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柚皮苷联合Ad-SDF-1α对极度低氧环境下MSC成骨分化及迁移的影响
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作者 宁宇 汪伟 +3 位作者 何继文 吴群海 刘想忠 许海甲 《山东医药》 CAS 2023年第16期36-41,共6页
目的观察柚皮苷联合基质细胞衍生因子1腺病毒(Ad-SDF-1α)对极度低氧环境下间充质干细胞(MSC)成骨分化及迁移的影响。方法用Percoll密度梯度离心法分离提取兔MSC,常规培养并传代。将不同浓度柚皮苷培养基加入MSC,常氧条件培养3 d,筛选... 目的观察柚皮苷联合基质细胞衍生因子1腺病毒(Ad-SDF-1α)对极度低氧环境下间充质干细胞(MSC)成骨分化及迁移的影响。方法用Percoll密度梯度离心法分离提取兔MSC,常规培养并传代。将不同浓度柚皮苷培养基加入MSC,常氧条件培养3 d,筛选柚皮苷最佳实验浓度。取传三代的MSC,随机分为5组,阴性对照Ad-GFP组转染阴性对照腺病毒Ad-GFP,Ad-SDF-1α组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组转染Ad-SDF-1α,空白组、柚皮苷组加入空白MSCM培养基,在常氧环境下培养6 h。取各组细胞,柚皮苷组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组均加入1×10^(-4) mol/L柚皮苷培养基,空白组、阴性对照Ad-GFP组、Ad-SDF-1α组加入空白MSCM培养基,在极度低氧环境下继续培养3 d。用qPCR法检测成骨基因(BMP-2、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix)、迁移基因(CXCR4)表达,用Western bloting法检测BMP-2、Smads、Runx2、Osterix、CXCR4蛋白表达,ELISA法检测细胞上清液中SDF-1α,用茜素红S染色法检测细胞成骨能力,用Transwell实验检测细胞迁移能力。结果不同浓度柚皮苷干预后MSC中BMP-2 mRNA表达较0 mol/L高(P均<0.05);柚皮苷浓度越高,BMP-2 mRNA表达越高。柚皮苷浓度高于1×10^(-4) mol/L时,SDF-1α、CXCR4 mRNA表达降低(P均<0.05);柚皮苷浓度低于1×10^(-4) mol/L时,SDF-1α、CXCR4 mRNA表达与0 mol/L比较差异无统计学意义(P均>0.05)。因此,选取1×10^(-4) mol/L为柚皮苷最佳实验浓度。与空白组、阴性对照Ad-GFP组、柚皮苷组比较,柚皮苷+Ad-SDF-1α组成骨基因(BMP-2、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix)、迁移基因(CXCR4)表达均高(P均<0.05)。与空白组、阴性对照Ad-GFP组比较,柚皮苷组BMP-2、Smads、Runx2、Osterix蛋白表达高(P均<0.05);与柚皮苷组比较,柚皮苷+Ad-SDF-1α组BMP-2、Smads、Runx2、Osterix、CXCR4蛋白表达及SDF-1α水平高(P均<0.05)。与空白组、阴性对照Ad-GFP组、Ad-SDF-1α组比较,柚皮苷组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组矿化结节钙盐沉积吸光度值高(P均<0.05)。与空白组、阴性对照Ad-GFP组、柚皮苷组比较,Ad-SDF-1α组、柚皮苷+Ad-SDF-1α组迁移细胞吸光度值高(P均<0.05)。结论极度低氧环境下,柚皮苷与Ad-SDF-1α可协同促进MSC的成骨分化,同时不影响Ad-SDF-1α促MSC迁移的作用。 展开更多
关键词 柚皮苷 基质细胞衍生因子1腺病毒 低氧 间充质干细胞 细胞成骨分化 细胞迁移
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