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人Gal-9基因的克隆及在CHO细胞中的表达 被引量:1
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作者 郭凯文 邱文洪 +1 位作者 许楚娟 易路阳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期775-778,共4页
目的:构建β-半乳糖苷结合凝集素-9(Gal-9)的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并检测其表达。方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Gal-9基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性... 目的:构建β-半乳糖苷结合凝集素-9(Gal-9)的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并检测其表达。方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Gal-9基因,插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGal-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法检测Gal-9的表达,MTT法检测Gal-9对同种异体淋巴细胞增殖的影响。结果:DNA测序和酶切鉴定证明Gal-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGal-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot和RT-PCR方法,在分子和蛋白水平证实Gal-9的表达,MTT法检测显示,Gal-9明显抑制同种异体淋巴细胞增殖反应,平均抑制率达85.43%。结论:成功构建pGal-9的真核表达载体,证实其在CHO细胞中可以成功表达,并抑制同种异体淋巴细胞增殖反应。 展开更多
关键词 Gal-9 构建 表达 真核表达载体
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survivin反义寡核苷酸在体外诱导胰癌细胞凋亡 被引量:1
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作者 熊平源 郭凯文 唐朝晖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期832-834,共3页
目的:探讨survivin反义核酸对胰腺癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响。方法:用脂质体瞬时转染法介导survivin反义核苷酸处理胰腺癌Panc-1细胞后,MTT试验测定转染细胞的相对存活率,RT-PCR检测survivin mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-... 目的:探讨survivin反义核酸对胰腺癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响。方法:用脂质体瞬时转染法介导survivin反义核苷酸处理胰腺癌Panc-1细胞后,MTT试验测定转染细胞的相对存活率,RT-PCR检测survivin mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-1细胞的凋亡诱导作用。结果:转染survivin反义核酸的Panc-1细胞增殖明显受抑制,与对照进行比较,具有显著性差异(P<0.05);经琼脂糖凝胶电泳,转染survivin反义核酸的Panc-1细胞可见到DNA梯形条带,而对照细胞未见到。结论:survivin反义核酸能够诱导Panc-1细胞凋亡。 展开更多
关键词 反义RNA SURVIVIN 胰腺癌 凋亡
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重组人半乳糖苷结合凝集素-9质粒的构建及表达
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作者 郭凯文 邱文洪 +3 位作者 艾永循 钟伟 易路阳 宰文欣 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期177-180,共4页
目的构建人半乳糖苷结合凝集素-9(Galectin-9)的真核表达质粒pGalectin-9,并检测其表达。方法通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Galectin-9基因,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确... 目的构建人半乳糖苷结合凝集素-9(Galectin-9)的真核表达质粒pGalectin-9,并检测其表达。方法通过DNA重组技术和PCR方法从人外周血单个核细胞克隆Galectin-9基因,插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,通过PCR、酶切及测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pGalectin-9瞬时转染中国仓鼠卵巢(Chinesehamster ovary,CHO)细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法检测Galectin-9的表达。结果 DNA测序和酶切鉴定证明Galectin-9基因正确克隆至pcDNA3.1(+)的多克隆位点;以重组质粒pGalectin-9瞬时转染CHO细胞,通过Western blot、RT-PCR和间接免疫荧光方法,在分子和细胞水平证实Galectin-9的表达。结论成功构建pGa-lectin-9的重组质粒,并证实其在CHO细胞中可以成功表达。 展开更多
关键词 半乳糖苷结合凝集素-9 构建 表达 重组质粒
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Survivin特异性siRNA增强人胰癌细胞株Panc-1对顺铂的敏感性
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作者 邱文洪 郭凯文 +1 位作者 宋文剑 沈关心 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期600-602,606,共4页
目的探讨Survivin特异性siRNA对人胰癌细胞株Panc-1顺铂敏感性的影响。方法体外将Survivin特异性siRNA表达载体pSurvivin-siRNA转染人胰癌细胞株Panc-1,应用RT-PCR、蛋白印迹法(Western blot)检测转染siRNA后Panc-1细胞Survivin基因和... 目的探讨Survivin特异性siRNA对人胰癌细胞株Panc-1顺铂敏感性的影响。方法体外将Survivin特异性siRNA表达载体pSurvivin-siRNA转染人胰癌细胞株Panc-1,应用RT-PCR、蛋白印迹法(Western blot)检测转染siRNA后Panc-1细胞Survivin基因和蛋白的表达变化,应用MTT法检测干扰Survivin后Panc-1细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染Survivin特异性siRNA后,Panc-1细胞Survivin基因和蛋白的表达水平明显下降;顺铂对Panc-1细胞的半数抑制量从(11.9927±1.1470)μg/ml下降到(1.2382±0.0857)μg/ml,Panc-1细胞对顺铂的敏感性增加了9.69倍。结论Survivin特异性siRNA抑制Survivin表达,能增加人胰癌细胞株Panc-1对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 SURVIVIN 人胰腺癌 siRNA 顺铂
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