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湖南省油茶炭疽病病原鉴定 被引量:53
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作者 李河 李杨 +2 位作者 蒋仕强 刘君昂 周国英 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第8期43-53,共11页
【目的】研究湖南省油茶炭疽病病原,为该病害的防控提供依据。【方法】采集湖南省长沙、株洲、浏阳、永州、怀化、常德、常宁等油茶主产区9个样地的典型油茶炭疽病叶,分离纯化叶片病健交界处的真菌菌株,观察菌株在(PDA)培养基上的菌落... 【目的】研究湖南省油茶炭疽病病原,为该病害的防控提供依据。【方法】采集湖南省长沙、株洲、浏阳、永州、怀化、常德、常宁等油茶主产区9个样地的典型油茶炭疽病叶,分离纯化叶片病健交界处的真菌菌株,观察菌株在(PDA)培养基上的菌落、分生孢子及附着孢的形态特征,确定为炭疽属真菌。进一步对炭疽属菌株进行柯赫氏法则验证,确定油茶炭疽病病原菌菌株。对获得病原菌的r DNA-ITS、CAL和GAPDH 3个基因进行PCR扩增和测序,得到的基因序列与GenBank中已有模式炭疽属菌株序列按照3个基因一致的顺序拼接后采用PAUP和MrBayes软件构建系统发育树。【结果】从湖南省9个采样地共分离获得62株炭疽属菌株,致病性测试表明这62株菌均能对油茶嫩叶和果致病,但不同菌株的发病时间具有一定差异;根据形态特征及多基因系统发育分析,最终明确湖南省油茶炭疽病的病原种类。【结论】湖南省油茶炭疽病的病原菌包含果生炭疽菌、暹罗炭疽菌、胶孢炭疽菌、山茶炭疽菌和哈锐炭疽菌5种炭疽属真菌,其中果生炭疽菌分布范围最广,分离率最高,达到64.5%。 展开更多
关键词 油茶 炭疽病 病原菌
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调控油茶果生刺盘孢bZIP转录因子CfAp1的生物学功能 被引量:12
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作者 高亚兰 何苑皋 李河 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第9期30-39,共10页
【目的】研究油茶炭疽病的主要流行致病菌果生刺盘孢菌b ZIP转录因子Cf Ap1的生物学功能,以期阐明果生刺盘孢菌致病的分子机制,为油茶炭疽病的防治提供理论依据。【方法】提取果生刺盘孢菌全基因组DNA,根据同源重组原理构建Cf AP1基因... 【目的】研究油茶炭疽病的主要流行致病菌果生刺盘孢菌b ZIP转录因子Cf Ap1的生物学功能,以期阐明果生刺盘孢菌致病的分子机制,为油茶炭疽病的防治提供理论依据。【方法】提取果生刺盘孢菌全基因组DNA,根据同源重组原理构建Cf AP1基因敲除载体片段,采用PEG介导法把该片段转化至果生刺盘孢菌野生型菌株的原生质体中,验证筛选突变体菌株;PCR扩增果生刺盘孢菌含有启动子的Cf AP1基因回补片段,构建回补载体p YF11::Cf AP1;采用PEG介导法把回补载体p YF11::Cf AP1转化至果生刺盘孢菌突变体菌株的原生质体中,获得回补菌株ΔCfap1/AP1。测定野生型菌株、突变体菌株ΔCfap1-8及基因回补菌株ΔCfap1/AP1在生长发育、附着胞形成、外界胁迫和致病力等生物学表型。【结果】果生刺盘孢菌中具有1个与灰色大角间座壳(稻瘟菌) b ZIP转录因子MoAp1直系同源的基因,命名为Cf AP1;该基因全长1 804 bp,编码566个氨基酸,该蛋白含有1个碱性亮氨酸链(b ZIP)结构域、2个PAP1结构域和2个未知功能的结构域;与野生型和回补菌株相比,突变体ΔCfap1-8生长速率没有明显影响,但气生菌丝显著减少;通过测量产孢量,发现突变体ΔCfap1-8的分生孢子显著减少;ΔCfap1-8在含2.5、5 mmol·L-1H2O2和0.7 mol·L-1Na Cl的PDA平板上菌丝生长受到明显抑制;致病力测试结果表明,果生刺盘孢菌基因敲除突变体ΔCfap1-8对无伤和有伤油茶叶片的致病力下降明显,与野生型和回补菌株的致病力差异显著;突变体分生孢子产生附着胞数量减少且膨压降低。【结论】转录因子Cf Ap1参与调控油茶果生刺盘孢菌的生长发育、产孢、致病力以及响应外界氧压胁迫和渗透压胁迫过程。 展开更多
关键词 油茶 果生刺盘孢菌 bZIP转录因子 CfAp1 致病力
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越南黄檀锈病病原菌的鉴定 被引量:1
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作者 王姣 周国英 +4 位作者 苏圣淞 何苑皞 董文统 张茜 刘君昂 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第11期165-169,共5页
【目的】描述在海南省澄迈县新发现的越南黄檀锈病的症状及其孢子形态特征,并提取DNA进行ITS序列扩增测序,从而鉴定该病的病原。【方法】实地调查该病害的发生和为害情况,观察并记录病害症状。采集该病新鲜夏孢子,制备浓度为1×105... 【目的】描述在海南省澄迈县新发现的越南黄檀锈病的症状及其孢子形态特征,并提取DNA进行ITS序列扩增测序,从而鉴定该病的病原。【方法】实地调查该病害的发生和为害情况,观察并记录病害症状。采集该病新鲜夏孢子,制备浓度为1×105个·m L-1的夏孢子悬浮液,对越南黄檀健康叶片进行涂抹接种,采用单孢子堆分离法获得1株越南黄檀锈病纯培养物HNCM1。利用孢子形态观察结合ITS序列分析的方法对该病原菌进行鉴定。【结果】越南黄檀锈病为害寄主叶片与枝条,以当年生嫩枝叶为主,每年暴发2次,4月上旬—6月上旬与9月中旬—11月上旬为2个盛发期,重病株发病率可达75%以上。夏孢子堆初期为黄色或橙黄色,粉状,一般长在叶背面圆形或椭圆形小突起上,直径约0.2-2.5 mm,严重时连接成片引起嫩叶卷曲或畸形,后期在叶片上形成锈褐色枯死斑,导致老叶枯死或早落;夏孢子圆形、椭圆形,表面有小刺,萌发孔不明显,大小为(13-21)μm×(10-16)μm,壁厚约1μm。冬孢子堆苍白色、胶质状,天气转凉时偶见,呈圆形,小于夏孢子堆;冬孢子椭圆形、棍棒形或近纺锤形,大小为(19-28)μm×(13-16)μm,无色,光滑单细胞,具柄,长约7-10μm,壁厚约1μm。该病原ITS序列扩增产物长约750 bp,产物经双向测序拼接后得到640 bp,进行Blast比对,结果表明,病原菌ITS序列与Gen Bank中已有的序列同源性较低,最高仅为90%。【结论】引起海南省澄迈县越南黄檀锈病的病原菌为紫檀无眠单胞锈菌,夏孢子ITS序列在Gen Bank中尚无同源性较高序列,获取HNCM1菌株的Gen Bank登录号为KU301795。 展开更多
关键词 锈病 越南黄檀 紫檀无眠单胞锈菌 海南
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越南黄檀锈菌与锈菌瘿蚊关系
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作者 王姣 周国英 +4 位作者 苏圣淞 何苑皞 董文统 张茜 刘君昂 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第7期105-110,共6页
【目的】对越南黄檀锈病及其食菌昆虫黄檀锈菌瘿蚊(双翅目:瘿蚊科)的生物学特性及其与锈菌发生的关系进行研究,为锈菌瘿蚊用于生物防治提供参考。【方法】通过室内饲养观察研究不同发育阶段的锈菌瘿蚊形态特征及生活习性,以及通过定期... 【目的】对越南黄檀锈病及其食菌昆虫黄檀锈菌瘿蚊(双翅目:瘿蚊科)的生物学特性及其与锈菌发生的关系进行研究,为锈菌瘿蚊用于生物防治提供参考。【方法】通过室内饲养观察研究不同发育阶段的锈菌瘿蚊形态特征及生活习性,以及通过定期林间调查及室内观察,研究锈菌瘿蚊锈菌瘿蚊的生活史及其与锈菌的关系。【结果】锈菌瘿蚊卵椭圆形,表面光滑,通体透明,背侧弧形而腹侧平直。幼虫纺锤形,头部白色,体两侧是透视可见波浪状的白色脂肪体,中间橙黄色至红褐色,幼虫无足型,体12节。蛹为离蛹,其发育过程可分为前期、中期和后期。雌成虫全身密被绒毛;头黑褐色,三角形;触角念珠状,2+12节,鞭小节呈单结型圆柱状,其上有环丝;3对足近等长;前翅发达,透明,布满绒毛。雄成虫触角念珠状,2+9节,鞭小节双结状,端结中部缢缩而呈近三结状,每鞭小节的端结有两轮环丝,基结有一轮环丝;生殖器基部较粗,前端尖细,其他特征类似雌虫。幼虫以夏孢子为食,1个叶片上可发现0~50头不等的幼虫,黄色夏孢子堆经其取食后变成灰色孢子堆,对灰色夏孢子堆进行显微观察,可发现夏孢子内含物消失、夏孢子内陷或破裂。在澄迈县9月上旬越冬代老熟幼虫停止休眠,在茧内直接化蛹,然后羽化为成虫,9月下旬羽化结束,10—11月为幼虫暴发盛期,1年发生3代,具有世代重叠现象。越南黄檀锈病几乎全年均有发生,有2个明显的暴发期,锈菌瘿蚊出现于第2个暴发期,且在锈病第2个暴发期内锈病病情指数与锈菌瘿蚊幼虫数量的相关系数可达0.82。【结论】黄檀锈菌瘿蚊是越南黄檀人工林中新发现的食菌性昆虫,自然条件下该黄檀锈菌瘿蚊对越南黄檀锈病有较为显著的控制作用,具有一定的生防利用前景。 展开更多
关键词 锈菌瘿蚊 越南黄檀 锈病 生物防治 海南
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