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基于组合优化策略在毕赤酵母中高效表达杜邦嗜热菌脂肪酶
被引量：
1
1
作者
汪步青
陈洲
+4 位作者
王亚森
许向阳
高晓冬
藤田盛久
李子杰
《中国油脂》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期125-131,共7页
杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)是一种在洗涤行业、生物柴油制备、油脂改性等领域具有良好应用潜力的碱性脂肪酶,然而其天然产量极低,难以满足产业化需求。采用组合优化策略筛选出高效表达LIP1的毕赤酵母重组菌株。首先,构建毕赤酵母密码子偏...
杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)是一种在洗涤行业、生物柴油制备、油脂改性等领域具有良好应用潜力的碱性脂肪酶,然而其天然产量极低,难以满足产业化需求。采用组合优化策略筛选出高效表达LIP1的毕赤酵母重组菌株。首先,构建毕赤酵母密码子偏好性优化的LIP1基因,通过高浓度G418抗性平板和BMMY-罗丹明B定性平板筛选出脂肪酶活性较高的重组菌株;其次,利用信号肽优化和分子伴侣共表达优化筛选得到一株高效表达的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-Mss-SSA4-LIP1,采用碱滴定法测定其酶活,采用比色法测定其底物特异性。结果表明,经组合优化策略筛选出的菌株在摇瓶和5 L发酵罐中发酵最高分泌酶活分别达到1 136 U/mL和12 150 U/mL。底物特异性结果显示重组脂肪酶LIP1最适底物为C8链长的对硝基苯酚酯。综上所述,基于组合优化策略实现了LIP1在毕赤酵母中的高效表达,为未来LIP1的产业化奠定基础。
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关键词
杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)
组合优化策略
毕赤酵母
高密度表达
底物特异性
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职称材料
福氏志贺菌来源L-鼠李树胶糖激酶的克隆表达及酶学性质分析
2
作者
冯林雪
陈洲
+5 位作者
王亚森
冯康
许向阳
李子杰
中西秀树
高晓冬
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第20期1-7,共7页
D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30%左右。基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的“磷酸...
D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30%左右。基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的“磷酸化-脱磷酸”级联反应可提高反应转化率,然而目前有关RhaB的研究较少。该文研究了一种新型来源福氏志贺菌(Shigella flexneri 2a str.301)来源的RhaB,从福氏志贺菌(S.flexneri 2a str.301)的基因组DNA中克隆得到RhaB基因,将其与质粒载体pET28a连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达。构建突变菌株RhaB^(E437Q),将酶活性提高了10倍,且大部分包涵体蛋白变为可溶性蛋白。利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,对其酶学性质进行了一系列研究。结果表明,重组蛋白RhaB^(E437Q)为单体蛋白,分子质量为54 kDa;最适反应条件为40℃,pH 8.5,Mn^(2+);其只对C-3构型为R构型的糖有催化活性;将其与底物D-阿洛酮糖进行分子对接,对其催化机制进行了初步研究。
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关键词
L-鼠李树胶糖激酶
福氏志贺菌
克隆与表达
酶学性质
D-阿洛酮糖
催化机制
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职称材料
题名
基于组合优化策略在毕赤酵母中高效表达杜邦嗜热菌脂肪酶
被引量：
1
1
作者
汪步青
陈洲
王亚森
许向阳
高晓冬
藤田盛久
李子杰
机构
江南大学
生物
工程学院
枣庄市杰诺生物酶有限公司
出处
《中国油脂》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期125-131,共7页
基金
山东省重点研发计划重大科技创新工程(2019 JZZY011006)。
文摘
杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)是一种在洗涤行业、生物柴油制备、油脂改性等领域具有良好应用潜力的碱性脂肪酶,然而其天然产量极低,难以满足产业化需求。采用组合优化策略筛选出高效表达LIP1的毕赤酵母重组菌株。首先,构建毕赤酵母密码子偏好性优化的LIP1基因,通过高浓度G418抗性平板和BMMY-罗丹明B定性平板筛选出脂肪酶活性较高的重组菌株;其次,利用信号肽优化和分子伴侣共表达优化筛选得到一株高效表达的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-Mss-SSA4-LIP1,采用碱滴定法测定其酶活,采用比色法测定其底物特异性。结果表明,经组合优化策略筛选出的菌株在摇瓶和5 L发酵罐中发酵最高分泌酶活分别达到1 136 U/mL和12 150 U/mL。底物特异性结果显示重组脂肪酶LIP1最适底物为C8链长的对硝基苯酚酯。综上所述,基于组合优化策略实现了LIP1在毕赤酵母中的高效表达,为未来LIP1的产业化奠定基础。
关键词
杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)
组合优化策略
毕赤酵母
高密度表达
底物特异性
Keywords
Thermomyces dupontii lipase(LIP1)
combinatorial optimization strategy
Pichia pastoris
high-density expression
substrate specificity
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
福氏志贺菌来源L-鼠李树胶糖激酶的克隆表达及酶学性质分析
2
作者
冯林雪
陈洲
王亚森
冯康
许向阳
李子杰
中西秀树
高晓冬
机构
江南大学
生物
工程学院
枣庄市杰诺生物酶有限公司
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第20期1-7,共7页
基金
国家自然科学基金(32071467)
山东省重点研发计划重大科技创新工程(2019JZZY011006)
枣庄英才集聚工程。
文摘
D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的稀有糖,目前其生产主要利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)将D-果糖转化为D-阿洛酮糖,但该反应转化率低,仅能达到30%左右。基于L-鼠李树胶糖激酶(L-rhamnulose kinase,RhaB)的“磷酸化-脱磷酸”级联反应可提高反应转化率,然而目前有关RhaB的研究较少。该文研究了一种新型来源福氏志贺菌(Shigella flexneri 2a str.301)来源的RhaB,从福氏志贺菌(S.flexneri 2a str.301)的基因组DNA中克隆得到RhaB基因,将其与质粒载体pET28a连接,在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达。构建突变菌株RhaB^(E437Q),将酶活性提高了10倍,且大部分包涵体蛋白变为可溶性蛋白。利用载体上组氨酸标签对重组酶分离纯化,对其酶学性质进行了一系列研究。结果表明,重组蛋白RhaB^(E437Q)为单体蛋白,分子质量为54 kDa;最适反应条件为40℃,pH 8.5,Mn^(2+);其只对C-3构型为R构型的糖有催化活性;将其与底物D-阿洛酮糖进行分子对接,对其催化机制进行了初步研究。
关键词
L-鼠李树胶糖激酶
福氏志贺菌
克隆与表达
酶学性质
D-阿洛酮糖
催化机制
Keywords
L-rhamnulose kinase
Shigella flexneri 2a str.301
cloning and expressing
enzymatic properties
D-allulose
catalytic mechanism
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于组合优化策略在毕赤酵母中高效表达杜邦嗜热菌脂肪酶
汪步青
陈洲
王亚森
许向阳
高晓冬
藤田盛久
李子杰
《中国油脂》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
福氏志贺菌来源L-鼠李树胶糖激酶的克隆表达及酶学性质分析
冯林雪
陈洲
王亚森
冯康
许向阳
李子杰
中西秀树
高晓冬
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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