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马立克氏病病毒超强毒UL49基因siRNA表达质粒的构建与鉴定
被引量：
2
1
作者
缪德年
王秀花
+4 位作者
封江南
姚惠娟
吴琼杉
樊生超
陈溥言
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期137-139,共3页
以马立克氏病病毒超强毒(RB1B株)UL49为靶基因,利用计算机辅助设计UL49基因特异的siRNA,再定向克隆至pSilencerTM2.1U6neovector载体中构建siRNA表达重组体,转化DH5α菌株,提取质粒酶切鉴定后,进行测序分析,证实为所需序列。以上结果表...
以马立克氏病病毒超强毒(RB1B株)UL49为靶基因,利用计算机辅助设计UL49基因特异的siRNA,再定向克隆至pSilencerTM2.1U6neovector载体中构建siRNA表达重组体,转化DH5α菌株,提取质粒酶切鉴定后,进行测序分析,证实为所需序列。以上结果表明,针对马立克氏病超强毒UL49基因的siRNA表达质粒已构建成功。
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关键词
马立克氏病
RB1B株
UL49基因
SIRNA
表达质粒
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职称材料
小分子干扰RNA靶向抑制suvivin基因诱导U251细胞凋亡的实验研究
被引量：
3
2
作者
徐如祥
涂艳阳
+2 位作者
姜晓丹
封江南
黄俊
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期398-401,共4页
目的构建靶向survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,导入人胶质瘤细胞U251中,研究siRNA靶向抑制survivin基因对U251细胞的凋亡诱导作用。方法根据siRNA设计原则,在survivin全长序列中选取设计含19个核苷酸(19nt)靶序列两条反向...
目的构建靶向survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,导入人胶质瘤细胞U251中,研究siRNA靶向抑制survivin基因对U251细胞的凋亡诱导作用。方法根据siRNA设计原则,在survivin全长序列中选取设计含19个核苷酸(19nt)靶序列两条反向重复序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成siRNA的 DNA模板并克隆到siRNA表达载体pGenesil-1中,获得靶向抑制survivin基因的siRNA表达载体pGenesil-1／survivin; 采用Metafectene转染试剂将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251;分别采用实时荧光定量PCR以及Western bloting从 mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用Annexin-V／PI双色标记的流式细胞仪法检测siRNA诱导的细胞凋亡。结果实时荧光定量PCR以及Western blotting显示:survivin基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;流式细胞仪检测结果显示:survivin基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高。结论靶向survivin基因的重组siRNA 干扰载体pGenesi-1／survivin介导的RNAi显著靶向抑制了survivin基因在人胶质瘤细胞U251中的表达,并明显诱导了U251细胞发生凋亡。
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关键词
小分子干扰RNA
suvivin基因
胶质瘤
U251细胞
细胞凋亡
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职称材料
题名
马立克氏病病毒超强毒UL49基因siRNA表达质粒的构建与鉴定
被引量：
2
1
作者
缪德年
王秀花
封江南
姚惠娟
吴琼杉
樊生超
陈溥言
机构
上海市农业科学院畜牧兽医研究所
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
武汉市晶赛生物工程技术有限公司
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期137-139,共3页
基金
上海市启明星计划项目(03QC14041)
文摘
以马立克氏病病毒超强毒(RB1B株)UL49为靶基因,利用计算机辅助设计UL49基因特异的siRNA,再定向克隆至pSilencerTM2.1U6neovector载体中构建siRNA表达重组体,转化DH5α菌株,提取质粒酶切鉴定后,进行测序分析,证实为所需序列。以上结果表明,针对马立克氏病超强毒UL49基因的siRNA表达质粒已构建成功。
关键词
马立克氏病
RB1B株
UL49基因
SIRNA
表达质粒
Keywords
Marek＇s disease virus
RB1B strain
UL49 gene
siRNA
expression plasmid
分类号
S852.64 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
小分子干扰RNA靶向抑制suvivin基因诱导U251细胞凋亡的实验研究
被引量：
3
2
作者
徐如祥
涂艳阳
姜晓丹
封江南
黄俊
机构
南方医科大学珠江医院神经外科/广东省神经医学研究所
武汉市晶赛生物工程技术有限公司
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期398-401,共4页
基金
国家自然科学基金(30170961)~~
文摘
目的构建靶向survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,导入人胶质瘤细胞U251中,研究siRNA靶向抑制survivin基因对U251细胞的凋亡诱导作用。方法根据siRNA设计原则,在survivin全长序列中选取设计含19个核苷酸(19nt)靶序列两条反向重复序列,间以9个核苷酸的茎环序列,两端分别加上对应的酶切位点,形成siRNA的 DNA模板并克隆到siRNA表达载体pGenesil-1中,获得靶向抑制survivin基因的siRNA表达载体pGenesil-1／survivin; 采用Metafectene转染试剂将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251;分别采用实时荧光定量PCR以及Western bloting从 mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用Annexin-V／PI双色标记的流式细胞仪法检测siRNA诱导的细胞凋亡。结果实时荧光定量PCR以及Western blotting显示:survivin基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;流式细胞仪检测结果显示:survivin基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高。结论靶向survivin基因的重组siRNA 干扰载体pGenesi-1／survivin介导的RNAi显著靶向抑制了survivin基因在人胶质瘤细胞U251中的表达,并明显诱导了U251细胞发生凋亡。
关键词
小分子干扰RNA
suvivin基因
胶质瘤
U251细胞
细胞凋亡
Keywords
small interfering RNA
suvivin
glioma
U251 cells
apoptosis
分类号
R739.41 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
马立克氏病病毒超强毒UL49基因siRNA表达质粒的构建与鉴定
缪德年
王秀花
封江南
姚惠娟
吴琼杉
樊生超
陈溥言
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
小分子干扰RNA靶向抑制suvivin基因诱导U251细胞凋亡的实验研究
徐如祥
涂艳阳
姜晓丹
封江南
黄俊
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
在线阅读
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职称材料
已选择
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引证文献
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