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基于16S核糖体RNA高通量测序前瞻性分析50岁及以上重度烧伤患者早期肠道菌群变化
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作者 秦浩 谢卫国 +2 位作者 陈小红 刘蒙 田霞 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期523-534,共12页
目的:借助16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S rRNA)高通量测序分析50岁及以上重度烧伤患者早期肠道菌群变化,为50岁及以上重度烧伤患者应用肠道菌群干预策略提供依据。方法:按照入排标准纳入13例重度烧伤患者(Burn组)和同期12例健康... 目的:借助16S核糖体RNA(16S ribosomal RNA,16S rRNA)高通量测序分析50岁及以上重度烧伤患者早期肠道菌群变化,为50岁及以上重度烧伤患者应用肠道菌群干预策略提供依据。方法:按照入排标准纳入13例重度烧伤患者(Burn组)和同期12例健康志愿者(Control组)。收集两组临床资料及粪便样本,并对样本进行16S rRNA V4区基因测序,分析各类菌属的相对丰度;用Rarefy方法进行操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)划分,使用Z-score对差异菌群进行标准化,构建差异菌群热图,通过QIIME软件分析粪便菌群OTU数目及多样性指数;利用线性判别分析效应大小(linear discriminant analysis effect size,LEfSe)解析优势菌群;通过PICRUSt2软件预测菌群功能丰度;使用R语言中的igraph包对试验样本属水平差异菌行相关性可视化分析。结果:重度烧伤患者早期肠道菌群以厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidota)为主。23种菌属在两组间的差异有统计学意义(P<0.05)。差异菌群热图可见Control组的菌群丰度略优于Burn组。LEfSe分析表明,与Control组相比,Burn组的肠道菌群物种数目在1个门、2个纲、6个目、6个科和10个属中显著增加,两组差异微生物分布分支图提示Burn组以芽孢杆菌纲为主要区别标志菌群,Control组以梭菌纲为主要标志菌群。京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)功能预测分析提示两组间差异无统计学意义(P>0.05)。联合网络可视化分析发现厚壁菌门影响最大,在可检测到的菌属中共有136对菌属彼此间具有一定的正相关或负相关性(|r|>0.3,P<0.05),以协同作用为主。结论:50岁及以上重度烧伤患者早期肠道菌群与健康同龄人存在显著差异,有益菌种类及丰度减少,厌氧菌比例显著升高,不同菌群间存在一定的协同及拮抗作用。 展开更多
关键词 烧伤 肠道菌群 菌群多样性 高通量核苷酸测序
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高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响 被引量:6
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作者 李相友 伍军 +5 位作者 罗丹 陈晚先 朱戈丽 张艳霞 毕智敏 封宝红 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期954-960,共7页
目的:观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株第5~10代[HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%(体积分数)胎牛血清],观察1.5%、2.5%、4.25%(质量分数)葡萄糖腹膜透析液(dextrose)及线粒体呼吸链... 目的:观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株第5~10代[HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%(体积分数)胎牛血清],观察1.5%、2.5%、4.25%(质量分数)葡萄糖腹膜透析液(dextrose)及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮(rotenone),线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮(thenoyltrifluoroacetone,TTFA),线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A(antimycin A)对细胞IL-1β表达的影响(免疫印迹);通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇(resveratrol,RSV)诱导自噬,3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、自噬相关蛋白5(autophagy related gene 5,ATG5)siRNA、自噬相关蛋白(Beclin1)siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS),免疫印迹分析IL-1β的表达。结果:对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮(10μmol/L)、抗霉素A(50 mg/L)、噻吩甲酰三氟丙酮(10μmol/L)各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA(negative control,NC siRNA)、RSV(50μmol/L,诱导自噬)、3-MA(10 mmol/L,抑制自噬)、ATG5 siRNA(抑制自噬)、Beclin1 siRNA(抑制自噬)各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论:长期应用高糖腹膜透析液,腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β持续激活,实时启动自噬可能成为干预NLRP3-IL-1β持续激活、延缓腹膜透析腹腔慢性炎症及腹膜纤维化的治疗靶点。 展开更多
关键词 高糖腹膜透析液 人腹膜间皮细胞 NLRP3 IL-1Β
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知黄痛风汤HPLC指纹图谱建立及4种成分测定 被引量:3
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作者 黄梦玲 王雄 +4 位作者 邹吉利 伍军 尹青桥 吴金虎 李相友 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1855-1860,共6页
目的建立知黄痛风汤(黄柏、知母、车前子等)HPLC指纹图谱,并测定4种成分的含有量。方法该药物水提液的分析采用岛津Wondasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-0.5%醋酸为流动相,梯度洗脱;柱温30℃;检测波长245 nm。结果 10批样... 目的建立知黄痛风汤(黄柏、知母、车前子等)HPLC指纹图谱,并测定4种成分的含有量。方法该药物水提液的分析采用岛津Wondasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-0.5%醋酸为流动相,梯度洗脱;柱温30℃;检测波长245 nm。结果 10批样品HPLC指纹图谱中有16个共有峰,相似度在0.9以上。盐酸小檗碱、芒果苷、京尼平苷酸、丹酚酸B分别在0.636 2~3.575μg(R^2=0.999 9)、0.338~1.425μg(R^2=0.999 0)、0.645 2~2.718 8μg(R^2=1)、0.938 8~5.275μg(R^2=0.999 3)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.56%、98.35%、100.25%、102.11%,RSD(n=6)分别为2.41%、1.17%、1.24%、2.02%。结论该方法准确可靠、专属性好,可用于知黄痛风汤的质量控制。 展开更多
关键词 知黄痛风汤 HPLC指纹图谱 盐酸小檗碱 芒果苷 京尼平苷酸 丹酚酸B
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柚皮苷对白介素-1β诱导的兔关节软骨细胞炎性反应的调节作用 被引量:9
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作者 胡静 刘想忠 +3 位作者 石正帅 蔡寒涛 宁宇 李章华 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2020年第12期38-41,I0033-I0035,共7页
目的观察不同浓度柚皮苷(naingin,NG)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔关节软骨细胞炎性反应的影响,探讨NG治疗骨关节炎的潜力。方法体外正常培养的兔关节软骨细胞用IL-1β进行炎性诱导,造软骨关节炎细胞模型。用荧光倒置... 目的观察不同浓度柚皮苷(naingin,NG)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔关节软骨细胞炎性反应的影响,探讨NG治疗骨关节炎的潜力。方法体外正常培养的兔关节软骨细胞用IL-1β进行炎性诱导,造软骨关节炎细胞模型。用荧光倒置显微镜观察及吖啶橙、甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞,运用CCK-8检测细胞活性来筛选NG浓度;取第2代生长良好的软骨细胞,根据所加培养物的不同将实验分为5组:空白组(C)、模型组(M)、观察组(OH、OM、OL),连续干预72 h,于RNA和蛋白提取前24 h加入IL-1β。通过qRT-PCR和Western Blot检测蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(CoL-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)和SOX9的表达。结果 (1)吖啶橙及甲苯胺蓝染色结果呈阳性,体外分离培养的确为软骨细胞。(2)CCK-8表明,NG浓度在大于10-5mol/L和小于10-9mol/L时,细胞活性较空白组减弱(P<0.05),NG浓度在10-6mol/L到10-8mol/L时,细胞活性增强(P<0.05,P<0.01)。(3)qRT-PCR显示:与空白组相比,模型组CoL-Ⅱ、Aggrecan和SOX9表达量显著降低(P<0.05,P<0.01),MMP-13表达量升高(P<0.05);与模型组比,CoL-Ⅱ、SOX9和Aggrecan明显升高(P<0.05,P<0.01),MMP-13表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。(4)Western Blot显示,与正常组比,模型组CoL-Ⅱ、SOX9和Aggrecan表达量均显著降低(P<0.05,P<0.01),MMP-13表达量升高(P<0.05);与模型组比,NG不同浓度的CoL-Ⅱ、SOX9和Aggrecan表达量均上升;MMP-13下降,且有浓度依赖趋势。结论柚皮苷可以调节软骨细胞基质和炎性微环境,促进软骨细胞CoL-Ⅱ、SOX9、Aggrecan的表达,并抑制MMP-13,进而逆转IL-1β诱导的软骨细胞炎性退变。 展开更多
关键词 柚皮苷 骨关节炎 白介素-1Β 软骨细胞
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唇组织交叉瓣法修复唇部分缺损病人的围术期护理 被引量:3
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作者 石琴莉 全红敏 《护理研究(上旬版)》 2010年第8期2023-2024,共2页
[目的]探讨唇组织交叉瓣法(Abbe氏术)修复唇部分缺损病人的围术期护理要点。[方法]对唇部分缺损病人,术前完善各种检查,术中严密的手术配合,术后皮瓣及伤口的观察,并辅之以全程的心理护理。[结果]15例病人唇瓣术后效果满意,唇外形正常... [目的]探讨唇组织交叉瓣法(Abbe氏术)修复唇部分缺损病人的围术期护理要点。[方法]对唇部分缺损病人,术前完善各种检查,术中严密的手术配合,术后皮瓣及伤口的观察,并辅之以全程的心理护理。[结果]15例病人唇瓣术后效果满意,唇外形正常或接近正常。[结论]Abbe氏术修复病人唇部分缺损安全可靠,及时的观察和有针对性的护理可确保疗效。 展开更多
关键词 唇组织部分缺损 唇交叉瓣法 围术期 护理
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miR-29b介导的TGF-β/Smad信号通路对大鼠肝纤维化进程的影响 被引量:23
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作者 谭洁 田霞 +2 位作者 韩峥 朱庆曦 刘蒙 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期168-173,共6页
目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot... 目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot检测以上获取细胞中mi R-29b、TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和肝纤维化标志蛋白的变化水平,并通过双萤光素酶报告基因检测系统鉴定mi R-29b对TGF-β1的直接靶向结合情况。结果:随着HSC活化加深,mi R-29b的表达量逐渐减少(P <0. 01),而HSC活性标志物I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达量逐渐增加(P <0. 01)。在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2/3/4的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降(P <0. 01)。双萤光素酶报告基因检测结果显示,mi R-29b可直接结合于TGF-β1 3’UTR的"UCUCUCCGU"序列,表明TGF-β1为mi R-29b的一个下游靶基因。结论:mi R-29b可参与抑制HSC的活化和迁移,进而抑制肝纤维化进程,而其生物学功能可能是通过直接靶向抑制TGF-β1进而调控TGF-β/Smad信号通路实现的。 展开更多
关键词 微小RNA-29b TGF-Β/SMAD信号通路 肝星状细胞 肝纤维化
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滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠的作用及对Wnt/β-catenin信号的影响 被引量:14
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作者 孙勤国 徐鸿婕 +5 位作者 罗蒙 江波 吕琨 杨倩 黄天慧 张贤梅 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期419-424,共6页
目的探索滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠治疗及信号通路的影响,为骨质疏松的治疗奠定基础。方法50只SPF级雌性SD大鼠被分为正常对照组(10只),模型组(8只),骨化三醇组(8只),滋阴补肾方低剂量组(8只),滋阴补肾方中剂量组(8只)... 目的探索滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠治疗及信号通路的影响,为骨质疏松的治疗奠定基础。方法50只SPF级雌性SD大鼠被分为正常对照组(10只),模型组(8只),骨化三醇组(8只),滋阴补肾方低剂量组(8只),滋阴补肾方中剂量组(8只),滋阴补肾方高剂量组(8只)。投喂高糖高脂饲料并注射链脲佐菌素建立糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠模型。造模成功后,滋阴补肾方低剂量组,滋阴补肾方中剂量组,滋阴补肾方高剂量组分别灌胃滋阴补肾方5、10、20 g/(kg.d),骨化三醇组大鼠每天灌胃0.1μg/(kg.d)骨化三醇,灌胃给药8周,每日1次。给药结束后,以HE染色的方法观察胫骨结构变化;以Western blot的方法检测p-NF-κB、NF-κB、Ik B、MyD88的蛋白表达水平;以RT-PCR的方法检测Wnt-3α、LRP-5、β-catenin的表达。结果和模型组比较,滋阴补肾方高剂量组胫骨骨小梁排列较密集,骨小梁之间连接增多;中剂量组和高剂量组的p-NF-κB、NF-κB、Ik B、MyD88表达水平均降低,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10水平显著降低,Wnt-3α、LRP-5、β-catenin表达水平均显著升高(P<0.05)。结论滋阴补肾方治疗糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠可显著增加其成骨细胞的数量,增加骨量,可能上调Wnt/β-catenin信号通路来实现的。 展开更多
关键词 WNT/Β-CATENIN 自噬 NF-ΚB
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非创伤性股骨头坏死的基因多态性研究进展 被引量:8
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作者 张恩景 廖文 +2 位作者 蔡进奎 金捷 李章华 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期543-546,551,共5页
非创伤性股骨头坏死(non-traumatic osteonecrosis of femoral head,NONFH)是一类以髋关节疼痛、功能障碍进行性加重为主的疾病,严重危害人体健康,全世界的发病人数呈逐年上升趋势,但其具体发病机制仍不清楚。近年的研究表明,基因多态... 非创伤性股骨头坏死(non-traumatic osteonecrosis of femoral head,NONFH)是一类以髋关节疼痛、功能障碍进行性加重为主的疾病,严重危害人体健康,全世界的发病人数呈逐年上升趋势,但其具体发病机制仍不清楚。近年的研究表明,基因多态性分析有助于破解这一难题。本文综述了与NONFH相关的热点基因,旨在为NONFH的预防和治疗找到新的方法和途径。 展开更多
关键词 非创伤性股骨头坏死 基因多态性 发病机制
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臭氧气浴对深Ⅱ度烧伤大鼠创面病理变化及组织细胞因子表达的影响 被引量:8
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作者 赵超莉 叶子青 +4 位作者 阮琼芳 陈斓 张卫东 王珊 谢卫国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2067-2072,共6页
目的:探讨臭氧气浴干预对大鼠深Ⅱ度烧伤创面的病理变化及局部组织中细胞因子血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子β_3(TGF-β_3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:取80只雄性清洁级SD大鼠,随机分为臭氧气浴实验组和常规... 目的:探讨臭氧气浴干预对大鼠深Ⅱ度烧伤创面的病理变化及局部组织中细胞因子血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子β_3(TGF-β_3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法:取80只雄性清洁级SD大鼠,随机分为臭氧气浴实验组和常规换药对照组各40只。建立背部深Ⅱ度烧伤模型,伤后3 d、7 d、14 d和21d,2组创面分别取材检测。创面常规换药,对照组的创面以生理盐水清洗和碘伏油纱包扎,隔日换药1次;臭氧气浴实验组在换药前将大鼠放入清洁泡沫盒内,打开臭氧发生器开关,以输出浓度为50 mg/L的臭氧熏蒸创面20min,关闭开关,再行创面常规换药,隔日1次,直至愈合。各时点每组大鼠创面打开时取1次创面中心组织标本,然后实验组行生理盐水棉球轻拭创面和臭氧气熏蒸,对照组仅用生理盐水棉球轻拭创面后再分别取材1次。标本行HE染色组织学观察和免疫组化染色半定量观察,结合图像数据分析及ELISA法检测2组创面组织中细胞因子PDGF、TGF-β_3和TNF-α含量。结果:创面大体观察可见,臭氧气浴实验组的创面平整,边缘清晰,炎性反应轻,肿胀和渗出程度均较对照组弱,创面愈合率高于常规换药对照组,2组比较差异有统计学意义。显微镜下观察HE染色组织可见臭氧气浴实验组的创面各时点炎性反应程度比常规换药对照组轻,而新生毛细血管、成纤维细胞和上皮细胞增生数量明显优于常规换药对照组。与对照组比较,臭氧气浴实验组各时点烧伤大鼠的创面组织匀浆上清液中PDGF和TGF-β_3表达量均高于常规换药对照组,而TNF-α表达量明显低于对照组,2组比较差异均有统计学意义。结论:臭氧气浴疗法干预大鼠深Ⅱ度烧伤创面,能改善局部病理变化,促进与创面愈合相关的细胞因子PDGF和TGF-β_3表达,同时减轻炎性介质TNF-α的表达。 展开更多
关键词 烧伤 臭氧气浴 细胞因子
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加味济生肾气汤对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠足细胞及其自噬的影响 被引量:6
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作者 江波 孙勤国 +3 位作者 张贤梅 谢萍 罗蒙 吕琨 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2021年第7期2380-2386,共7页
目的探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响,为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组,模型组,羟苯磺酸钙组,加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后,各组分别以生... 目的探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响,为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组,模型组,羟苯磺酸钙组,加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后,各组分别以生理盐水,羟苯磺酸钙,1 m L/kg/d、4 m L/kg/d、10 m L/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理。6周后,取大鼠肾脏,电镜观察肾脏足细胞形态;免疫组化检测Nephrin的表达;Western blot检测LC3II/I和P62的表达。结果模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚,足细胞排列较紊乱,数目减少,足突融合,在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解;与对照组比较,模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低,LC3II/I比值显著下降,P62水平显著升高。与模型组比较,加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高,LC3II/I比值均显著升高,P62水平显著降低(P<0.05)。结论加味济生肾气汤通过提高自噬水平,减少足突发生融合,提高肾脏的过滤功能。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 NEPHRIN 自噬 足细胞
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携带miRNAs的MSCs来源外泌体在软骨退变损伤修复中的研究进展 被引量:5
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作者 胡静(综述) 李章华(审校) 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第12期1312-1317,共6页
软骨退变损伤(骨关节炎等)发病率呈逐年上升的趋势,给家庭和社会带来沉重压力。间充质干细胞能修复受损软骨已成为共识,随着研究的深入越来越多的证据显示其作用归结于旁分泌系统,尤其是外泌体。外泌体是一脂质双分子层囊性结构,包裹有... 软骨退变损伤(骨关节炎等)发病率呈逐年上升的趋势,给家庭和社会带来沉重压力。间充质干细胞能修复受损软骨已成为共识,随着研究的深入越来越多的证据显示其作用归结于旁分泌系统,尤其是外泌体。外泌体是一脂质双分子层囊性结构,包裹有蛋白质、脂质、mRNA、microRNAs(miRNAs/miRs)等生物活性因子,能够调节细胞的生物学功能。作为细胞间传递重要信息的信号和载体,在软骨退变损伤的修复中发挥着非常重要的作用。文章主要对携带miRNAs的间充质干细胞来源外泌体在软骨损伤修复中的研究进行综述。 展开更多
关键词 外泌体 间充质干细胞 软骨损伤 MIRNAS
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