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PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
1
1
作者
李辉
吴旭东
+1 位作者
龚燕华
阴彬
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期71-73,共3页
目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128...
目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。
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关键词
PCGF1
单克隆抗体
杂交瘤技术
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职称材料
题名
PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
1
1
作者
李辉
吴旭东
龚燕华
阴彬
机构
武警医学院组织学与胚胎学教研室
中国
医学
科
学院
基础
医学
研究所
医学
分子生物学国家重点实验室
武警医学院
生物化学
教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期71-73,共3页
基金
国家自然科学基金面上项目(30971614)
医学分子生物学国家重点实验室外部课题(2010年)
文摘
目的:原核表达人表观抑制因子Polycomb家族成员PCGF1蛋白片段,并制备其鼠源单克隆抗体(mAb)。方法:应用PCR技术扩增人PCGF1基因编码区部分序列(CDS区第382～567bp的DNA片段)并插入到pET-32a(+)质粒中,在大肠杆菌BL21中进行His-PCGF1-128/189融合蛋白(简写为His-N128/189)的原核表达。利用所表达的融合蛋白中含有的6×His标签进行亲和层析纯化。用所获得的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术,分别通过ELISA和Western blot法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,用免疫双向扩散法鉴定mAb的Ig亚类。取1株杂交瘤细胞按照常规方法制备腹水,利用Millipore公司的mAb纯化试剂盒纯化mAb,用Western blot法检测mAb的效价。结果:表达纯化了重组人His-N128/189蛋白;筛选出2株可稳定分泌特异性抗人PCGF1 mAb的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白类型均为IgG1类;通过腹水制备和纯化获得高效价(1∶6000)、高特异性的鼠抗人PCGF1 mAb。结论:原核表达的PCGF1片段融合蛋白可以被纯化,并具有足够的蛋白免疫原性,所制备的相应mAb可特异识别内源性和外源性PCGF1蛋白,可以运用于PCGF1基因功能的研究。
关键词
PCGF1
单克隆抗体
杂交瘤技术
Keywords
PCGF1
monoclonal antibody
hybddomatechnique
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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被引量
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1
PCGF1蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定
李辉
吴旭东
龚燕华
阴彬
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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