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中试生产的结核DNA疫苗免疫效能研究 被引量:1
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作者 吴小丽 闭兰 +4 位作者 赵亚杰 罗丹 齐建新 王炯 李忠明 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第3期168-171,共4页
目的以300L发酵罐中试规模生产的冻干Mtb Ag85A质粒DNA疫苗为基础免疫小鼠,对该疫苗的免疫效能进行研究。方法将4~6周龄的BALB/c小鼠20只通过数字表法随机分为2组,一组免疫MtbAg85A质粒DNA疫苗(结核DNA疫苗免疫组),另一组免疫PBS作为... 目的以300L发酵罐中试规模生产的冻干Mtb Ag85A质粒DNA疫苗为基础免疫小鼠,对该疫苗的免疫效能进行研究。方法将4~6周龄的BALB/c小鼠20只通过数字表法随机分为2组,一组免疫MtbAg85A质粒DNA疫苗(结核DNA疫苗免疫组),另一组免疫PBS作为阴性对照(PBS对照组);于免疫前采血,肌内注射免疫3次。在第3次免疫后3周摘眼球处死小鼠,收集血清,进行血清特异性抗体检测和细胞因子(IFN-γ、IL-4)检测;同时对每只小鼠取脾细胞进行特异性γ干扰素(IFN-γ)分泌检测和脾细胞CD4+、CD8+百分率检测。结果 (1)免疫前后免疫组与对照组抗体水平吸光度A值均小于0.2。(2)结核DNA疫苗免疫组血清细胞因子IL-4水平[(146.2±34.3)pg/ml]低于PBS对照组[(177.7±28.1)pg/ml],差异有统计学意义(t=2.244,P=0.038),而IFN-γ水平[(129.6±159.0)pg/ml]虽然高于PBS对照组[(76.5±21.5)pg/ml],但差异无统计学意义(t=-1.047,P=0.309)。(3)酶联免疫斑点检测结果表明结核DNA疫苗免疫组脾细胞特异性IFN-γ分泌水平(分泌IFN-γ细胞个数)(103.60±112.14)高于PBS对照组(5.78±5.83),差异有统计学意义(t=36.538,P=0.018)。(4)结核DNA疫苗免疫组CD4+细胞百分率均值(21.57%)高于PBS对照组(12.17%),差异有统计学意义(t=3.043,P=0.038);CD8+细胞百分率均值(13.70%)与PBS对照组(10.57%)相比,差异无统计学意义(t=0.847,P=0.445)。结论Mtb Ag85A质粒DNA疫苗主要刺激机体Th1型细胞免疫,而对诱导机体产生Th2型细胞免疫应答没有显著的促进作用。 展开更多
关键词 疫苗 DNA 酰基转移酶类 抗原 细菌 免疫活性
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不同剂量结核病DNA疫苗的电转染免疫原性研究 被引量:4
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作者 梁艳 肖漓 +9 位作者 白雪娟 高钰 阳幼荣 张晓燕 陈丹 王兰 史迎昌 张俊仙 李忠明 吴雪琼 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第6期424-428,共5页
目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10... 目的 研究不同剂量结核病DNA疫苗电转染后的免疫原性.方法 40只BALB/c小鼠通过随机数字表法分为8组,每组5只.其中4组分别用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μg结核分枝杆菌Ag85A DNA肌内注射免疫小鼠;另4组用100 μl生理盐水和10 μg、50 μg、100 μgAg85ADNA肌内注射加电转染免疫小鼠.每2周免疫1次,共3次.最后1次免疫后2周杀死小鼠.用ELISA方法检测小鼠脾细胞培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)水平;用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-γ的辅助性T细胞(helper T cell,Th)1细胞百分比、分泌IL-4的Th2细胞百分比,以及Th1与Th2的细胞比值.用SAS 9.2软件处理数据,实验数据以“-x±s”表示,对有关数据进行两因素析因设计的方差分析,两两比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义.结果 免疫结束后2周,小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平,50 μg[(646.05±342.53) pg/ml]和100 μgAg85ADNA肌内注射组[(738.61±372.68) pg/ml]显著高于生理盐水组[(1.73±3.88)pg/ml](f值分别为4.065、4.647,P值均<0.05)和10 μg Ag85A DNA组[(87.83±120.82)pg/ml](t值分别为3.513、4.094,P值均<0.05);10 μg Ag85A DNA电转染组[(357.06±105.18) pg/ml]显著高于生理盐水组(t=2.247,P<0.05),高于100 μg Ag85ADNA电转染组[(86.08±135.73) pg/ml],但差异无统计学意义(t=1.706,P>0.05);50 μg Ag85ADNA电转染组[(648.60±439.41)pg/ml]显著高于生理盐水组(t=4.081,P<0.05)和100 μg Ag85A DNA电转染组(t=3.539,P<0.05).与直接肌内注射组IFN-γ水平[(87.83±120.82) pg/ml]比较,10 μg Ag85A DNA电转染组增高3倍[(357.06 pg/ml)/(87.83 pg/ml)]; 50 μg Ag85A DNA肌内注射组[(646.05±342.53) pg/ml]与电转染组[(648.60±439.41)pg/ml]比较,差异无统计学意义(t=-0.016,P>0.05);100 μg Ag85A DNA电转染组[(86.08±135.73)pg/ml]较肌内注射组[(738.61±372.68) pg/ml]降低88.35%(t=4.105,P<0.05).小鼠PBMC分泌IFN-γ的Th1细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA:(1.39±0.84)%;50 μg Ag85A DNA:(1.55±0.33)%;100 μg Ag85A DNA:(2.13±0.47)%]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA:(1.42±0.47)%; 50 μg Ag85A DNA:(1.88±0.51)%; 100 μg Ag85ADNA:(1.43±0.68)%]均高于生理盐水组[(0.65±0.31)%](t值分别为2.002、2.431、4.015、2.084、3.332和2.105,P值均<0.05),但不同剂量Ag85A DNA电转染组与肌内注射组之间差异均无统计学意义(t值分别为0.081、0.901和-1.91,P值均>0.05).小鼠PBMC分泌IL-4的Th2细胞百分比,不同剂量Ag85A DNA肌内注射组[10 μg Ag85A DNA:(1.42±1.18)%; 50 μg Ag85A DNA:(1.14±0.78)%; 100 μg Ag85A DNA:(1.24±0.76)%]和DNA电转染组[10 μg Ag85A DNA:(1.19±1.09)%; 50 μg Ag85A DNA:(2.06±0.96)%;100 μgAg85A DNA:(1.47±0.65)%]均显著低于生理盐水电转染组[(4.14±2.55)%](t值分别为-3.392、-3.738、-3.616、-3.676、-2.599和-3.325,P值均<0.05),但不同剂量DNA肌内注射组与DNA电转染组之间差异无统计学意义(t值分别为0.284、-1.139和-0.292,P值均>0.05).结论 DNA电转染免疫可以增强低剂量DNA疫苗的免疫应答,使用少量的DNA疫苗就可以产生较好的免疫效果. 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 疫苗 DNA 电穿孔 免疫
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