生物类专业课程融入课程思政的教学改革和创新——以微生物肥料生产技术课程为例

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作者 黄芳一 张玮 +4 位作者 王海波 姚莉娟 涂绍勇 周念波 郭云贵 《中南农业科技》 2024年第2期229-232,共4页

专业课程是思政建设的基本载体。结合生物类专业课程的理论性、工程性和实践性等特点,阐明了课程思政建设与专业人才培养目标、课程目标之间的关系,并以微生物肥料生产技术课程为例,论述了生物类专业课程思政的实施应从强化顶层设计建... 专业课程是思政建设的基本载体。结合生物类专业课程的理论性、工程性和实践性等特点,阐明了课程思政建设与专业人才培养目标、课程目标之间的关系,并以微生物肥料生产技术课程为例,论述了生物类专业课程思政的实施应从强化顶层设计建立制度保障机制,利用“四结合、一根据”原则深度挖掘专业课程思政资源,有机融入课程思政元素等途径入手,为同类高校的专业课程和理工科专业的课程思政建设提供参考和借鉴。 展开更多

关键词 生物类专业 课程思政 教学改革 创新 微生物肥料 生产技术

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免疫学和分子生物学技术在猪传染性胃肠炎诊断中的应用进展 被引量：14

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作者 谢立兰 方六荣 +3 位作者 方华为 张军林 安康 肖少波 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第2期56-62,共7页

近年来,与猪传染性胃肠炎(TGE)类似的肠道传染病日益增多,以病理组织学观察和临床症状为主要指标的传统方法已不能进行准确的判断,众多学者建立了大量的免疫学和分子生物学新方法。文章就主要免疫学技术(病毒中和实验、酶联免疫吸附试... 近年来,与猪传染性胃肠炎(TGE)类似的肠道传染病日益增多,以病理组织学观察和临床症状为主要指标的传统方法已不能进行准确的判断,众多学者建立了大量的免疫学和分子生物学新方法。文章就主要免疫学技术(病毒中和实验、酶联免疫吸附试验、胶体金技术)和分子生物学技术(反转录-聚合酶链式反应、反转录环介导等温扩增技术、基于纳米颗粒和DNA探针技术的超灵敏PCR方法)在TGE诊断中的最新应用研究进行了综述,以期为进一步防控该病提供参考。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎 免疫学技术 分子生物学技术 诊断

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植物原生质体在分子细胞生物学研究中的应用 被引量：8

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作者 肖政 徐艳琴 +1 位作者 罗念 周银 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期576-582,共7页

植物原生质体是去除了细胞壁的裸露细胞,其具有细胞全能性,现广泛应用于植物分子细胞生物学的研究中,可以大大缩减实验周期,并有助于得到体内实验的实时检测数据。该文除了介绍植物原生质体的提取和纯化方法外,还对国内外利用各种植物... 植物原生质体是去除了细胞壁的裸露细胞,其具有细胞全能性,现广泛应用于植物分子细胞生物学的研究中,可以大大缩减实验周期,并有助于得到体内实验的实时检测数据。该文除了介绍植物原生质体的提取和纯化方法外,还对国内外利用各种植物的原生质体进行细胞瞬时转化、亚细胞定位、细胞融合和大分子复合物相互作用等试验进行了总结和讨论。植物原生质体还可用于基因表达模式的实时检测,并作为生物反应器的受体细胞进行代谢物的体外生产。此外,还对当前该技术所面临的瓶颈进行了分析,为植物原生质体在分子细胞生物学领域的应用提供帮助,为技术的优化和推广提供参考。 展开更多

关键词 植物原生质体 瞬时转化 亚细胞定位 细胞融合 实时检测

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盐芥CAS基因的生物信息学分析及在盐胁迫下的表达 被引量：2

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作者 余璐璐 曹中权 +3 位作者 刘龙山 范崎 黄格格 徐飞 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第7期25-29,共5页

盐芥(Thellungiella salsuginea)是一种新型的模式植物,具耐盐特性,但盐芥的抗盐机理仍不清楚。本研究对盐芥氰丙氨酸合酶(cyanoalanine synthase,CAS)基因进行了生物信息学分析,并检测了盐胁迫条件下CAS基因的表达变化。生物信息学分... 盐芥(Thellungiella salsuginea)是一种新型的模式植物,具耐盐特性,但盐芥的抗盐机理仍不清楚。本研究对盐芥氰丙氨酸合酶(cyanoalanine synthase,CAS)基因进行了生物信息学分析,并检测了盐胁迫条件下CAS基因的表达变化。生物信息学分析表明,编码盐芥CAS合酶的基因含有9个外显子和8个内含子,CAS合酶偏酸性,主要定位于细胞质中起作用。启动子分析表明,盐芥CAS基因启动子上有多个盐胁迫响应元件。进一步的盐胁迫试验表明,盐芥植株在200 mmol/L Na Cl胁迫条件下表现出较强的抗性,CAS基因受胁迫诱导上升。盐胁迫处理后9 h,CAS基因表达高出对照组材料2倍,氰化氢(HCN)含量被降低到较低水平。这些结果表明,CAS基因在盐芥胁迫应答反应中起重要作用。 展开更多

关键词 盐芥 氰丙氨酸合酶 盐胁迫 基因分析 基因表达 生物信息学

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稀有菊花品种组织培养条件的优化

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作者 王海燕 刘杨 +1 位作者 徐飞 余璐璐 《现代园艺》 2025年第23期80-83,共4页

以‘凤凰振羽’‘波澜壮阔’‘紫云飞月’和‘秀染露珠’4个稀有菊花品种为材料,选取植株不同生长部位,通过植物组织培养技术探索其最佳快繁方法。结果发现,菊花外植体诱导愈伤的难易程度为花苞>叶片>叶柄>茎段,菊花品种的诱... 以‘凤凰振羽’‘波澜壮阔’‘紫云飞月’和‘秀染露珠’4个稀有菊花品种为材料,选取植株不同生长部位,通过植物组织培养技术探索其最佳快繁方法。结果发现,菊花外植体诱导愈伤的难易程度为花苞>叶片>叶柄>茎段,菊花品种的诱导难易程度为‘紫云飞月’>‘秀染露珠’>‘波澜壮阔’>‘凤凰振羽’。通过进一步在分化培养基中添加不同浓度的矮壮素发现,矮壮素能显著提高愈伤组织的生根数量;且在常用培养剂配方中添加不同浓度矮壮素的同时,配合常见植物激素使用,能显著促进菊花根的分化和叶片生长。本研究成果为菊花的组织培养以及商业化快速育苗提供了一定理论和技术支持。 展开更多

关键词 菊花 组织培养 矮壮素 正交试验

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兰属植物组织培养研究进展 被引量：7

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作者 王松太 曾丽婷 +1 位作者 方中明 周银 《黑龙江农业科学》 2019年第10期144-151,共8页

利用组织培养技术能够进行兰属植物的快速繁殖,也能保持其优良品性,加速育种进程。近些年,兰属植物在组织培养方面已经取得较大进展。为促进兰属植物的组织培养和产业化大规模生产,本文以兰属植物中的春兰、墨兰、建兰、寒兰和蕙兰等为... 利用组织培养技术能够进行兰属植物的快速繁殖,也能保持其优良品性,加速育种进程。近些年,兰属植物在组织培养方面已经取得较大进展。为促进兰属植物的组织培养和产业化大规模生产,本文以兰属植物中的春兰、墨兰、建兰、寒兰和蕙兰等为代表,从外植体选择、培养基选择及激素、有机添加物等方面进行总结与讨论,以期为兰属植物的组织培养和产业化大规模生产提供有效的参考。 展开更多

关键词 兰属 组织培养 根状茎 增殖 分化

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猪ROCK1基因克隆、序列分析及时空表达研究

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作者 冯小婷 朱记平 +1 位作者 张蕊蕊 李毅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期571-580,共10页

为进一步获得猪肉质性状候选基因Rho相关激酶1(Rho-associated,coiled-coil containing protein kinase1,ROCK1)的序列特征、生物学功能及时空表达规律等信息,本研究通过PCR、SMARTer RACE PCR的方法克隆了猪ROCK1基因,应用生物信息学... 为进一步获得猪肉质性状候选基因Rho相关激酶1(Rho-associated,coiled-coil containing protein kinase1,ROCK1)的序列特征、生物学功能及时空表达规律等信息,本研究通过PCR、SMARTer RACE PCR的方法克隆了猪ROCK1基因,应用生物信息学方法分析该基因的蛋白质序列在不同物种中的进化关系,并采用RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法检测其在不同组织和不同猪种背最长肌不同发育阶段的表达。结果显示,ROCK1基因有2个转录本,包含4 065bp的开放阅读框(ORF),编码1 354个氨基酸;猪ROCK1基因ORF序列与人、小鼠和大鼠的ORF序列的同源性分别为95%、91%和91%,相应的氨基酸序列同源性分别为98%、96%和94%,该蛋白在不同物种间高度保守;ROCK1基因的组织分布较广泛,不同发育阶段在同一组织中的表达会发生变化;胚胎期ROCK1基因在梅山猪背最长肌中的表达极显著高于大白猪(P<0.01),出生后ROCK1基因在2个猪种背最长肌中的表达无显著差异(P>0.05)。本试验结果为研究ROCK1基因在猪骨骼肌发育中的生物学功能及其分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 猪 ROCK1基因 克隆 表达

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抑制交替氧化酶对水稻稻瘟菌防治的影响初探

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作者 徐飞 刘杨 +1 位作者 许健成 余璐璐 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2908-2916,共9页

水稻(Oryza sativa L.)是世界主要粮食作物之一。中国作为世界上最大的稻米生产国,每年因稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病受到广泛关注。稻瘟病在水稻整个生育期中均可发生,从而引起水稻大幅度减产,甚至颗粒无收。值得注意的是... 水稻(Oryza sativa L.)是世界主要粮食作物之一。中国作为世界上最大的稻米生产国,每年因稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病受到广泛关注。稻瘟病在水稻整个生育期中均可发生,从而引起水稻大幅度减产,甚至颗粒无收。值得注意的是,交替氧化酶(alternative oxidase,AOX)广泛存在于植物和真菌中,是线粒体呼吸电子传递链中的末端氧化酶,被证实参与了胁迫条件下植物的生长发育调节以及真菌胁迫响应等。本文比较分析了水稻AOX和稻瘟菌AOX蛋白结构差异,并利用AOX抑制剂开展稻瘟菌防治试验。结果表明,水稻AOX和稻瘟菌AOX蛋白的双铁催化活性中心的氨基酸残基相对保守,但其在泛醌通道大小、氨基酸组成以及形成的疏水口袋等方面有较大差异。通过AOX抑制剂处理可明显减缓稻瘟菌菌丝的生长,并减轻水稻叶片稻瘟菌病害症状。本研究表明,AOX可作为有效靶标用于抑制稻瘟菌,在水稻稻瘟菌病害防治方面具有潜在应用价值。 展开更多

关键词 水稻 交替氧化酶 稻瘟菌 病害防治 抑制剂

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DEAD-box解旋酶21对猪传染性胃肠炎病毒复制的调控作用 被引量：1

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作者 谢立兰 尹杰 +1 位作者 黄冬蛾 李么明 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期215-222,共8页

旨在探究DEAD-box解旋酶21(DDX21)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)复制的调控作用。首先通过蛋白免疫印迹(Western Blot)分析了TGEV感染对DDX21表达的影响;进一步构建了猪DDX21真核表达质粒以及建立稳定敲低DDX21的PK-15细胞系,运用荧光定量... 旨在探究DEAD-box解旋酶21(DDX21)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)复制的调控作用。首先通过蛋白免疫印迹(Western Blot)分析了TGEV感染对DDX21表达的影响;进一步构建了猪DDX21真核表达质粒以及建立稳定敲低DDX21的PK-15细胞系,运用荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹、间接免疫荧光(IFA)和半数细胞培养物感染量(TCID 50)探究外源过表达DDX21及敲低DDX21对TGEV体外复制的调控作用;构建一系列DDX21截短突变体真核表达质粒,鉴定了DDX21调控TGEV增殖的关键功能域。Western Blot分析显示,在TGEV WH-1株感染早期,PK-15细胞内源性DDX21蛋白的表达水平显著上调;RT-qPCR、Western Blot、IFA和TCID 50试验显示,超表达DDX21可以显著提高TGEV N基因的mRNA水平、N蛋白的表达及病毒滴度,且呈剂量依赖性,其601-784 aa区域是其影响TGEV复制的关键;与阴性对照相比,在相应DDX21敲低细胞系中TGEV的增殖显著被抑制,而回补试验逆转了DDX21敲低细胞系中TGEV的滴度。该研究首次揭示了猪DDX21对TGEV增殖的促进作用并鉴定了其调控TGEV复制的关键结构域,为今后研究DDX21蛋白的功能及TGEV的致病机理提供了理论依据。 展开更多

关键词 猪传染性胃肠炎病毒 DEAD-box解旋酶21 宿主蛋白 病毒复制

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CsAHL25通过影响CsHB1、LEC1/B3基因表达调控柑橘体细胞胚发生

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作者 叶长宁 徐梦梦 +2 位作者 刘兰兰 付玉洁 葛晓霞 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期579-589,共11页

【目的】基于柑橘体细胞胚发生相关基因CsHB1的启动子筛选其上游转录因子,以期为柑橘体细胞胚发生分子机制研究提供可靠的候选基因。【方法】利用CsHB1启动子(-1018~-558 bp)进行酵母单杂筛库实验,筛选出CsHB1上游转录因子CsAHL25;利用... 【目的】基于柑橘体细胞胚发生相关基因CsHB1的启动子筛选其上游转录因子,以期为柑橘体细胞胚发生分子机制研究提供可靠的候选基因。【方法】利用CsHB1启动子(-1018~-558 bp)进行酵母单杂筛库实验,筛选出CsHB1上游转录因子CsAHL25;利用亚细胞定位实验,确定CsAHL25在细胞中的位置;通过酵母单杂点对点、双荧光素酶实验验证CsAHL25对CsHB1表达的影响;利用qRT-PCR探究CsAHL25基因在柑橘体细胞胚诱导过程中的表达模式;在柑橘愈伤组织中瞬时表达该基因,并检测体细胞胚发生相关基因的表达变化。【结果】CsAHL25在柑橘体细胞胚诱导过程中呈现先上升后下降的表达模式,该蛋白定位在细胞核中,能与CsHB1启动子结合并下调CsHB1的表达。瞬时表达CsAHL25会导致CsHB1表达量下调,及CsABI3、CsFUS3、CsLEC1、CsL1L等促进体细胞发生的LEC1/B3基因表达量上调。【结论】CsAHL25能直接下调CsHB1的表达,并使LEC1/B3基因表达量上升。CsAHL25可能通过调整CsHB1、LEC1/B3基因的表达促进体细胞胚发生。 展开更多

关键词 柑橘:体细胞胚发生 HD-ZIP AT-HOOK

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3种化学保鲜剂对草莓采后保鲜的影响 被引量：5

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作者 黄玮婷 魏倩 +1 位作者 赵梅 方中明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1755-1760,共6页

【目的】探讨柠檬酸钾、亚硫酸钠和维生素C等常用化学保鲜剂对草莓采后保鲜效果的影响,为其采后贮藏和运输提供安全、高效、低价的保鲜技术。【方法】以草莓品种法兰地为试验材料,分别置于2%的柠檬酸钾、亚硫酸钠和维生素C溶液中浸泡1 m... 【目的】探讨柠檬酸钾、亚硫酸钠和维生素C等常用化学保鲜剂对草莓采后保鲜效果的影响,为其采后贮藏和运输提供安全、高效、低价的保鲜技术。【方法】以草莓品种法兰地为试验材料,分别置于2%的柠檬酸钾、亚硫酸钠和维生素C溶液中浸泡1 min,取出晾干后常温贮藏,以浸泡蒸馏水为对照,探讨3种化学保鲜剂对草莓外观、硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸含量、维生素C含量及超氧化物歧化酶(SOD)酶活性的影响,筛选最适的保鲜剂及其浓度。【结果】与对照相比,3种化学保鲜剂对草莓外观及营养品质的变化均有明显影响,以2%维生素C处理的保鲜效果最佳,可延长贮藏时间,保持外观品质,有效缓解草莓硬度及可溶性固形物、可滴定酸、维生素C含量的下降,保持较高的SOD活性;贮藏至第7 d,草莓的可溶性固形物、可滴定酸、维生素C含量和SOD活性分别为9.60%、1.30%、87.72 mg/100 g和299.60 U/g,分别较对照高32.41%、9.68%、65.08%和44.40%。【结论】2%维生素C浸泡处理1 min能较好地保持采后草莓的色泽及营养品质,保鲜期延长至7 d以上,可用于草莓采后保鲜。 展开更多

关键词 草莓 采后保鲜 维生素C 常温贮藏 品质

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二氧化氯在草莓采后保鲜中的作用 被引量：24

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作者 余璐璐 曹中权 +1 位作者 朱秋杰 徐飞 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第4期343-346,共4页

二氧化氯(ClO_2)是一种安全、高效、绿色无毒的杀菌剂。通过不同浓度ClO_2处理,研究ClO_2对草莓(Fragaria×ananassa Duch)果实采后储藏保鲜的影响。结果表明,ClO_2处理能明显减少草莓储藏期间的感病损伤,ClO_2处理浓度越高,效果越... 二氧化氯(ClO_2)是一种安全、高效、绿色无毒的杀菌剂。通过不同浓度ClO_2处理,研究ClO_2对草莓(Fragaria×ananassa Duch)果实采后储藏保鲜的影响。结果表明,ClO_2处理能明显减少草莓储藏期间的感病损伤,ClO_2处理浓度越高,效果越好。但是,高浓度ClO_2处理对草莓果皮有漂白损伤作用,草莓储藏后期色泽较差。低浓度ClO_2处理在抑菌的同时能起到较好的果实保鲜效果,其中20 mg/L ClO_2处理效果最好,处理后的果实在常温(20±1)℃下的储藏时间达6 d以上。此外,20 mg/L ClO_2处理组草莓采后储藏期间腐烂率明显降低,果实硬度、持水量、含糖量等均高于对照组,表明ClO_2在草莓果实保鲜中具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 二氧化氯 草莓 采后储藏 果实保鲜 腐烂率

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猪DDX21基因的克隆、序列分析及原核表达 被引量：4

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作者 谢立兰 安康 +2 位作者 陈力 孙紫德 方六荣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期42-47,共6页

DEAD-box解旋酶21(DEx D-box helicase 21,DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一,不仅参与RNA的合成和加工过程,同时还参与机体的天然免疫应答,调控病毒的复制。为了研究猪DDX21基因的结构和功能,以猪肾传代细胞(PK-15)总cDNA为模... DEAD-box解旋酶21(DEx D-box helicase 21,DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一,不仅参与RNA的合成和加工过程,同时还参与机体的天然免疫应答,调控病毒的复制。为了研究猪DDX21基因的结构和功能,以猪肾传代细胞(PK-15)总cDNA为模板,根据GenBank公布的预测序列(XM_005657387.2)设计引物扩增猪源DDX21基因,并采用分子生物学软件将其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,首次成功克隆了猪DDX21基因的cDNA序列(GenBank登录号为KX396051),其开放读码框全长为2 355 bp,编码784个氨基酸;与牛、斑马鱼、人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾的氨基酸序列同源性分别为91.7%,57.5%,88.0%,82.3%,83.8%和48.9%;该基因编码的蛋白结构域和人、牛、小鼠、大鼠一样,其C端都具有保守的GUCT结构域;系统进化树分析表明猪DDX21与牛DDX21的亲缘关系最近。进一步构建原核表达质粒p ET28a-DDX21,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),对DDX21基因进行原核表达。经SDS-PAGE分析显示重组菌可表达分子量约为90 k Da的融合蛋白,与预期相符;在IPTG诱导浓度一定的条件下,重组菌的最佳诱导时间为5 h。猪DDX21基因的克隆和原核表达,为进一步研究DDX21蛋白的结构和生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 DDX21基因 克隆 序列分析 原核表达

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‘南大’蓝莓试管苗快速繁殖体系的建立 被引量：3

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作者 胡燕梅 方中明 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2017年第3期234-237,共4页

以蓝莓南高丛品种‘南大’为外植体,对外植体消毒方法、腋芽诱导、腋芽增殖、试管苗生根等方面确定了其快速繁殖的最佳条件.结果表明:蓝莓‘南大’茎段的最佳消毒方式为75%酒精消毒120 s+0.1%HgCl_2消毒10 min.茎段腋芽诱导最佳培养基为... 以蓝莓南高丛品种‘南大’为外植体,对外植体消毒方法、腋芽诱导、腋芽增殖、试管苗生根等方面确定了其快速繁殖的最佳条件.结果表明:蓝莓‘南大’茎段的最佳消毒方式为75%酒精消毒120 s+0.1%HgCl_2消毒10 min.茎段腋芽诱导最佳培养基为WPM+ZT 1.0 mg·L^(-1),腋芽增殖的最佳培养基为WPM+ZT 2.0 mg·L^(-1),培养60 d后增殖倍数可达6.0生根的最佳培养基为WPM+IBA 1.0 mg·L^(-1)+活性炭0.5 g·L^(-1),培养30 d后生根率达到73%. 展开更多

关键词 蓝莓 组织培养 外植体 生根培养

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楤木胚状体的诱导及再生体系的建立 被引量：3

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作者 孔凡芹 李树忠 +1 位作者 黄玮婷 方中明 《江苏农业科学》 2018年第7期36-39,共4页

楤木为五加科楤木属植物,具有很高的经济价值和药用价值。以楤木嫩茎为材料进行了其胚状体的诱导和植株再生研究,结果表明:楤木愈伤诱导的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 2,4-D,诱导率达100%;楤木胚状体诱导和增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6... 楤木为五加科楤木属植物,具有很高的经济价值和药用价值。以楤木嫩茎为材料进行了其胚状体的诱导和植株再生研究,结果表明:楤木愈伤诱导的最佳培养基为MS+1.5 mg/L 2,4-D,诱导率达100%;楤木胚状体诱导和增殖的最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA,胚状体分化率达50%以上,增殖倍数达11.337倍;胚状体分化成苗的最佳培养基为MS+0.5 mg/L ZT+0.05 mg/L IAA,分化率达4.069;壮苗生根的最佳培养基为1/2MS+0.1 mg/L NAA,生根率达98.6%。 展开更多

关键词 楤木 组织培养 胚状体

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拟南芥氰丙氨酸合酶CYS-C1基因扩增及多克隆抗体制备 被引量：3

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作者 余璐璐 龚绒雪 +3 位作者 吕林涛 杨虹 裴周颖 徐飞 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1235-1241,共7页

已有研究结果表明,植物自身能产生剧毒的氰化物(如HCN),而氰丙氨酸合酶(Cyanoalanine synthase,CAS)是植物解氰作用的关键酶,在植物生长、发育及逆境胁迫响应过程中起重要作用。本研究通过克隆拟南芥CAS合酶关键基因CYS-C1全长后,构建... 已有研究结果表明,植物自身能产生剧毒的氰化物(如HCN),而氰丙氨酸合酶(Cyanoalanine synthase,CAS)是植物解氰作用的关键酶,在植物生长、发育及逆境胁迫响应过程中起重要作用。本研究通过克隆拟南芥CAS合酶关键基因CYS-C1全长后,构建原核表达载体p EASY-CYS-C1并导入大肠杆菌E.coli受体细胞中进行表达。结果表明,在大肠杆菌E.coli细胞中成功诱导出可溶性的CYS-C1蛋白,其中IPTG最佳诱导时间为4 h,最佳诱导浓度为0.2 mmol/L。原核表达的CYS-C1蛋白经Ni柱纯化并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,Western blot检测结果表明,CYS-C1蛋白多克隆抗体的特异性较好。本试验结果对于进一步开展CAS合酶的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 拟南芥 氰丙氨酸合酶 多克隆抗体

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柑橘CitSERK-LIKE基因原核表达载体的构建与表达 被引量：1

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作者 葛晓霞 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第4期22-24,共3页

用RT-PCR扩增伏令夏橙体细胞胚发生类受体蛋白激酶(somatic embryogenesis receptor-like kinase,SERK)基因ORF区全长,克隆入载体,酶切后亚克隆入原核表达载体,并用SDS-PAGE观察CitSERK-LIKE基因的原核表达情况。结果显示,成功构建了pET... 用RT-PCR扩增伏令夏橙体细胞胚发生类受体蛋白激酶(somatic embryogenesis receptor-like kinase,SERK)基因ORF区全长,克隆入载体,酶切后亚克隆入原核表达载体,并用SDS-PAGE观察CitSERK-LIKE基因的原核表达情况。结果显示,成功构建了pET-CitSERK1-like原核表达重组质粒,该重组质粒在大肠杆菌中可经IPTG诱导表达分子量约为69 ku的融合蛋白,与预测蛋白一致。 展开更多

关键词 柑橘 CitSERK1-like 表达载体 构建 原核表达

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柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测 被引量：2

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作者 谢幸男 赖晓娜 +3 位作者 战爽 程来超 许全全 葛晓霞 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1069-1075,共7页

【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子Cs... 【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。 展开更多

关键词 柑橘 CsHB1 多克隆抗体 动态分析

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烟草种子直接诱导愈伤组织的方法探究 被引量：1

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作者 彭也 许健成 +2 位作者 余璐璐 何正权 徐飞 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期105-110,共6页

以烟草种子为材料,探究从种子直接诱导出愈伤组织的方法。结果表明:烟草种子愈伤诱导受2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和6-苄氨基嘌呤(6-BA)不同激素配比影响,其中,在0.1~2.0 mg/L 2,4-D和6-BA的激素浓度范围内均能诱导出愈伤组织,但大小和质... 以烟草种子为材料,探究从种子直接诱导出愈伤组织的方法。结果表明:烟草种子愈伤诱导受2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和6-苄氨基嘌呤(6-BA)不同激素配比影响,其中,在0.1~2.0 mg/L 2,4-D和6-BA的激素浓度范围内均能诱导出愈伤组织,但大小和质量各不相同。值得注意的是,种子在含1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA的培养基中培养,能较快诱导出愈伤组织,但愈伤组织块较为松散;而在含0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA的培养基中培养,诱导出的愈伤组织较为紧密。进一步通过石蜡切片观察发现,在1.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA培养条件下诱导出的愈伤组织细胞较大,但排列不规则,多为非胚性细胞;相反,在0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA培养条件下诱导出的愈伤组织细胞虽然较小,但排列规则,多为胚性细胞。研究结果为从烟草种子诱导培养愈伤组织提供新的技术参考,也为烟草遗传转化研究提供便利。 展开更多

关键词 烟草 种子 愈伤诱导 2 4-D 6-BA

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甘蓝型油菜主花序有效角果数QTL定位和候选基因筛选 被引量：2

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作者 耿鑫鑫 曾焕 +1 位作者 黄伊雪 徐飞 《江苏农业科学》 2019年第7期38-41,共4页

以DH-7-9 (角果数多)×DH-G-42(角果数少)杂交后代连续自交的重组自交系(RIL)的190个家系为材料,在西宁和武汉2个环境下进行主花序有效角果数性状分析。结果表明,该RIL群体的主花序有效角果数表现出连续变异并且符合正态分布。利用... 以DH-7-9 (角果数多)×DH-G-42(角果数少)杂交后代连续自交的重组自交系(RIL)的190个家系为材料,在西宁和武汉2个环境下进行主花序有效角果数性状分析。结果表明,该RIL群体的主花序有效角果数表现出连续变异并且符合正态分布。利用已构建的遗传连锁图,结合2个年份2个环境下主花序有效角果数性状表型数据,采用WinQTL Cartographer 2.5软件的复合区间作图法(composite interval mapping,简称CIM)进行QTL定位和效应估计。结果在2个环境下共检测到6个与主花序有效角果数、性状相关的QTL,单个QTL可解释的表型变异范围为7.9%～24.39%。其中qESN-W-C5的贡献率达到24.39%,LOD值为12.97,位于C5染色体上,因此视其为该主花序有效角果数性状的主效QTLs。将拟南芥中已发表的角果数相关的3个基因与主效QTL置信区间对应的油菜基因组上104个基因进行同源比较分析,结果主效QTL区域内1个候选基因BnaC05g32840D与拟南芥角果数基因AT3G19820具有较高的同源性,推测其为油菜主花序有效角果数候选基因。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 主花序有效角果数 QTL定位 候选基因

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