蛋白酶(ma-trix metallo proteinases,MMPs)和破骨细胞生成,促进骨滑膜炎症、骨和关节损伤;而Treg则通过释放抑制性细胞因子IL-10和TGF-β发挥免疫效应,调控RA中的炎症性免疫应答过程。单独TGF-β作用下诱导初始T细胞分化为Treg,而在TGF-β和IL-6共同作用下诱导初始T细胞分化为Th17细胞,因此,Th17和Treg细胞在特定的细胞因子微环境下可以相互转化。调节Th17/Treg之间的平衡可能成为治疗RA的新方法。该文将对Th17/Treg平衡在RA发生发展中的调节作用作一综述。 展开更多

关键词 类风湿性关节炎 TH17 Treg平衡 IL-17 TGF-Β ROR-γt FOXP3

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白藜芦醇调节STAT3与miR-21表达抗肝癌作用的初步研究 被引量：11

5

作者 李覃 王伟 +2 位作者 张实 邢杰 王增田 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期186-191,共6页

目的初步探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)的抗肝癌作用及其分子机制。方法建立移植性肝癌小鼠模型,口服给予Res进行干预,分析肿瘤生长状况。然后采用Real-time PCR、RT-PCR等方法检测转录因子Foxp3及微小核糖核酸-21(miR-21)的基因表达,W... 目的初步探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)的抗肝癌作用及其分子机制。方法建立移植性肝癌小鼠模型,口服给予Res进行干预,分析肿瘤生长状况。然后采用Real-time PCR、RT-PCR等方法检测转录因子Foxp3及微小核糖核酸-21(miR-21)的基因表达,Western blot分析信号转导子与转录激活子3(STAT3)的活性表达,流式细胞术观察CD4+CD25+T细胞数量的变化。结果与荷瘤对照组相比,Res给药组CD4+CD25+T细胞数量和Foxp3表达均明显降低,同时miR-21表达减少,该效应或许与其下调STAT3磷酸化活性水平密切相关。结论 Res可能通过调控STAT3信号分子及miR-21表达,抑制调节性T细胞产生,改变肿瘤微环境,从而发挥抗肝癌作用。 展开更多

关键词 白藜芦醇 肝癌 调节性T细胞 信号转导 miR一21 STAT3

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Th22细胞及其效应因子IL-22与炎症性皮肤病关系的研究进展 被引量：10

6

作者 张丽明 段姚尧 +3 位作者 董小青 任艳昕 李覃 陈虹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期905-907,共3页

Th22细胞是一种以IL-22为主要效应因子的新型Th细胞亚群,主要参与皮肤的自稳调节和病理状态,在炎症性皮肤病的病理生理过程中发挥重要作用。该文对Th22及其效应因子IL-22与银屑病、特应性皮炎、系统性红斑狼疮、系统性硬化症等炎症性皮... Th22细胞是一种以IL-22为主要效应因子的新型Th细胞亚群,主要参与皮肤的自稳调节和病理状态,在炎症性皮肤病的病理生理过程中发挥重要作用。该文对Th22及其效应因子IL-22与银屑病、特应性皮炎、系统性红斑狼疮、系统性硬化症等炎症性皮肤病的关系作一综述,为有效防治该类疾病提供新的研究思路和药物靶标。 展开更多

关键词 Th22 IL-22 银屑病 特应性皮炎 系统性红斑狼疮 系统性硬化症

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旋毛虫感染对过敏性哮喘小鼠肺泡灌洗液中总IgE、IL-4及IL-5的影响 被引量：1

7

作者 马萍 孙奕 +1 位作者 闫玉文 包春雨 《海南医学院学报》 CAS 2013年第10期1329-1332,共4页

目的:通过观察小鼠感染旋毛虫并诱发过敏性哮喘后,肺泡灌洗液中总IgE、IL-4及IL-5的变化,探讨旋毛虫感染对小鼠过敏性哮喘的影响。方法:将15只8周龄、BALB/c雌性小鼠,随机分为3组,每组各5只,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为单纯过敏性哮喘组,... 目的:通过观察小鼠感染旋毛虫并诱发过敏性哮喘后,肺泡灌洗液中总IgE、IL-4及IL-5的变化,探讨旋毛虫感染对小鼠过敏性哮喘的影响。方法:将15只8周龄、BALB/c雌性小鼠,随机分为3组,每组各5只,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为单纯过敏性哮喘组,Ⅲ组为感染旋毛虫并发哮喘组。Ⅲ组小鼠经口感染200～300条旋毛虫囊包幼虫,建立旋毛虫感染动物模型模型。28d后,以卵清白蛋白致敏(Ovalbumin,OVA)激发Ⅱ组和Ⅲ组小鼠,建立过敏性哮喘小鼠模型;56d后,取小鼠肺泡灌洗液,以ELISA双抗体夹心法法检测总IgE、IL-4及IL-5水平。结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3组小鼠总IgE水平分别为(43.70±29.49)、(387.49±148.32)、(102.50±49.55)ng/mL;IL-4水平分别为(169.16±10.00)L、(232.91±17.95)、(172.35±19.19)pg/L;IL-5水平分别为(12.86±1.78)、(23.85±5.51)、(15.76±4.54)ng/L,与Ⅱ组相比较,Ⅲ组肺泡灌洗液中总IgE、IL-4及IL-5水平降低(P<0.05)。结论:旋毛虫感染对过敏性哮喘小鼠肺泡灌洗液中总IgE、IL-4及IL-5的表达有抑制作用。 展开更多

关键词 旋毛虫 过敏性哮喘 总IGE IL-4 IL-5

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细胞因子在莱姆病中作用的研究进展 被引量：1

8

作者 李覃 邢杰 王增田 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期26-29,共4页

莱姆病是一种以硬蜱作为传播媒介、由伯氏疏螺旋体感染所致的人兽共患传染病,临床表现多样,严重影响人类健康和生活质量。有关细胞因子在莱姆病发生发展中的作用尚未完全阐明,但国内外已经取得一系列研究进展。明确不同类型细胞因子在... 莱姆病是一种以硬蜱作为传播媒介、由伯氏疏螺旋体感染所致的人兽共患传染病,临床表现多样,严重影响人类健康和生活质量。有关细胞因子在莱姆病发生发展中的作用尚未完全阐明,但国内外已经取得一系列研究进展。明确不同类型细胞因子在莱姆病中的作用不仅有利于揭示莱姆病发生发展的具体分子机制,还将大大促进细胞因子在莱姆病预防、诊断和药物治疗中的应用。现就细胞因子与莱姆病关系的研究作一综述。 展开更多

关键词 莱姆病 伯氏疏螺旋体 细胞因子 炎症 靶点 治疗

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LC促进人成骨样MG-63细胞增殖及相关机制的研究

9

作者 梁会岭 李正阳 +3 位作者 牛秀珑 王越 李培炎 李灵芝 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1121-1127,共7页

目的探讨大黄酸哌嗪雌酚酮(rhein-piperizinyl-estrone,LC)对人成骨样MG-63细胞增殖活性的影响及其相关分子机制。方法在原工作基础上,以兼有两种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究对象,分别应用MTT... 目的探讨大黄酸哌嗪雌酚酮(rhein-piperizinyl-estrone,LC)对人成骨样MG-63细胞增殖活性的影响及其相关分子机制。方法在原工作基础上,以兼有两种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究对象,分别应用MTT法和流式细胞术,观察LC对MG-63细胞的增殖活性和细胞周期分布的影响。利用前期构建的ERα或ERβ稳定高抑制表达的MG-63细胞株,应用免疫印迹技术,对LC的作用机制和可能的信号通路进行研究。结果与对照组相比,LC可明显促进MG-63细胞的增殖活性,该作用具有剂量依赖性;可调节细胞周期分布,使G1期细胞比例减少、G2+S期细胞比例增加,进而促进细胞生长。进一步研究发现,ER阻断剂ICI 182,780可完全阻断LC的促增殖作用,提示LC是经ER途径对MG-63的增殖活性发挥作用的;利用ERα或ERβ高抑制表达的稳定细胞株,证实LC的促增殖作用是由ERα和ERβ共同介导的;该作用与Ras/MEK/ERK、PI3K/Akt信号通路的激活密切相关。结论 LC可经ERα和ERβ共同介导对人成骨细胞的促增殖作用,有望成为治疗绝经后骨质疏松症的新型骨靶向雌激素类药物。 展开更多

关键词 大黄酸哌嗪雌酚酮(LC) 人成骨细胞 MG-63 增殖 雌激素受体

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IL-6经PI3K/Akt通路诱导卵巢癌细胞对他莫西芬耐药 被引量：11

10

作者 赵雅瑮 孙旸 +5 位作者 黄素辉 杨静 王越 李玲 郭小芹 李艳秋 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期601-607,共7页

目的:探讨IL-6诱导卵巢癌细胞对他莫西芬(tamoxifen,TAM)耐药的分子机制。方法:构建内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞系和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌CAOV-3细胞,50 ng/ml外源性IL-6预处理A2780细胞(A2780/pre IL-6细胞),Western ... 目的:探讨IL-6诱导卵巢癌细胞对他莫西芬(tamoxifen,TAM)耐药的分子机制。方法:构建内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞系和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌CAOV-3细胞,50 ng/ml外源性IL-6预处理A2780细胞(A2780/pre IL-6细胞),Western blotting检测内/外源IL-6对卵巢癌细胞ERαSer167位磷酸化水平的影响;IL-6与PI3K抑制剂Wortmannin单独或联合作用于A2780细胞,Western blotting检测其对A2780细胞Akt磷酸化和ERα磷酸化的影响;MTT法检测Wortmannin和内/外源IL-6对A2780细胞TAM敏感性的影响;荧光素酶报告基因检测卵巢癌细胞ERα的转录活性,并分析其可能涉及的信号通路。结果:外源性及内源性过表达IL-6可明显促进A2780细胞ERαSer167位点磷酸化水平(均P<0.01),而内源性抑制IL-6表达则可降低CAOV-3细胞ERαSer167位点的磷酸化水平(P<0.01);Wortmannin可阻断IL-6诱导的A2780细胞对TAM的耐药及ERα的磷酸化(P<0.05);IL-6可促进细胞ERα的转录活性(P<0.01),而Wortmannin并不能阻断IL-6对ERα的转录活性的影响(P>0.05)。结论:IL-6可经PI3K/Akt通路引起ERα磷酸化从而活化ER信号通路,进而诱导卵巢癌细胞对TAM耐药。 展开更多

关键词 卵巢癌 白细胞介素-6 他莫西芬 耐药 雌激素受体 PI3K/AKT通路

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红景天苷对成骨细胞的作用及相关分子机制研究 被引量：5

11

作者 梅国华 郭小芹 +2 位作者 陈京京 王越 李正阳 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2017年第9期916-919,共4页

目的:研究红景天苷(SAL)对人成骨样MG-63细胞增殖、分化和HIF-1α依赖的VEGF表达的影响及相关分子机制。方法:采用MTS法、流式细胞术分析、RT-PCR、ELISA、Western blot等技术观察SAL对MG-63细胞增殖、分化和HIF-1α依赖的VEGF表达的影... 目的:研究红景天苷(SAL)对人成骨样MG-63细胞增殖、分化和HIF-1α依赖的VEGF表达的影响及相关分子机制。方法:采用MTS法、流式细胞术分析、RT-PCR、ELISA、Western blot等技术观察SAL对MG-63细胞增殖、分化和HIF-1α依赖的VEGF表达的影响,进一步探讨其相关分子机制。结果:SAL通过调控MG-63细胞的周期分布及上调Runx2和Osterix表达促进成骨细胞的增殖和分化。另外,SAL可明显上调下游靶基因VEGF的表达。结论:SAL可显著促进成骨样MG-63细胞的增殖、分化以及HIF-1α依赖的VEGF的表达,进而促进骨和血管新生。 展开更多

关键词 红景天苷 成骨细胞 低氧诱导因子 血管内皮生长因子

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NY-ESO-1/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达、纯化及鉴定 被引量：1

12

作者 汤蕾 宋朝君 +4 位作者 孙元杰 李娜 魏玉英 孙奕 杨琨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1094-1097,共4页

目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NY-ESO-1/GST进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增NY-ESO-1基因片段,经... 目的:构建肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1与GST融合基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并对融合蛋白NY-ESO-1/GST进行纯化和初步鉴定。方法:设计针对NY-ESO-1的特异性引物,采用聚合酶链反应(PCR)从睾丸组织的cDNA文库扩增NY-ESO-1基因片段,经上下游引物所引入的EcoR I和Xho I双酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T1中GST标签的下游,构建重组表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST融合蛋白,经不同浓度尿素洗脱纯化后,表达产物通过SDS-PAGE和Western blot法进行鉴定。结果:重组质粒经限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切鉴定和IPTG诱导表达NY-ESO-1/GST的SDS-PAGE分析表明,表达产物的相对分子质量(Mr)为44 000,与理论值相符,并主要以包涵体形式存在,灰度扫描分析显示融合蛋白表达量占菌体蛋白总量的90%,Western blot结果证实该NY-ESO-1/GST可与抗GST单克隆抗体(mAb)发生特异性结合反应,提示为融合蛋白。结论:成功构建了NY-ESO-1基因原核表达载体pGEX-4T1-NY-ESO-1,利用大肠杆菌表达系统,获得了较高纯度的包涵体形式NY-ESO-1/GST融合蛋白。 展开更多

关键词 NY.ESO-1 GST 融合蛋白 原核表达 纯化

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