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鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用
1
作者
张蓉蓉
潘爱銮
+6 位作者
吴娟
方兵兵
汪最
卢琴
张腾飞
温国元
罗青平
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期5470-5478,共9页
【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核...
【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。
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关键词
鸭坦布苏病毒
非结构蛋白
亚细胞定位
IFN-β信号通路
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职称材料
题名
鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用
1
作者
张蓉蓉
潘爱銮
吴娟
方兵兵
汪最
卢琴
张腾飞
温国元
罗青平
机构
湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司
武汉
科前
生物
股份有限公司
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第12期5470-5478,共9页
基金
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-41-G13)
湖北省畜禽优质增效与绿色养殖科技创新行动(2018skjcx05)。
文摘
【目的】探究鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白的亚细胞定位及其在β-干扰素(IFN-β)信号通路中的作用。【方法】通过RT-PCR法扩增DTMUV的7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS-HA,构建重组真核表达质粒,并分别转染至HEK-293T细胞,通过Western blotting检测蛋白表达;利用间接免疫荧光试验检测非结构蛋白的亚细胞定位情况,通过双荧光素酶报告试验研究DTMUV的非结构蛋白对鸭源IFN-β启动子活性的影响。【结果】试验成功构建DTMUV的7个非结构蛋白带HA标签的真核表达质粒。Western blotting结果显示,真核表达非结构蛋白均正常表达,NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5蛋白分子质量大小分别为38、25、14.4、68、13.9、28和100 ku。间接免疫荧光试验结果显示,7个非结构蛋白在细胞内的表达形态不一,主要定位在细胞浆中。双荧光素酶报告试验结果表明,与对照组相比,过表达NS2B和NS4B蛋白后,鸭源IFN-β启动子活性极显著降低(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了DTMUV的7个非结构蛋白的真核表达质粒,非结构蛋白主要表达于细胞浆中,其中NS2B和NS4B蛋白具有颉颃IFN-β活性的功能。试验结果为DTMUV的免疫逃逸研究提供了一定的理论依据,并为深入探究DTMUV在宿主天然免疫信号通路中的作用机制提供了试验材料。
关键词
鸭坦布苏病毒
非结构蛋白
亚细胞定位
IFN-β信号通路
Keywords
Duck Tembusu virus
nonstructural protein
subcellular location
IFN-βsignal pathway
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭坦布苏病毒非结构蛋白亚细胞定位及其在IFN-β信号通路中的作用
张蓉蓉
潘爱銮
吴娟
方兵兵
汪最
卢琴
张腾飞
温国元
罗青平
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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