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体细胞核移植生产梅山猪 被引量:5
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作者 华再东 郑新民 +9 位作者 魏庆信 肖红卫 刘西梅 华文君 郭帅 张立苹 毕延震 任红艳 岑文 华升 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第10期192-197,共6页
本研究以中国优良地方品种梅山猪为材料,采用胰酶消化法获得猪胎儿成纤维细胞,通过使用Y染色体SRY基因引物SRY-1、SRY-2进行PCR扩增,结果发现,雄性胎儿样本能扩增出250bp的Y染色体特异性基因片段,而雌性胎儿样本未扩增出此条带;G1、G2... 本研究以中国优良地方品种梅山猪为材料,采用胰酶消化法获得猪胎儿成纤维细胞,通过使用Y染色体SRY基因引物SRY-1、SRY-2进行PCR扩增,结果发现,雄性胎儿样本能扩增出250bp的Y染色体特异性基因片段,而雌性胎儿样本未扩增出此条带;G1、G2、G3、G4和G5代的融合效率差异不显著(P>0.05),但G5代作为供体细胞核移植的重组胚胎卵裂率显著高于G1、G2、G3和G4代(P<0.05);使用G5代的胎儿成纤维细胞作为供核细胞,通过手术移植的方法,将重构胚胎移植到二元后备母猪体内,结果成功地获得了体细胞克隆梅山仔猪,并且仔猪全部为雄性胎儿,说明该性别鉴定方法不但操作简单,而且准确度高;经微卫星DNA多态性鉴定,确定克隆猪来自供核细胞,与代孕母猪无亲缘关系。本研究将为中国优质猪品种改良、保种、性别控制及建立人类疾病模型等研究提供有效可行的方法,为批量生产克隆优秀种猪提供了坚实的理论基础。 展开更多
关键词 梅山猪 克隆猪 核移植 猪胎儿成纤维细胞
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猪卵巢采集月份、保存温度及时间对其卵母细胞体外成熟的影响 被引量:2
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作者 李莉 华再东 +3 位作者 郭帅 刘西梅 华升 郑新民 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第23期5805-5808,共4页
为了探讨猪卵巢采集月份、保存温度及保存时间对卵母细胞体外成熟的影响,对不同月份、不同保存温度及不同保存时间的猪卵巢采用抽吸法获得卵丘卵母细胞复合体(COCs),体外培养统计其第一极体排出情况.结果表明,从屠宰场所取卵巢的COCs... 为了探讨猪卵巢采集月份、保存温度及保存时间对卵母细胞体外成熟的影响,对不同月份、不同保存温度及不同保存时间的猪卵巢采用抽吸法获得卵丘卵母细胞复合体(COCs),体外培养统计其第一极体排出情况.结果表明,从屠宰场所取卵巢的COCs数5~7月和8~10月期间显著(P<0.05)高于2~4月和11月至次年1月,而且其卵母细胞体外核成熟率在5~7月和8~10月期间也显著(P<0.05)高于2~4月和11月至次年1月;采集的猪卵巢分别置于15、20、25、30和35℃的生理盐水中2h,收集卵巢的COCs数差异不显著(P>0.05),但是存放在30和35℃的生理盐水中的卵巢的卵母细胞体外成熟率极显著(P<0.01)高于其他3组;置于35℃生理盐水中2、4、6、8h的卵巢的COCs数差异不显著(P>0.05),但存放2h的卵巢的卵母细胞体外成熟率显著(P<0.05)高于存放4、6和8h的. 展开更多
关键词 猪卵巢 卵母细胞 月份 温度 时间 体外成熟
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转基因猪试验场标准化饲养管理技术体系探讨 被引量:1
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作者 李莉 华再东 +2 位作者 郭帅 郑新民 华升 《湖北农业科学》 北大核心 2014年第17期4112-4114,4119,共4页
转基因猪试验场科学的生产管理和合理有效的疾病防控措施是转基因猪试验研究、商业化生产应用及保障人们身体健康的前提条件。对转基因猪群的饲养管理、疫病防控、繁殖、育种等技术环节进行了简要综述,为制定规范化、标准化的转基因猪... 转基因猪试验场科学的生产管理和合理有效的疾病防控措施是转基因猪试验研究、商业化生产应用及保障人们身体健康的前提条件。对转基因猪群的饲养管理、疫病防控、繁殖、育种等技术环节进行了简要综述,为制定规范化、标准化的转基因猪试验场饲养管理技术体系提供参考。 展开更多
关键词 转基因猪 饲养管理 技术体系
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体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究
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作者 华再东 刘西梅 +2 位作者 毕延震 华升 郑新民 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期394-398,421,共6页
以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,... 以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养10 d处理组,采用卵周间隙核移植重构胚的卵裂率(82.35%和79.07%)差异不显著(P>0.05);体外培养42~44 h卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的重构胚胎,其卵裂率(81.11%和76.80%)差异不显著(P>0.05);将卵周间隙注射法构建重构胚在0~1 h,2~4 h和6~8 h进行融合/激活操作,前2组重构胚卵裂率(75.61%和83.07%)无显著差异(P>0.05),但显著高于第3组(60.00%)的卵裂率(P<0.05). 展开更多
关键词 供核细胞 融合激活时间 转基因重构胚
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