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小鼠重组鞘磷脂脂蛋白免疫原性多肽片段的原核表达与纯化
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作者 白晔 董荔红 +1 位作者 周远红 兰风华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期886-891,共6页
目的建立并优化重组小鼠鞘磷脂脂蛋白(PLP)免疫原性多肽片段(PLP139-208)的原核表达方法.方法构建重组质粒PLP-pET-32a(+),利用基因工程技术将质粒转化到BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,进行PLP139-208的原核表达... 目的建立并优化重组小鼠鞘磷脂脂蛋白(PLP)免疫原性多肽片段(PLP139-208)的原核表达方法.方法构建重组质粒PLP-pET-32a(+),利用基因工程技术将质粒转化到BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,进行PLP139-208的原核表达.为提高多肽片段的获得量,从诱导时间、诱导温度2个方面进行原核表达条件优化.诱导表达的蛋白多肽经Ni-NTA树脂纯化后,用Weestern blot法进行蛋白鉴定.结果表达条件优化、并经Western blot法蛋白鉴定后,确定诱导温度23℃、诱导时间20 h、0.5 mmol/L IPTG作为PLP多肽的最适原核表达条件.结论建立小鼠重组PLP139-208蛋白原核表达方法,为改良EAE动物模型的制备方法及研究PLP诱导自身免疫性脱髓鞠病变的机制奠定了实验基础. 展开更多
关键词 鞘磷脂脂蛋白(PLP) 原核表达 蛋白纯化 自身免疫性脱髓鞘
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高效液相色谱法同时测定万应茶中5种蒽醌成分
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作者 马健锦 高忠坂 李少华 《数字农业与智能农机》 2021年第24期75-77,共3页
此方法的目的是建立万应茶中大黄5个蒽醌类成分的含量测定方法。采用高效液相色谱法,以Thermo Hypersil GolD TM C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为分离柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;流速为1 ml·min^(-1);柱温为30... 此方法的目的是建立万应茶中大黄5个蒽醌类成分的含量测定方法。采用高效液相色谱法,以Thermo Hypersil GolD TM C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为分离柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;流速为1 ml·min^(-1);柱温为30℃;检测波长为440 nm;进样体积10μl。结果为各成分在线性范围内(0.20μg·ml^(-1)~20.00μg·ml^(-1)),相关系数良好(r≥0.9964),加标回收率为95.2%~105.4%之间,RSD<2.0%。该方法操作简单,分离度,精密度,准确度良好,可用于万应茶中大黄蒽醌类成分含量测定。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 蒽醌 万应茶
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