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题名自噬对宫颈癌细胞干性及增殖能力的影响
被引量：3
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作者
杨毅
丁妍
于爱清
严世荣
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机构
武汉大学中南医院基因诊断中心.武汉
湖北医药学院生化教研室
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出处
《重庆医科大学学报》
CSCD
北大核心
2017年第11期1390-1394,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81541147)
湖北医药学院博士研究生启动金资助项目(编号:2015QDJZR01)
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文摘
目的:研究自噬对宫颈癌细胞干性及增殖能力的影响。方法:采用悬浮培养法分离HeLa肿瘤干细胞,免疫荧光检测干细胞标志基因CD133和Nanog,吖啶橙染色观察自噬小体的形成;Western blot检测贴壁细胞和肿瘤干细胞中自噬相关基因Beclin1和LC3B的表达情况;贴壁细胞和肿瘤干细胞平衡盐溶液EBSS饥饿处理4 h和8 h后,吖啶橙染色观察自噬小体的形成,Western blot检测Beclin1和LC3B表达,实时细胞检测系统检测野生型和饥饿处理后HeLa细胞的增殖能力;自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)阻断宫颈癌贴壁细胞和干细胞的自噬后,Western blot检测Beclin1和LC3B表达,实时细胞检测系统检测野生型和自噬抑制剂处理后HeLa细胞的增殖能力;运用CRISPR/Cas9基因编辑技术降低自噬基因Beclin1的表达,通过实时细胞检测系统检测野生型和Beclin1突变HeLa细胞的增殖能力。结果:基础水平下,HeLa肿瘤干细胞比HeLa贴壁细胞自噬水平高。饥饿诱导处理后,HeLa肿瘤干细胞和HeLa贴壁细胞自噬水平均增高,均在4 h最强,8 h后有所减弱,且HeLa肿瘤干细胞在饥饿诱导各时间点均比HeLa贴壁细胞强;HeLa细胞饥饿处理4 h和8 h后增殖能力均有所下降,8 h下降更明显。应用3-MA后,HeLa肿瘤干细胞和HeLa贴壁细胞自噬均减弱,且HeLa贴壁细胞自噬减弱更为明显;细胞增殖能力也明显减弱。Beclin1突变后HeLa细胞较野生型HeLa细胞增殖能力增强。结论:自噬参与维持宫颈癌HeLa细胞的干性。同时,自噬也能影响宫颈癌HeLa细胞的增殖能力。通过基因打靶扰乱自噬关键基因(如Beclin1或LC3B等)而改变宫颈癌细胞自噬水平可为宫颈癌的治疗带来新的治疗策略。
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关键词
自噬:宫颈癌干细胞
BECLIN1
LC3B
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Keywords
autophagy
cervical cancer cells
Beclin 1
LC3B
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分类号
R737.33
[医药卫生—肿瘤]
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