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刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析
被引量：
3
1
作者
章莹
宗红英
+1 位作者
何立
蔡国斌
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1091-1095,共5页
目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双...
目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。
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关键词
刚地弓形虫
DXR
克隆表达
膦胺霉素
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职称材料
并殖吸虫的分类和遗传多样性研究概述
被引量：
5
2
作者
顾梦杰
李友松
+1 位作者
董惠芬
赵琴平
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期744-750,共7页
并殖吸虫是肺吸虫病的病原体。随着大量新种的报道,单一的形态学依据难以准确区分虫种,结合生活史各阶段虫体形态的多特征分析成为了鉴别虫种的主要方法。此外,利用不同的分子标记,不仅为并殖吸虫的系统分类补充了更有力的证据,亦为其...
并殖吸虫是肺吸虫病的病原体。随着大量新种的报道,单一的形态学依据难以准确区分虫种,结合生活史各阶段虫体形态的多特征分析成为了鉴别虫种的主要方法。此外,利用不同的分子标记,不仅为并殖吸虫的系统分类补充了更有力的证据,亦为其遗传进化的相关研究提供了更丰富的信息。本文将对并殖吸虫的分类和遗传多样性的研究进展进行综述。
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关键词
并殖吸虫
系统分类
遗传多样性
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职称材料
题名
刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析
被引量：
3
1
作者
章莹
宗红英
何立
蔡国斌
机构
武汉大学
基础
医学院
医学
遗传
学
系
武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1091-1095,共5页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金资助(No.2042015kf036)~~
文摘
目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。
关键词
刚地弓形虫
DXR
克隆表达
膦胺霉素
Keywords
Toxoplasma gondii
（DXR）
prokaryotic expression
fosmidomycin
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
并殖吸虫的分类和遗传多样性研究概述
被引量：
5
2
作者
顾梦杰
李友松
董惠芬
赵琴平
机构
武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室
福建省疾病预防控制中心
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第8期744-750,共7页
基金
国家自然科学基金(No.81472926)资助~~
文摘
并殖吸虫是肺吸虫病的病原体。随着大量新种的报道,单一的形态学依据难以准确区分虫种,结合生活史各阶段虫体形态的多特征分析成为了鉴别虫种的主要方法。此外,利用不同的分子标记,不仅为并殖吸虫的系统分类补充了更有力的证据,亦为其遗传进化的相关研究提供了更丰富的信息。本文将对并殖吸虫的分类和遗传多样性的研究进展进行综述。
关键词
并殖吸虫
系统分类
遗传多样性
Keywords
Paragonimus
taxonomy
genetic diversity
分类号
R383.2 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析
章莹
宗红英
何立
蔡国斌
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
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职称材料
2
并殖吸虫的分类和遗传多样性研究概述
顾梦杰
李友松
董惠芬
赵琴平
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
5
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