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ORFV-Yulin株的分离鉴定及其B2L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达
被引量：
3
1
作者
冯平
李云章
+2 位作者
孙丰廷
屈雷
闫海龙
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2017年第9期32-38,共7页
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中...
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名为ORFV-Yulin株;扩增的B2L全长基因长度为1 137bp,与Hub13和GY-AHF10株亲缘关系最近,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为99%和99.2%。通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了B2L基因,获得了47ku的重组蛋白。【结论】从榆林市陕北白绒山羊中获得了羊口疮病毒分离株(ORFV-Yulin);通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了ORFV-Yulin株的B2L基因。
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关键词
羊口疮病毒
B2L基因
昆虫杆状病毒表达系统
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职称材料
羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达
被引量：
4
2
作者
冯平
李云章
+2 位作者
孙丰廷
屈雷
闫海龙
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2018年第6期1-8,共8页
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r ...
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。
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关键词
羊口疮病毒
F1L基因
F1L+B2L串联表达
昆虫杆状病毒
基因表达
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职称材料
题名
ORFV-Yulin株的分离鉴定及其B2L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达
被引量：
3
1
作者
冯平
李云章
孙丰廷
屈雷
闫海龙
机构
内蒙古农业大学兽医学院
榆林学院生命科学学院
武汉中拓康明生物科技有限公司
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2017年第9期32-38,共7页
基金
陕西省科技厅农业科技创新与攻关项目(2016NY-120)
陕西省科技厅重大统筹项目(2014KTDZ02-01)
+1 种基金
陕西省教育厅专项科研计划项目(14JK1860)
榆林学院重点项目(14YK41)
文摘
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名为ORFV-Yulin株;扩增的B2L全长基因长度为1 137bp,与Hub13和GY-AHF10株亲缘关系最近,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为99%和99.2%。通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了B2L基因,获得了47ku的重组蛋白。【结论】从榆林市陕北白绒山羊中获得了羊口疮病毒分离株(ORFV-Yulin);通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了ORFV-Yulin株的B2L基因。
关键词
羊口疮病毒
B2L基因
昆虫杆状病毒表达系统
Keywords
Orf virus （ORFV）
B2L gene
baculovirus expression system
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达
被引量：
4
2
作者
冯平
李云章
孙丰廷
屈雷
闫海龙
机构
内蒙古农业大学兽医学院
榆林学院生命科学学院
武汉中拓康明生物科技有限公司
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2018年第6期1-8,共8页
基金
陕西省科技厅农业科技创新与攻关项目(2016NY-120)
陕西省科技厅重大统筹项目(2014KTDZ02-01)
+1 种基金
陕西省教育厅专项科研计划项目(14JK1860)
榆林学院重点项目(14YK41)
文摘
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。
关键词
羊口疮病毒
F1L基因
F1L+B2L串联表达
昆虫杆状病毒
基因表达
Keywords
Orf virus （ORFV）
F1L gene
co-expression of B2L and FIL
baculovirus
gene expression
分类号
S852.654 [农业科学—基础兽医学]
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ORFV-Yulin株的分离鉴定及其B2L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达
冯平
李云章
孙丰廷
屈雷
闫海龙
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2017
3
在线阅读
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职称材料
2
羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达
冯平
李云章
孙丰廷
屈雷
闫海龙
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2018
4
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