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C型产气荚膜梭菌α、β_1、β_2毒素基因融合及免疫原性研究
被引量:
6
1
作者
许崇波
陈向东
+2 位作者
许崇利
逄越
高凤山
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期379-384,共6页
为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95 kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65 kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,...
为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95 kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65 kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,构建含2.6 kbα-β1-β2融合基因的表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1B2含有α-β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1-β2融合蛋白能够被α、β1和β2毒素抗体识别.表达优化结果表明,以IPTG为诱导剂诱导α-β1-β2融合基因表达的优化条件是:培养基pH 7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.4 mmol?L-1,菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG,诱导时间5 h,此时α-β1-β2融合蛋白表达量为31.2%.免疫试验结果表明,α-β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD(最小致死量,minimum lethal dose)C型产气荚膜梭菌标准株C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株.
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关键词
C型产气荚膜梭菌
Α毒素基因
β1毒素基因
β2毒素基因
融合蛋白
免疫原性
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职称材料
题名
C型产气荚膜梭菌α、β_1、β_2毒素基因融合及免疫原性研究
被引量:
6
1
作者
许崇波
陈向东
许崇利
逄越
高凤山
机构
大连
大学
生物
工程
学院
生物
有机化学辽宁省
重点
实验室
武汉大学生命科学学院微生物学国家重点学科
吉林化工
学院
环境与
生物
工程
学院
出处
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期379-384,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30360080)
辽宁省高等学校科学研究项目(A类)攻关计划资助项目(05L018)
教育部青年骨干教师国内访问学者资助项目(2007)
文摘
为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95 kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65 kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,构建含2.6 kbα-β1-β2融合基因的表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1B2含有α-β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1-β2融合蛋白能够被α、β1和β2毒素抗体识别.表达优化结果表明,以IPTG为诱导剂诱导α-β1-β2融合基因表达的优化条件是:培养基pH 7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.4 mmol?L-1,菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG,诱导时间5 h,此时α-β1-β2融合蛋白表达量为31.2%.免疫试验结果表明,α-β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD(最小致死量,minimum lethal dose)C型产气荚膜梭菌标准株C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株.
关键词
C型产气荚膜梭菌
Α毒素基因
β1毒素基因
β2毒素基因
融合蛋白
免疫原性
Keywords
Clostridium perfringens type C
alpha-toxin gene
betal-toxin gene
beta2-toxin gene
fusion protein
immunogenicity
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
C型产气荚膜梭菌α、β_1、β_2毒素基因融合及免疫原性研究
许崇波
陈向东
许崇利
逄越
高凤山
《浙江大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2008
6
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职称材料
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参考文献
引证文献
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