CRMP1基因慢病毒干扰质粒构建及其对SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体蛋白表达的影响

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作者 王松豪 秦坤 +3 位作者 韩雨 张微微 徐绍业 邵晓云 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期433-438,共6页

目的:构建靶向坍塌反应调节蛋白1(CRMP1)基因的慢病毒干扰质粒,建立稳定敲减CRMP1的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)稳转细胞系,探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响。方法:以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链,克隆至PLKO.1载体,构... 目的:构建靶向坍塌反应调节蛋白1(CRMP1)基因的慢病毒干扰质粒,建立稳定敲减CRMP1的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)稳转细胞系,探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响。方法:以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链,克隆至PLKO.1载体,构建CRMP1重组干扰质粒。将重组正确的shCRMP1质粒转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得的慢病毒上清浓缩后感染SH-SY5Y细胞,Western blot检测SH-SY5Y细胞内CRMP1的干扰效果及其对NLRP3炎症小体各组分蛋白表达的影响。结果:DNA测序结果显示,pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒构建成功;转染HEK-293T细胞包装慢病毒后,细胞内CRMP1蛋白表达下降;慢病毒浓缩液感染SH-SY5Y细胞经嘌呤霉素筛选,Western blot发现shCRMP1慢病毒能显著下调SH-SY5Y细胞中CRMP1蛋白表达。同时稳定敲减CRMP1的SH-SY5Y细胞系中发现,MPP^(+)诱导下,抑制CRMP1表达可有效抑制NLRP3炎症小体活化。结论:成功构建pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒,且干扰CRMP1可抑制MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体活化,为进一步研究CRMP1在帕金森病等神经退行性疾病中的发生机制奠定基础。 展开更多

关键词 坍塌反应调节蛋白1 慢病毒干扰 人神经母细胞瘤细胞 NLRP3炎症小体

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糖脂转运蛋白对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

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作者 卢梦云 韩语诚 +3 位作者 胡溢洪 何旻蕙 张艳群 邹先琼 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期284-295,共12页

目的:探讨人类糖脂转运蛋白(GLTP)对胰腺癌(PC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析平台(UALCAN)数据库分析PC组织和正常胰腺组织中GLTP蛋白表达差异,以及不同临床病理特征PC患... 目的:探讨人类糖脂转运蛋白(GLTP)对胰腺癌(PC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:采用阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析平台(UALCAN)数据库分析PC组织和正常胰腺组织中GLTP蛋白表达差异,以及不同临床病理特征PC患者PC组织和正常胰腺组织中GLTP蛋白表达的差异。体外培养人PC细胞PANC-1细胞,分为对照组(转染pFLAG-CMV4质粒)和GLTP过表达(GLTP-OE)组(转染pFLAG-GLTP质粒),采用抗生素筛选法建立稳定转染GLTP的细胞;敲低实验采用非特异siRNA转染PANC-1细胞作为对照组,si-GLTP转染PANC-1细胞作为si-GLTP组。采用Western blotting法检测细胞中GLTP蛋白表达情况,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测PANC-1细胞的增殖活性,克隆形成实验检测PANC-1细胞克隆形成数,Transwell小室实验检测PANC-1细胞的迁移及侵袭细胞数;转录组测序分析GLTP影响PANC-1细胞的潜在作用机制;Western blotting法检测各组PANC-1细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RTqPCR)法检测各组细胞中双调蛋白(AREG)和激酶插入域受体(KDR) mRNA表达水平。小鼠随机分为对照组(注射pFLAG-CMV4转染的PANC-1细胞)和实验组(注射pFLAG-GLTP稳定转染的PANC-1细胞),制备小鼠皮下移植瘤模型,检测2组小鼠移植瘤体积和质量。结果:UALCAN数据库分析,PC组织中GLTP蛋白表达水平低于正常胰腺组织(P<0.01),且不同癌症分期(P<0.05)、肿瘤分级(P<0.05)、年龄(P<0.001)和性别(P<0.05) PC患者PC组织与正常胰腺组织中GLTP蛋白表达水平比较差异有统计学意义。与对照组比较,GLTP-OE组细胞增殖活性(P<0.01)和克隆形成数(P<0.001)明显降低,迁移细胞数(P<0.001)和侵袭细胞数(P<0.01)明显降低。敲低实验,与对照组比较,si-GLTP组细胞增殖活性(P<0.01)和克隆形成数(P<0.05)明显升高,迁移细胞数(P<0.001)和侵袭细胞数(P<0.001)明显升高。与对照组比较,实验组小鼠注入肿瘤细胞4周后,肿瘤质量和体积降低(P<0.01)。过表达实验,与对照组比较,GLTP-OE组细胞中p-PI3K (P<0.01)、p-Akt-S473 (P<0.01)和p-Akt-T308 (P<0.05)蛋白表达水平降低,AREG (P<0.01)和KDR (P<0.01) mRNA表达水平降低。敲低实验,与对照组比较,si-GLTP组细胞中p-PI3K (P<0.01)、p-Akt-S473 (P<0.01)和p-Akt-T308 (P<0.01)蛋白表达水平升高,AREG (P<0.01)和KDR (P<0.05) mRNA表达水平升高。结论:GLTP在PC组织中呈低表达。GLTP过表达能抑制PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制裸鼠皮下移植瘤生长,其可能的作用机制与降低PI3K/Akt信号通路活性有关。 展开更多

关键词 糖脂转运蛋白 胰腺肿瘤 人胰腺癌细胞 细胞增殖 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B

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肝细胞癌预后、诊断和免疫细胞浸润相关关键基因及其潜在治疗药物的生物信息学分析 被引量：2

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作者 黎金连 黄岚珍 +4 位作者 黄希仕 李康智 蒋佳丽 张苗苗 吴群英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1062-1075,共14页

目的:利用生物信息学分析方法筛选与肝细胞癌(HCC)患者预后、诊断和免疫细胞浸润相关的关键基因,并分析其潜在治疗药物。方法:从基因表达汇编(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载HCC基因表达谱数据及相应的HCC患者临床信息。采... 目的:利用生物信息学分析方法筛选与肝细胞癌(HCC)患者预后、诊断和免疫细胞浸润相关的关键基因,并分析其潜在治疗药物。方法:从基因表达汇编(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载HCC基因表达谱数据及相应的HCC患者临床信息。采用R软件limma包筛选HCC差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,利用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,使用Cytoscape软件对PPI网络进行可视化并筛选关键基因。通过Kaplan-Meier生存曲线和LASSO回归算法鉴定HCC预后相关关键基因,并利用外部数据集对其表达进行验证和诊断效能分析。采用CIBERSORT算法评估预后相关的关键基因表达与HCC免疫细胞浸润的关系。利用MiRNet和Network Analyst数据库分别构建微小RNA(miRNA)-关键基因mRNA和转录因子(TFs)-关键基因mRNA分子调控网络。利用CMap数据库筛选潜在治疗HCC的小分子药物。结果:共筛选出146个DEGs,其中表达上调基因30个,表达下调基因116个。GO功能和KEGG信号通路富集分析,DEGs明显富集在类固醇、烯化合物和激素代谢等生物过程(BP)及视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450(CYP450)、补体和凝血级联反应等信号通路。PPI网络分析筛选得到14个关键基因,其中甲酰氨基转移酶环化脱氨酶(FTCD)、分泌型磷蛋白2(SPP2)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、补体C6(C6)和CYP450家族成员2C9(CYP2C9)与HCC患者预后、临床病理分期和组织学分级有明显相关性,在HCC诊断中具有较高的诊断效能,与HCC的免疫细胞浸润有密切关联。Hsa-mir-182-5p、同源框CUT样蛋白1(CUX1)、早期生长反应1(EGR1)、SMAD家族成员4(SMAD4)和肿瘤蛋白P53(TP53)是靶向上述预后相关关键基因的重要调控因子。DL-硫沙芬(DL-thiorphan)、异丙嗪(promethazine)和芹菜素(apigenin)可能对HCC有治疗作用。结论:FTCD、SPP2、TAT、C6和CYP2C9可能是HCC诊断、预后判断和治疗的潜在靶点,预测得到的3种小分子药物DL-thiorphan,promethazine和apigenin可为HCC治疗药物的研发提供参考。 展开更多

关键词 肝细胞癌 生物标志物 小分子药物 生物信息学

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EGCG对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及survivin、VEGF表达的影响 被引量：12

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作者 伍红良 凌月福 +3 位作者 黄岚珍 栗子芳 何晓松 易世江 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第7期1138-1141,共4页

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及生存素(survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:体外培养鼻咽癌细胞,以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡细胞... 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及生存素(survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:体外培养鼻咽癌细胞,以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率,流式细胞仪检测细胞周期变化,RT-PCR检测survivin和VEGF的表达变化。结果:EGCG处理后,CNE-2细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性;CNE-2细胞凋亡率显著升高;CNE-2细胞周期阻滞于G1/G0,表现为浓度依赖性;survivin和VEGF的表达明显下调,随EGCG浓度的增加有下降趋势。结论:EGCG能抑制鼻咽癌细胞增殖、促进其凋亡;机制可能与EGCG下调survivn和VEGF的表达有关。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 表没食子儿茶素没食子酸酯 细胞系 培养的 存活素 血管内皮生长因子

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EGCG抑制NF-κB的表达增强鼻咽癌裸鼠移植瘤对放疗的敏感性 被引量：16

5

作者 何晓松 易世江 +1 位作者 范才文 凌月福 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第16期2905-2907,共3页

观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-Gallate,EGCG)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应,并探讨其与核转录因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的关系。方法:取低分化鼻咽癌CNE2细胞接种于雄性裸鼠皮下,共接种20只。待... 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-Gallate,EGCG)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应,并探讨其与核转录因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的关系。方法:取低分化鼻咽癌CNE2细胞接种于雄性裸鼠皮下,共接种20只。待肿瘤结节约4～6mm时,随机分为生理盐水组、EGCG组[30mg/(kg·w)]、放疗组、EGCG联合放疗组,共四组。不同因素治疗3周后处死动物,迅速剥离瘤体称重,量体积,计算抑瘤率。RT-PCR检测瘤体组织中NF-κB的表达水平。结果:EGCG联合放疗组能显著地抑制肿瘤的生长(P<0.01);EGCG联合放疗组NF-κB的表达水平较放疗组明显下降(P<0.01)。结论:EGCG能增强CNE2细胞裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其机制可能与抑制NF-ΚB的表达水平有关。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 儿茶素 裸鼠 移植瘤 放疗增敏 NF—κB

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莪术醇诱导人肝癌HepG2细胞衰老及其机制研究 被引量：11

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作者 黄岚珍 杨飞城 +1 位作者 阳晶 蒋晓山 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期894-902,共9页

为进一步探讨莪术醇的诱导细胞衰老的机制,该研究采用荧光定量PCR技术对莪术醇处理后细胞中81个细胞衰老相关基因差异表达谱进行分析,结果发现TP53及其下游基因p16Ink4a、p21Waf1/Cip1和p27Kip1等的表达水平显著升高,伴随ABL1、ALDH1A3... 为进一步探讨莪术醇的诱导细胞衰老的机制,该研究采用荧光定量PCR技术对莪术醇处理后细胞中81个细胞衰老相关基因差异表达谱进行分析,结果发现TP53及其下游基因p16Ink4a、p21Waf1/Cip1和p27Kip1等的表达水平显著升高,伴随ABL1、ALDH1A3、CHEK2、HRAS、PTEN等多个衰老信号通路启动与效应关联基因的转录显著增强,而CyclinA2、IGFBP3、SIRT1以及TERT等细胞周期进程与衰老信号通路的负性调控基因的表达水平则显著降低。Western印迹检测结果显示,p53及其下游周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CKI)分子p21WAF1和p16INK4水平升高,CyclinA2水平降低,与PCR结果一致,并伴野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)水平显著增高,提示莪术醇可能通过激活p53信号通路诱导HepG2细胞衰老。该研究进一步发现莪术醇能够诱导HepG2细胞发生衰老表型改变,伴G0/G1期周期阻滞。 展开更多

关键词 莪术醇 肿瘤细胞早衰 HEPG2细胞 肝癌 细胞周期阻滞

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EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响 被引量：5

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作者 高漓 张天禹 +3 位作者 尤剑鹏 赵超群 谭宁 黄岚珍 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期580-584,共5页

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对P... 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。 展开更多

关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 前列腺癌 SURVIVIN蛋白 细胞增殖 细胞凋亡

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应用反义寡核苷酸沉默PDGFR-α表达对RPE细胞增生和凋亡的影响 被引量：5

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作者 彭燕一 邱梅园 +2 位作者 丁芝祥 廖妙云 范才文 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期341-345,共5页

背景视网膜色素上皮（RPE）细胞能分泌血小板源性生长因子（PDGF），又具有PDGF受体（PDGFR），已有研究表明PDGF对增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的形成起着关键性作用。目的应用反义寡核苷酸（ASODN）技术抑制血小板源性生长因子受体... 背景视网膜色素上皮（RPE）细胞能分泌血小板源性生长因子（PDGF），又具有PDGF受体（PDGFR），已有研究表明PDGF对增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的形成起着关键性作用。目的应用反义寡核苷酸（ASODN）技术抑制血小板源性生长因子受体-α（PDGFR-α）基因的表达，观察其对RPE细胞增生和凋亡的影响。方法将人RPE细胞株在含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行培养，取对数生长期细胞调节细胞密度为5×10^5个／孔，接种于96孔板，待细胞生长至80％～90％融合时进行转染。空白对照组不加PDGFR—dASODN及阳离子脂质体Lipofectamine 2000，1．0μmol／LLipo—ASODN组、2．0μmol／LLipo—ASODN组使用阳离子脂质体Lipofectamine2000将靶向PDGFR—a基因的ASODN转染至RPE细胞株。细胞转染48h后，MTT法检测各组细胞的吸光度（4）值并以A490表示，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测PDGFR—dmRNA在RPE细胞中表达的变化；hoechst33258荧光染色观察培养细胞的凋亡情况；流式细胞仪检测RPE细胞的细胞周期和凋亡率。结果空白对照组、1．0μmol／LLipo—ASODN组及2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞的A490值分别为1．45±0．12、1．07±0．06、0．65±0．05，差异有统计学意义（F=97．72，P=0．00），1．0μmol／LLipo—ASODN组和2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞A490值明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（P=0．00、0．00）；2．0μmol／L Lipo—ASODN组RPE细胞A490值明显低于1．0μmol／LLipo—ASODN组，差异有统计学意义（P=0．00）。Hoechst33258荧光染色显示，转染PDGFR—αASODN后RPE细胞凋亡数量多于空白对照组。流式细胞仪检测表明，转染PDGFR—αASODN后RPE细胞阻滞于G0／G1期（F=206．70。P=0．00），1．0μmol／LLipo—ASODN组和2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞凋亡率均明显高于空白对照组（37．8±1．3vs10．5±0．1，61．2±1．9∥s10．5±0．1）（F=1808．90，P=0．00）。PDGFR—α在RPE细胞中的表达随PDGFR—dASODN浓度的升高有降低的趋势。结论利用ASODN技术沉默PDGFR—α基因表达可以显著抑制PVR过程中RPE细胞的增生，并能诱导其凋亡，不同浓度PDGFR—OLASODN转染后能下调PDGFR—dmRNA的表达，PDGFR-α基因的ASODN靶向技术为PVR的基因治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 血小板源性生长因子-α受体 反义寡核苷酸 视网膜色素上皮细胞 增生 凋亡

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UPLC-QQQMS测定咳特灵中小叶榕干浸膏12种成分 被引量：6

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作者 徐勤 马超美 +1 位作者 饶伟文 邓立东 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期80-86,共7页

本文建立了超高效液相-串联四极杆质谱多反应监测模式法,同时测定小叶榕干浸膏12种成分的含量。小叶榕干浸膏提取物用体积分数为10%的乙腈溶液超声提取,提取液用安捷伦ZORBAX HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)分离,甲醇-0.1%甲酸... 本文建立了超高效液相-串联四极杆质谱多反应监测模式法,同时测定小叶榕干浸膏12种成分的含量。小叶榕干浸膏提取物用体积分数为10%的乙腈溶液超声提取,提取液用安捷伦ZORBAX HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)分离,甲醇-0.1%甲酸(体积比)梯度洗脱,电喷雾电离源多反应模式监测。所建立的方法对小叶榕干浸膏12种成分的定量限均小于1.694μg/L,在定量范围内离子的色谱面积与成分质量浓度呈线性关系,相关系数均大于0.99,加样回收率为82.2%~109.5%,日内及日间精密度RSD分别为1.0%~6.0%和1.5%~5.1%。检测结果表明小叶榕干浸膏中黄酮类化合物异牡荆素、荭草素、异荭草素、芦丁含量均较高,酚类化合物奎宁酸、没食子酸含量较高。该法为进一步研究和修订咳特灵制剂的质量标准提供了科学依据。 展开更多

关键词 小叶榕干浸膏 咳特灵制剂 超高效液相色谱-串联四极杆质谱 定量 黄酮 酚类

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毛花苷C促进肝癌细胞Huh-7凋亡并增强caspase-7的活化 被引量：4

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作者 张艳群 徐庆 +3 位作者 曾永联 罗琴 邹海凡 谭宁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1745-1750,共6页

目的研究毛花苷C对肝癌Huh-7细胞增殖的影响及其对caspase-7的活化作用。方法以不同浓度的毛花苷C作用于Huh-7细胞,通过细胞增殖抑制实验及克隆形成实验,检测毛花苷C对Huh-7细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测其对Huh-7细胞凋亡的影... 目的研究毛花苷C对肝癌Huh-7细胞增殖的影响及其对caspase-7的活化作用。方法以不同浓度的毛花苷C作用于Huh-7细胞,通过细胞增殖抑制实验及克隆形成实验,检测毛花苷C对Huh-7细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测其对Huh-7细胞凋亡的影响,并用激光共聚焦显微镜采集细胞凋亡染色图像;通过Western blot分析细胞凋亡蛋白caspase-7的活化水平。结果毛花苷C能明显抑制Huh-7细胞的增殖,实验组与对照组间的差异具有统计学意义(P<0.05),并呈量效依赖关系;通过流式细胞仪与激光共聚焦显微镜,观察到毛花苷C诱导凋亡细胞数增加;Western blot检测结果显示,毛花苷C可增强凋亡相关酶caspase-7的活化水平。结论毛花苷C明显促进肝癌Huh-7细胞凋亡并增强凋亡相关酶caspase-7的活化水平。 展开更多

关键词 毛花苷C 肝癌 HUH-7细胞 细胞增殖 细胞凋亡 CASPASE-7

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海带褐藻多糖硫酸酯对腺嘌呤诱导的小鼠高尿酸血症的拮抗作用 被引量：4

11

作者 张大艳 肖为 +2 位作者 陶叶杏 谷毅鹏 刘华忠 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期433-437,共5页

本文探讨了海带褐藻多糖硫酸酯(fucoidan from Laminaria japonica,FL)对腺嘌呤诱导的小鼠高尿酸血症的拮抗作用。首先利用腺嘌呤灌胃法建立高尿酸血症动物模型,再以不同剂量(0.100、0.150、0.200 g/kg)的海带褐藻多糖硫酸酯治疗4周,最... 本文探讨了海带褐藻多糖硫酸酯(fucoidan from Laminaria japonica,FL)对腺嘌呤诱导的小鼠高尿酸血症的拮抗作用。首先利用腺嘌呤灌胃法建立高尿酸血症动物模型,再以不同剂量(0.100、0.150、0.200 g/kg)的海带褐藻多糖硫酸酯治疗4周,最后对小鼠血清尿酸、肌酐、肝脏匀浆液中腺苷脱氨酶(ADA)和黄嘌呤氧化酶(XOD)的活性及小鼠肾脏组织病理学变化进行检测(HE染色)。结果表明,与空白组相比,腺嘌呤能极显著升高小鼠血清尿酸、肌酐水平、肝脏XOD及ADA活性(P<0.01)。与模型组相比,海带褐藻多糖硫酸酯各剂量均能极显著降低小鼠血清尿酸、肌酐水平、肝脏XOD及ADA活性(P<0.01)。光镜观察结果显示,与模型组相比,海带褐藻多糖硫酸酯治疗组小鼠的肾损伤有一定程度恢复。综上所述,海带褐藻多糖硫酸酯对腺嘌呤诱导的小鼠高尿酸血症有一定程度的缓解作用。 展开更多

关键词 海带褐藻多糖硫酸酯 高尿酸血症 嘌呤代谢

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表没食子儿茶素没食子酸酯对视网膜色素上皮细胞增殖及相关因子表达的影响 被引量：3

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作者 邱梅园 丁芝祥 +1 位作者 廖妙云 黄岚珍 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第7期638-642,共5页

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖及相关因子表达的影响。方法体外培养人RPE细胞,设阴性对照组,40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1)... 目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖及相关因子表达的影响。方法体外培养人RPE细胞,设阴性对照组,40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1)、160mg·L^(-1) EGCG 3个浓度药物处理组。利用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21和P27 mRNA的表达,Western blot检测色素上皮衍生因子受体(pigment epithelium derived factor receptor,PDGFR-α)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和IκB蛋白的表达情况。结果 MTT实验结果显示,40 mg·L^(-1)、80 mg·L^(-1)、160 mg·L^(-1) EGCG药物处理组随着作用时间的延长,对人RPE细胞的增殖抑制作用也逐渐增强;随着药物浓度的增加,EGCG的增殖抑制作用也增强(均为P<0.05)。160 mg·L^(-1)的EGCG在72 h的细胞增殖抑制率达到81.11%。随着EGCG浓度的增加,培养的人RPE细胞中G1期和G2期细胞比例减少,S期细胞比例增加,80 mg·L^(-1)、160 mg·L^(-1)EGCG药物处理组S期细胞比例与阴性对照组相比增加极显著(均为P<0.05)。EGCG对细胞周期的影响作用具有明显的剂量依赖性。与阴性对照组相比,80 mg·L^(-1)、160 mg·L^(-1)EGCG药物处理组细胞内的P21和P27 mRNA表达均有不同程度的升高(均为P<0.05);40 mg·L^(-1) EGCG药物处理组与阴性对照组相比,P27 mRNA表达也增高(P=0.015),而P21 mRNA表达增高不明显(P=0.824)。P21和P27 mRNA表达量与EGCG浓度呈明显量效依赖关系(均为P<0.05)。Western blot结果显示,40 mg·L^(-1)、80mg·L^(-1)、160 mg·L^(-1) EGCG作用人RPE细胞后,NF-κB蛋白表达随着浓度的增加而减少,各药物处理组与阴性对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。80 mg·L^(-1)、160 mg·L^(-1) EGCG亦能够抑制人RPE细胞IκB蛋白和PDGFR-α蛋白表达,与相应阴性对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。EGCG对人RPE细胞内PDGFR-α、NF-κB和IκB的蛋白表达抑制作用呈明显的浓度依赖性(均为P<0.05)。结论 EGCG可以有效地抑制人RPE细胞的增殖,其机制可能与EGCG将人RPE细胞阻滞于S期,上调P21及P27 mRNA表达,下调PDGFR-α、NF-κB和IκB蛋白表达有关。 展开更多

关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 人视网膜色素上皮细胞 增殖抑制

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酸性微环境促进前列腺癌细胞PC-3迁移并活化Rac1蛋白 被引量：1

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作者 高漓 谭宁 +4 位作者 张天禹 何小龙 郭维杰 张振锋 查若朋 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第3期333-337,共5页

目的探讨肿瘤外周酸性微环境对PC-3前列腺癌细胞迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将PC-3前列腺癌细胞分别培养在不同pH(7.4、7.0、6.6)的细胞培养基中,通过体外实验,分析PC-3细胞在侵袭、迁移等转移能力上的改变;对细胞骨架肌... 目的探讨肿瘤外周酸性微环境对PC-3前列腺癌细胞迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将PC-3前列腺癌细胞分别培养在不同pH(7.4、7.0、6.6)的细胞培养基中,通过体外实验,分析PC-3细胞在侵袭、迁移等转移能力上的改变;对细胞骨架肌动蛋白Actin进行染色,通过激光共聚焦显微镜观测肿瘤外周酸性微环境对细胞骨架肌动蛋白聚合的影响;通过Western blot实验,检测肿瘤外周酸性微环境对PC-3前列腺癌细胞Racl蛋白活化的影响。结果当肿瘤外周微环境向酸性变化时,PC-3细胞的侵袭及迁移能力均显著增强(P<0.01);激光共聚焦显微镜观测结果提示,肿瘤外周酸性微环境促进细胞骨架肌动蛋白的聚合;Western blot检测结果显示,肿瘤外周酸性微环境促进PC-3细胞Racl蛋白的活化。结论肿瘤外周酸性微环境对PC-3细胞迁移的促进作用与Rac1蛋白活化密切相关。 展开更多

关键词 酸性微环境 前列腺癌 迁移 肌动蛋白 RAC1

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超敏化学发光液稀释法降低蛋白印迹的发光强度

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作者 范才文 唐娟 +2 位作者 罗琴 李璐 向秋 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2017年第2期108-111,共4页

蛋白印迹(western blot)分析是根据抗原、抗体特异性结合的原理检测复杂样品中某蛋白的技术。然而当样品中的蛋白浓度过低,特别是目标蛋白为低丰度蛋白时,采用普通化学发光检测,有时出现蛋白条带发光弱,曝光不够,而采用超敏化学发光检... 蛋白印迹(western blot)分析是根据抗原、抗体特异性结合的原理检测复杂样品中某蛋白的技术。然而当样品中的蛋白浓度过低,特别是目标蛋白为低丰度蛋白时,采用普通化学发光检测,有时出现蛋白条带发光弱,曝光不够,而采用超敏化学发光检测则出现蛋白条带发光强,曝光过度,两者的蛋白条带显影图像均不理想。本文将超敏化学发光液稀释后再检测,显影效果显著提高,蛋白条带图像清晰,可见超敏化学发光液稀释法降低蛋白印迹的发光强度,提高了蛋白条带的显影效果。 展开更多

关键词 蛋白印迹 超敏发光液 化学发光 稀释

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EGCG通过上调MnSOD表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡

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作者 刘强和 黄鑫 +2 位作者 向秋 伍靖武 雷迅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期605-607,共3页

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡诱导作用、以及这个过程中MnSOD的表达变化特点。方法:应用噻唑蓝(MTT)法计算不同浓度EGCG作用于CNE-2鼻咽癌细胞后不同时间点的生... 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡诱导作用、以及这个过程中MnSOD的表达变化特点。方法:应用噻唑蓝(MTT)法计算不同浓度EGCG作用于CNE-2鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR法检测这个过程中MnSOD mRNA的表达变化。结果:EGCG可以诱导CNE-2细胞凋亡、抑制其生长,而且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有MnSOD mRNA的表达上调。结论:EGCG能通过上调MnSOD mRNA表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡。 展开更多

关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽癌细胞株 凋亡 锰超氧化物歧化酶

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d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响

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作者 曾新生 姚微微 +2 位作者 彭燕一 范才文 丁芝祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第8期725-727,共3页

目的研究d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响,探讨后发性白内障治疗的新方法。方法将人晶状体上皮SRA细胞分为对照组和实验组,对照组不加药物干预,实验组设3个药物浓度,分别为30μmol·L-1、40μmol·L-1、5... 目的研究d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响,探讨后发性白内障治疗的新方法。方法将人晶状体上皮SRA细胞分为对照组和实验组,对照组不加药物干预,实验组设3个药物浓度,分别为30μmol·L-1、40μmol·L-1、50μmol·L-1的d-δ-三烯生育酚,药物干预人晶状体上皮SRA细胞24 h和48 h后,采用MTT法、Hoechst33258荧光染色和流式细胞仪分析人晶状体上皮SRA细胞的增殖和凋亡情况。结果 d-δ-三烯生育酚呈浓度-时间依赖性抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖,诱导其凋亡。30μmol·L-1、40μmol·L-1、50μmol·L-1的d-δ-三烯生育酚干预48 h对SRA细胞的增殖抑制率分别为(32.23±5.25)%、(54.17±1.63)%和(86.80±0.85)%,与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05);干预24 h增殖抑制率分别为(12.70±1.20)%、(19.53±0.95)%和(51.83±6.11)%,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。干预24 h后,各实验组细胞晚期凋亡率Q2分别为(5.87±0.15)%、(11.37±0.85)%、(22.77±2.41)%,与对照组的(1.10±0.17)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);各实验组细胞早期凋亡率Q4分别为(3.57±0.32)%、(4.20±0.40)%、(8.00±0.50)%,与对照组的(2.53±0.15)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 d-δ-三烯生育酚抑制人晶状体上皮SRA细胞增殖,诱导其凋亡,具有抗晶状体上皮细胞增殖的生物学作用,为治疗后发性白内障提供一种新思路。 展开更多

关键词 d-δ-三烯生育酚 后发性白内障 细胞增殖 细胞凋亡 人晶状体上皮细胞

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Stathmin特异性siRNA表达质粒抑制stathmin的表达

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作者 向秋 王建红 +5 位作者 熊伟明 田晶 蒋伟 肖胜军 何晓松 雷迅 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期534-537,共4页

目的:构建微管解聚蛋白stathmin基因的特异性siRNA质粒表达载体,以便研究stathmin在鼻咽癌中的生物学作用。方法:合成stathmin特异性DNA片段,退火形成的双链DNA片段克隆于质粒表达载体pGenesil-1.3;载体经扩增后,进行酶切和测序鉴定;采... 目的:构建微管解聚蛋白stathmin基因的特异性siRNA质粒表达载体,以便研究stathmin在鼻咽癌中的生物学作用。方法:合成stathmin特异性DNA片段,退火形成的双链DNA片段克隆于质粒表达载体pGenesil-1.3;载体经扩增后,进行酶切和测序鉴定;采用QIAGEN公司脂质体(effectenetransfectionreagent)将鉴定后的重组质粒转入鼻咽癌CNE2细胞;RT-PCR与Westernblot检测stathmin基因表达。结果:酶切和测序分析表明,插入siRNA质粒表达载体中的DNA片段,其碱基序列和插入方向正确。表达分析证实特异性siRNA质粒表达载体能有效抑制鼻咽癌CNE2细胞中stathmin的表达。结论:构建的siRNA质粒表达载体对stathmin的表达有很好的抑制作用。 展开更多

关键词 STATHMIN RNA干扰 质粒 基因治疗

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血小板源性生长因子-α受体沉默对人晶状体上皮细胞增生的抑制作用 被引量：3

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作者 刘晓辉 彭燕一 +1 位作者 范才文 黄岚珍 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期749-753,共5页

背景 血小板源性生长因子（PDGF）可以影响人晶状体上皮细胞（LECs）的增生过程,而LECs可终生表达PDGF-α受体（PDGFR-α）,PDGFR-α活化后与PDGF结合能促进细胞的DNA合成.反义寡核苷酸（ASODN）技术沉默PDGFR-α基因表达可抑制增生性... 背景 血小板源性生长因子（PDGF）可以影响人晶状体上皮细胞（LECs）的增生过程,而LECs可终生表达PDGF-α受体（PDGFR-α）,PDGFR-α活化后与PDGF结合能促进细胞的DNA合成.反义寡核苷酸（ASODN）技术沉默PDGFR-α基因表达可抑制增生性玻璃体视网膜病变（PVR）过程中视网膜色素上皮（RPE）细胞的增生,并诱导细胞凋亡,但通过该技术是否能够抑制LECs的增生鲜见报道. 目的 研究PDGFR-α沉默对LECs增生的影响,为防治晶状体后囊膜混浊（PCO）提供实验依据.方法 用含胎牛血清的改良型α-MEM培养液体外培养人LECs系SRA01/04细胞株并传代,转染前1d用无抗生素的培养基培养细胞至30％ ～ 50％融合后将细胞以5×104个/孔的密度接种于6孔板,接种24 h后采用脂质体进行LECs转染,按照转染物的不同分为空白对照组（不加PDGFR-α ASODN的空白脂质体）、PDGFR-α错义寡核苷酸（MSODN）组（含PDGFR-α ASODN和脂质体）、0.5μmol/L PDGFR-α ASODN组（含0.5 μmol/L PDGFR-αASODN和脂质体）和1.0μmol/L PDGFR-α ASODN组（含1.0 μmol/L PDGFR-α ASODN和脂质体）.转染24 h后倒置显微镜下观察各组人LECs的形态学变化,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测各组LECs中PDGFR-αmRNA的表达；用MTT比色法检测各组细胞的增生（A490）值,计算转染物对LECs的抑制率；采用流式细胞仪分析各组LECs的细胞周期. 结果 转染后24 h,空白对照组及PDGFR-α MSODN组LECs生长良好,细胞呈多边形,数目多；而PDGFR-α ASODN组细胞呈圆形,细胞数目明显减少.RT-PCR检测表明,空白对照组及PDGFR-α MSODN组PDGFR-α mRNA在LECs中的表达较强,而在PDGFR-α ASODN组中的表达强度明显减弱,以1.0 μmol/L PDGFR-α ASODN组更为明显.空白对照组、PDGFR-α MSODN组、0.5μmol/L PDGFR-αASODN组及1.0μmol/L PDGFR-α ASODN组的A490值分别为0.661±0.036、0.655 ±40.016、0.529±0.030和0.441 ±0.039,其中0.5μmol/L PDGFR-α ASODN组及1.0μmol/L PDGFR-α ASODN组的A490值明显低于空白对照组和PDGFR-α MSODN组,总体比较差异有统计学意义（F=34.08,P＜0.01）.空白对照组、PDGFR-αMSODN组、0.5 μmol/L PDGFR-α ASODN组及1.0 μmol/L PDGFR-α ASODN组G1期细胞百分数分别为（47.73±1.18）％、（49.48±1.09）％、（53.31±1.30）％和（59.98±0.95）％,总体比较差异有统计学意义（F=68.41,P＜0.01）,其中0.5 μmoL/L PDGFR-αASODN组及1.0 μmol/L PDGFR-α ASODN组G1期细胞百分数明显高于空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）. 结论 PDGFR-α沉默能抑制人LECs的增生. 展开更多

关键词 血小板源性生长因子-α受体 反义寡核苷酸 晶状体上皮细胞 细胞转染 增生

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江南星蕨化学成分的研究 被引量：3

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作者 闫梦麒 周先丽 +5 位作者 黄晓 罗琴 黄宝娇 劳志娟 陈旭 梁成钦 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2644-2647,共4页

目的研究江南星蕨Microsorium fortunei(T.Moore)Ching的化学成分。方法江南星蕨75%乙醇提取物正丁醇部位采用硅胶、TLC、HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到11个化合物,分别鉴定为2,2′-... 目的研究江南星蕨Microsorium fortunei(T.Moore)Ching的化学成分。方法江南星蕨75%乙醇提取物正丁醇部位采用硅胶、TLC、HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到11个化合物,分别鉴定为2,2′-氧代双(1,4-二叔丁苯)(1)、5-羟甲基糠醛(2)、3,4-二羟基苯丙酸甲酯(3)、3,4-二羟基苯乙酸甲酯(4)、methyl 3-(p-hydroxyphenyl)propionate(5)、对羟基苯乙酸甲酯(6)、3-(3,4-二羟基苯基)-2-羟基丙酸甲酯(7)、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(8)、turreanone(9)、(+)-松脂酚4,4′-O-二吡喃葡萄糖苷(10)、甘西鼠尾草酸甲(11)。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到。 展开更多

关键词 江南星蕨 化学成分 分离鉴定

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含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体与帕金森病关系的研究进展 被引量：2

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作者 程芯育 钟海凤 +3 位作者 王俊锋 农林琳 徐绍业 邵晓云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期565-568,共4页

帕金森病(PD)是一种典型的退行性疾病,其病理特点是黑质区多巴胺神经元死亡。目前,炎症细胞因子介导神经炎症引起神经元死亡被广泛关注。我们总结了含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)在PD中的活化方式以及对神经的... 帕金森病(PD)是一种典型的退行性疾病,其病理特点是黑质区多巴胺神经元死亡。目前,炎症细胞因子介导神经炎症引起神经元死亡被广泛关注。我们总结了含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)在PD中的活化方式以及对神经的保护作用和对PD发展的影响。此外,对调控NLRP3影响PD的相关靶点,包括活性氧(ROS)、钙离子与钾离子、微小RNA(microRNA)、泛素以及NLRP3单核酸多态性也进行了总结,以期为PD治疗提供新的治疗策略。 展开更多

关键词 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3) 炎性体 中枢神经系统 帕金森病(PD) 综述

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