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基于CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒
被引量：
3
1
作者
张华伟
周明光
+4 位作者
侯真真
朱娴静
郝根喜
金建云
徐高原
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期206-212,共7页
为构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),采用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术,对从湖北某猪场送检的病料中分离到的PRV HB2017株进行基因编辑,并利用蚀斑纯化等方法获取基因缺失株。随后,采用PCR、基因测序、...
为构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),采用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术,对从湖北某猪场送检的病料中分离到的PRV HB2017株进行基因编辑,并利用蚀斑纯化等方法获取基因缺失株。随后,采用PCR、基因测序、间接免疫荧光试验、生长曲线测定及安全性和效力试验对基因缺失株的特性进行初步研究。结果显示:PRV HB2017株的TK、gE和gI基因已缺失,缺失毒株PRV HB2017ΔTKΔgE/gI与亲本毒株PRV HB2017株在PK-15细胞中的生长曲线差异不明显且具有较高的病毒滴度;PRV HB2017ΔTKΔgE/gI株传代至30代,TK和gE/gI基因缺失部分序列稳定,不能恢复;PRV HB2017ΔTKΔgE/gI株对仔猪是安全的;将该基因缺失株以10^(6.0) TCID_(50)和10^(7.0) TCID_(50)的病毒剂量接种仔猪,可保护仔猪免受10^(8.0) TCID_(50)病毒剂量强毒的攻击。
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关键词
伪狂犬病病毒
CRISPR/Cas9
同源重组
基因缺失
基因工程疫苗
病毒编辑
疫苗研制
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职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒
被引量：
3
1
作者
张华伟
周明光
侯真真
朱娴静
郝根喜
金建云
徐高原
机构
武汉科前生物股份有限公司研发中心
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期206-212,共7页
基金
武汉市科技计划项目(2019020702011378)
武汉东湖高新区‘3551光谷人才计划’
湖北省技术创新专项重大项目(2017ABA056)。
文摘
为构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),采用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术,对从湖北某猪场送检的病料中分离到的PRV HB2017株进行基因编辑,并利用蚀斑纯化等方法获取基因缺失株。随后,采用PCR、基因测序、间接免疫荧光试验、生长曲线测定及安全性和效力试验对基因缺失株的特性进行初步研究。结果显示:PRV HB2017株的TK、gE和gI基因已缺失,缺失毒株PRV HB2017ΔTKΔgE/gI与亲本毒株PRV HB2017株在PK-15细胞中的生长曲线差异不明显且具有较高的病毒滴度;PRV HB2017ΔTKΔgE/gI株传代至30代,TK和gE/gI基因缺失部分序列稳定,不能恢复;PRV HB2017ΔTKΔgE/gI株对仔猪是安全的;将该基因缺失株以10^(6.0) TCID_(50)和10^(7.0) TCID_(50)的病毒剂量接种仔猪,可保护仔猪免受10^(8.0) TCID_(50)病毒剂量强毒的攻击。
关键词
伪狂犬病病毒
CRISPR/Cas9
同源重组
基因缺失
基因工程疫苗
病毒编辑
疫苗研制
Keywords
pseudorabies virus
CRISPR/Cas9
homologous recombination
gene deletion
genetically engineering vaccine
virus editing
vaccine development
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
基于CRISPR/Cas9介导的同源重组技术构建TK、gE和gI基因缺失的伪狂犬病病毒
张华伟
周明光
侯真真
朱娴静
郝根喜
金建云
徐高原
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
3
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