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日本血吸虫成虫培养细胞SDH和LDH细胞化学研究 被引量：14
1
作者 董惠芬 蒋明森 +2 位作者 刘晴 钟沁萍 朱俊勇 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期69-71,共3页
目的　研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法　将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛... 目的　研究日本血吸虫成虫培养细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)和乳酸脱氢酶 (LDH)含量、分布及变化规律 ,了解日本血吸虫成虫培养细胞的能量代谢类型。方法　将虫龄 2 6d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上 ,培养于RPMI- 16 4 0含2 0 %小牛血清附加常量抗生素的培养基中 ,定时运用Pearson法进行SDH和LDH染色 ,用Olympus-BH2 显微镜观察并拍照 ,用HPIAS - 2 0 0 0图像分析仪测量其含量 ,并作统计分析。结果　日本血吸虫成虫培养细胞均具有SDH和LDH活性 ,两者均分布在细胞质内。培养 1d细胞的SDH和LDH活性最强 ,随着培养时间延长 ,其活性逐渐减弱 ,其中SDH活性下降较快 ,培养 5d大部分细胞SDH活性已极弱 ;而LDH活性下降则较缓 ,培养 5 6d细胞仍具LDH活性。结论　体外培养的日本血吸虫成虫细胞的能量代谢类型与成虫相似 ,既存在三羧酸循环需氧型呼吸链 ,也具有无氧糖酵解 ,但以无氧糖酵解为主。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫培养细胞 琥珀酸脱氢酶 乳酸脱氢酶 细胞化学 能量代谢
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刚地弓形虫DXR基因的克隆表达与生物学特性分析 被引量：3
2
作者 章莹 宗红英 +1 位作者 何立 蔡国斌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1091-1095,共5页
目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双... 目的对刚地弓形虫1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(TgDXR)基因进行克隆、表达、纯化和生物学特性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取cDNA和基因组DNA;PCR扩增TgDXR的基因片段;构建成熟TgDXR/pET-24b重组原核表达载体;经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达。亲和层析纯化重组TgDXR蛋白,并对该蛋白的生物学特性和酶的动力学活性进行分析。结果从弓形虫RH株的cDNA和基因组DNA中分别扩增出长度为1 542bp和5 464bp的TgDXR片段,成功构建重组质粒;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白的相对分子量约50kDa。酶活性实验显示,Mg2+、Mn2+是最佳金属螯合离子,反应最佳pH值为7.5,该酶活性抑制剂膦胺霉素(Fosmidomycin)对该酶蛋白的IC50为0.52μmol/L。结论 RH株刚地弓形虫TgDXR可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有生物学活性,并有望作为弓形虫特异性药物靶标。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 DXR 克隆表达 膦胺霉素
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肝基质与MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究 被引量：1
3
作者 明珍平 钟沁萍 +2 位作者 董惠芬 蒋明森 张兆仁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期259-262,共4页
目的研究肝基质与甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质的影响。方法日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片（实验1组）和铺敷有肝基质的小盖玻片上（随机分为实验2组和3组），培养于含20％小牛血清及常量抗... 目的研究肝基质与甲基硝基亚硝基胍（MNNG）对日本血吸虫成虫培养细胞糖类物质的影响。方法日本血吸虫成虫细胞分别接种于普通小盖玻片（实验1组）和铺敷有肝基质的小盖玻片上（随机分为实验2组和3组），培养于含20％小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。培养第4d，实验1组和3组细胞分别在含3μg/ml MNNG的常规培养基中培养48h，彻底清洗后继续用常规培养基培养；实验2组细胞用不含MNNG的常规培养基处理相同时间。培养第4w。均换用含5％小牛血清的低血清培养基培养。培养第5～7w，每周取各组细胞进行高碘酸雪夫（PAS）染色和唾液淀粉酶处理后的PAS染色，观察培养细胞内糖类物质的含量及分布变化。取培养第6w（MNNG作用后第5w）的各组染色细胞，用HPIAS-2000图像分析仪测定细胞内代表糖含量的光密度，并作统计学分析。结果实验3组细胞与实验1、2组比较，PAS染色显示的四种类型细胞其着色均显著增强，淀粉酶处理后的PAS染色显示细胞内糖原含量增多，差异均具显著性（P〈0．01）。培养过程中，第二类细胞数目逐渐增多，体积增大；分裂细胞增多。这种状况在MNNG处理后第5w最为明显。结论肝基质和MNNG联合可显著增强日本血吸虫培养细胞的糖代谢和分裂增殖能力，二者具协同作用能力。 展开更多
关键词 日本血吸虫 培养细胞 糖 肝基质 甲基硝基亚硝基胍
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化学诱变剂对日本血吸虫成虫作用的初步研究
4
作者 明珍平 董惠芬 +2 位作者 蒋明森 易同寅 钟沁萍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期83-84,共2页
　　化学诱变剂MNNG诱导对日本血吸虫成虫形态结构变化(畸变)具有一定的影响.本文主要对其影响程度进行初步研究.具体方法是将虫龄为28天的日本血吸虫成虫,随机分成二组.一组分别用不同浓度的MNNG(1、2、3、4、5、6μg/ml)诱导24hrs;另... 　　化学诱变剂MNNG诱导对日本血吸虫成虫形态结构变化(畸变)具有一定的影响.本文主要对其影响程度进行初步研究.具体方法是将虫龄为28天的日本血吸虫成虫,随机分成二组.一组分别用不同浓度的MNNG(1、2、3、4、5、6μg/ml)诱导24hrs;另一组用不同浓度的MNNG(1,2,3μg/ml)分别诱导24,36、48hrs.随后均被彻底清洗,并用851培养基培养,每周在光镜下观察虫体形态结构、活力等的变化,记录虫体死亡率以及虫体畸变率,对畸变成虫拍照并做扫描电镜观察.…… 展开更多
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肝基质和MNNG对日本血吸虫成虫培养细胞糖细胞化学作用的研究
5
作者 明珍平 钟沁萍 +1 位作者 董惠芬 蒋明森 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期84-85,共2页
　　本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPM... 　　本文主要研究肝基质和MNNG共同作用对日本血吸虫成虫培养细胞增殖及细胞内糖类物质的影响.方法:将虫龄为32天的日本血吸虫成虫细胞,分别接种于普通盖玻片(实验Ⅰ组)和铺敷有肝基质的盖玻片上(随机分为实验Ⅱ和Ⅲ组),细胞培养基为RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素.培养第4天,实验Ⅰ组和Ⅲ组细胞分别在含3μg/ml MNNG的培养基中培养48小时,彻底清洗后继续用含20%小牛血清的RPMI-1640培养.实验Ⅱ组细胞用不含MNNG的培养基处理相同时间.…… 展开更多
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肠球菌溶血素与其致病力的关系 被引量：9
6
作者 强华 林建银 +3 位作者 蒋明森 王耿夏 佘菲菲 苏东辉 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期68-70,共3页
目的　探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用。方法　分别检测 3 9株临床标本分离的粪肠球菌以及 3 1株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率 ;并检测了β溶血肠球菌、非 β溶血肠球菌对 9种抗生素的敏感性。 结果　临床菌株的溶血素检... 目的　探讨肠球菌溶血素的毒力因子作用。方法　分别检测 3 9株临床标本分离的粪肠球菌以及 3 1株健康人群粪便分离的粪肠球菌的溶血素检出率 ;并检测了β溶血肠球菌、非 β溶血肠球菌对 9种抗生素的敏感性。 结果　临床菌株的溶血素检出率为 5 8.9% ,健康人群分离株的溶血素检出率为 19.3 % (P <0 .0 0 5 ) ;β溶血株对抗生素的耐药性明显高于非 β溶血株 (P <0 .0 1)。 展开更多
关键词 肠球菌 溶血素 毒力 耐药
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日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究 被引量：7
7
作者 董惠芬 彭延 +2 位作者 蒋明森 明珍平 钟沁萍 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期492-494,499,共4页
目的 通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法 联合法培养... 目的 通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法 联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmoL/L β-巯基乙醇和1mmoL/L丙酮酸钠。培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度。结果 日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞。统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数日,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高。统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标。日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能; 展开更多
关键词 日本血吸虫 细胞培养 核仁组织区相关嗜银蛋白 β-巯基乙醇
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隐孢子虫病的实验诊断 被引量：11
8
作者 明珍平 董惠芬 蒋明森 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期103-106,共4页
关键词 隐孢子虫病 诊断 病原学 免疫学 分子生物学
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鼠胚胎成纤维细胞饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞LDH、ACP影响的研究 被引量：3
9
作者 熊飞 李俊琳 +3 位作者 明珍平 钟沁萍 董惠芬 蒋明森 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期502-505,共4页
目的以乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)为评价指标,研究鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞代谢的影响。方法实验分MEF与肝基质联合组(后简称联合组)、MEF组、肝基质组和对照组4组。联合组与肝基... 目的以乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)为评价指标,研究鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞代谢的影响。方法实验分MEF与肝基质联合组(后简称联合组)、MEF组、肝基质组和对照组4组。联合组与肝基质组预先铺敷肝基质,MEF组和对照组未铺敷肝基质,将虫龄21d的日本血吸虫童虫细胞分别接种于预先铺敷或未铺敷肝基质的小盖玻片上。肝基质组和对照组细胞培养于RPMI1640含20%小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中,联合组与MEF组的细胞培养于有MEF饲养层的常规培养基中。培养第7d,运用酶细胞化学方法对日本血吸虫童虫培养细胞进行LDH、ACP染色,OlympusBX51显微镜下观察并拍照,HIPAS2000图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果4组童虫培养细胞其LDH、ACP活性不同。LDH、ACP着色按联合组、MEF组、肝基质组、对照组依次变浅。定量分析显示,培养细胞的LDH含量,各组之间两两比较差异具显著性(P<0.01);联合组、MEF组、肝基质组培养细胞的ACP含量两两比较存在显著差异(p<0.01),联合组、MEF组与对照组之间比较差异具统计学意义(P<0.01),而肝基质组与对照组之间差异无显著性(P>0.05)。结论MEF饲养层能促进日本血吸虫童虫培养细胞的代谢,并能与肝基质协同促进培养细胞代谢。 展开更多
关键词 日本血吸虫童虫细胞培养 MEF饲养层 肝基质 乳酸脱氢酶 酸性磷酸酶
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并殖吸虫的分类和遗传多样性研究概述 被引量：5
10
作者 顾梦杰 李友松 +1 位作者 董惠芬 赵琴平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期744-750,共7页
并殖吸虫是肺吸虫病的病原体。随着大量新种的报道,单一的形态学依据难以准确区分虫种,结合生活史各阶段虫体形态的多特征分析成为了鉴别虫种的主要方法。此外,利用不同的分子标记,不仅为并殖吸虫的系统分类补充了更有力的证据,亦为其... 并殖吸虫是肺吸虫病的病原体。随着大量新种的报道,单一的形态学依据难以准确区分虫种,结合生活史各阶段虫体形态的多特征分析成为了鉴别虫种的主要方法。此外,利用不同的分子标记,不仅为并殖吸虫的系统分类补充了更有力的证据,亦为其遗传进化的相关研究提供了更丰富的信息。本文将对并殖吸虫的分类和遗传多样性的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 并殖吸虫 系统分类 遗传多样性
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