目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)前列腺雄激素调节转录因子1(PART1)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl,MPP+)诱导的帕金森模型细胞氧化应激和凋亡的影响及分子机制。方法将SK-N-SH细胞分为对照(Con)组(细胞未经任何处理)、MPP...目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)前列腺雄激素调节转录因子1(PART1)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl,MPP+)诱导的帕金森模型细胞氧化应激和凋亡的影响及分子机制。方法将SK-N-SH细胞分为对照(Con)组(细胞未经任何处理)、MPP+组、空白组、转染组(pcDNA-PART1过表达载体质粒转染)、阴性组、干扰组[微小RNA(miR)-448抑制剂转染]、转染对照组、转染实验组(pcDNA-PART1与miR-448模拟物转染),后7组细胞用100μmol/L的MPP+处理。实时荧光定量PCR检测lncRNA PART1和miR-448表达;ELISA检测丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白印迹检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase)3和cleaved-Caspase9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA PART1和miR-448的靶向关系。结果与Con组比较,MPP+组细胞PART1表达降低(0.31±0.03 vs 1.00±0.00,P=0.000),miR-448表达升高(2.86±0.21 vs 1.00±0.00,P=0.000),且MPP+组细胞MDA含量升高,GSH含量降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白组比较,转染组PART1表达升高,MDA含量降低,GSH含量升高,细胞凋亡率降低,cleaved-Caspase3和cleaved-Caspase9蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性组比较,干扰组细胞miR-448表达降低,MDA含量降低,GSH含量升高,细胞凋亡率降低,cleaved-Caspase3和cleaved-Caspase9蛋白表达降低(P<0.01)。与转染对照组比较,转染实验组miR-448表达升高,MDA含量升高,GSH含量降低,细胞凋亡率升高,cleaved-Caspase3和cleaved-Caspase9蛋白表达升高(P<0.01)。PART1可靶向调控miR-448的表达。结论lncRNA PART1过表达通过靶向下调miR-448抑制MPP+诱导的帕金森模型细胞氧化应激和凋亡。展开更多
目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理...目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理组、mimic-NC组、mimic组、inhibitor-NC组和inhibitor组,采用脂质体转染技术将miR-181a-5p mimic、inhibitor等转染入相应的细胞中。MTT法检测细胞增殖活性;qPCR检测细胞miR-181a-5p表达水平。利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用吖啶橙染色观察细胞自噬水平;采用Western blot检测细胞LC3B、p62、Beclin-1、自噬相关基因5(autophagy related 5,ATG5)蛋白表达水平。结果与正常RS1细胞比较,H 2 O 2诱导后的RS1细胞增殖活性显著降低(P<0.05),而miR-181a-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与H 2 O 2处理组比较,mimic组RS1细胞排列紊乱,细胞轮廓不清晰,碎片较多,凋亡率显著升高(P<0.05),自噬水平降低,Beclin-1和ATG5表达显著降低(均P<0.05);inhibitor组RS1细胞轮廓清晰,过度伸展、空泡化的细胞减少,凋亡率显著降低(P<0.05),自噬水平升高,Beclin-1和ATG5表达显著升高(均P<0.05)。结论H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞miR-181a-5p表达增加,且上调miR-181a-5p表达,可抑制细胞自噬、促进细胞凋亡。展开更多
文摘目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)前列腺雄激素调节转录因子1(PART1)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl,MPP+)诱导的帕金森模型细胞氧化应激和凋亡的影响及分子机制。方法将SK-N-SH细胞分为对照(Con)组(细胞未经任何处理)、MPP+组、空白组、转染组(pcDNA-PART1过表达载体质粒转染)、阴性组、干扰组[微小RNA(miR)-448抑制剂转染]、转染对照组、转染实验组(pcDNA-PART1与miR-448模拟物转染),后7组细胞用100μmol/L的MPP+处理。实时荧光定量PCR检测lncRNA PART1和miR-448表达;ELISA检测丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白印迹检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase)3和cleaved-Caspase9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA PART1和miR-448的靶向关系。结果与Con组比较,MPP+组细胞PART1表达降低(0.31±0.03 vs 1.00±0.00,P=0.000),miR-448表达升高(2.86±0.21 vs 1.00±0.00,P=0.000),且MPP+组细胞MDA含量升高,GSH含量降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。与空白组比较,转染组PART1表达升高,MDA含量降低,GSH含量升高,细胞凋亡率降低,cleaved-Caspase3和cleaved-Caspase9蛋白表达降低(P<0.05)。与阴性组比较,干扰组细胞miR-448表达降低,MDA含量降低,GSH含量升高,细胞凋亡率降低,cleaved-Caspase3和cleaved-Caspase9蛋白表达降低(P<0.01)。与转染对照组比较,转染实验组miR-448表达升高,MDA含量升高,GSH含量降低,细胞凋亡率升高,cleaved-Caspase3和cleaved-Caspase9蛋白表达升高(P<0.01)。PART1可靶向调控miR-448的表达。结论lncRNA PART1过表达通过靶向下调miR-448抑制MPP+诱导的帕金森模型细胞氧化应激和凋亡。
文摘目的观察miR-181a-5p在H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞衰老过程中的表达变化,并探讨其表达水平对细胞自噬和凋亡的影响。方法采用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导大鼠皮肤成纤维样RS1细胞6 h,构建细胞衰老模型。将细胞分为5组:H 2 O 2处理组、mimic-NC组、mimic组、inhibitor-NC组和inhibitor组,采用脂质体转染技术将miR-181a-5p mimic、inhibitor等转染入相应的细胞中。MTT法检测细胞增殖活性;qPCR检测细胞miR-181a-5p表达水平。利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用吖啶橙染色观察细胞自噬水平;采用Western blot检测细胞LC3B、p62、Beclin-1、自噬相关基因5(autophagy related 5,ATG5)蛋白表达水平。结果与正常RS1细胞比较,H 2 O 2诱导后的RS1细胞增殖活性显著降低(P<0.05),而miR-181a-5p表达水平显著升高(P<0.05)。与H 2 O 2处理组比较,mimic组RS1细胞排列紊乱,细胞轮廓不清晰,碎片较多,凋亡率显著升高(P<0.05),自噬水平降低,Beclin-1和ATG5表达显著降低(均P<0.05);inhibitor组RS1细胞轮廓清晰,过度伸展、空泡化的细胞减少,凋亡率显著降低(P<0.05),自噬水平升高,Beclin-1和ATG5表达显著升高(均P<0.05)。结论H 2 O 2诱导大鼠皮肤成纤维样细胞miR-181a-5p表达增加,且上调miR-181a-5p表达,可抑制细胞自噬、促进细胞凋亡。
