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题名过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型的建立
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作者
徐菁
何柳
周芳婷
潘勤
陈姗
罗靓
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机构
湖北中医药大学、药学院、药物分析教研室
武汉大学泰康医学院(基础医学院)人体解剖学与组织胚胎学系
武汉市蔡甸区人民医院检验科
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出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期24-29,共6页
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基金
湖北省教育厅科学研究计划指导性项目(B2021115)。
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文摘
为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞(TLR2^(-)),嘌呤霉素筛选获得稳定表达TLR2分子的Nalm-6细胞(TLR2^(+))。利用倒置荧光显微镜观察细胞状态和绿色荧光表达情况,通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测相关蛋白表达水平,采用CCK-8以及流式细胞术检测细胞存活率和细胞增殖水平。结果显示:倒置荧光显微镜下可见成功转染慢病毒的Nalm-6细胞表达绿色荧光和嘌呤霉素抗性。Western Blot检测到TLR2在Nalm-6细胞中成功表达,且TLR2信号的激活明显增强PI3K-AKT信号轴分子的磷酸化水平。CCK-8和流式细胞术发现TLR2活化可提升细胞存活率,促进细胞增殖。研究成功构建了过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型,并在此基础上验证TLR2活化不仅能够增强B细胞PI3K-AKT信号通路传导,还可促进细胞增殖。此模型为进一步探究TLR2通路对B细胞抗感染免疫功能的影响奠定基础。
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关键词
TLR2
慢病毒载体
B淋巴细胞
PI3K-AKT信号通路
细胞增殖
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Keywords
TLR2
lentiviral vector
B lymphocyte
PI3K-AKT pathway
cell proliferation
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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