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L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌株的构建及其培养条件研究
被引量：
8
1
作者
洪敏
赵春田
+3 位作者
张正波
吴瑶瑶
裘娟萍
白彦兵
《浙江工业大学学报》
CAS
北大核心
2011年第3期252-256,260,共6页
L-天冬氨酸α-脱羧酶以L-天冬氨酸为底物,脱去α-羧基后生成β-丙氨酸.利用PCR扩增技术,将Escherichia coliDH5α中的PanD基因克隆后连接到pET28c(+)载体上,先转化E.coliDH5α中,经过50μg/mL卡那霉素抗性筛选和酶切、测序验证后,转化...
L-天冬氨酸α-脱羧酶以L-天冬氨酸为底物,脱去α-羧基后生成β-丙氨酸.利用PCR扩增技术,将Escherichia coliDH5α中的PanD基因克隆后连接到pET28c(+)载体上,先转化E.coliDH5α中,经过50μg/mL卡那霉素抗性筛选和酶切、测序验证后,转化表达菌株E.coliBL21(DE3),得到具有L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的工程菌株E.coliBL21(DE3)/pET28c(+)-panD.经乳糖诱导该基因能有效表达C-末端具有组氨酸标签的L-天冬氨酸α-脱羧酶.通过对乳糖诱导时间、乳糖诱导质量浓度、诱导温度、诱导菌龄和培养基诱导初始pH值等发酵条件的优化,得到最佳培养条件为:乳糖诱导时间20 h,乳糖质量浓度12 g/L,诱导温度为35℃,诱导菌龄为3.5 h,诱导培养基初始pH 5.5,通过对转化产物β-丙氨酸的检测结果分析显示,工程菌株E.coliBL21(DE3)/pET28c(+)-panD在优化条件下,酶活力达186 U.
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关键词
L-天冬氨酸α-脱羧酶
PanD
工程菌
诱导表达
培养条件
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职称材料
题名
L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌株的构建及其培养条件研究
被引量：
8
1
作者
洪敏
赵春田
张正波
吴瑶瑶
裘娟萍
白彦兵
机构
浙江工业大学生物与环境工程学院
杭州鑫富药业有限公司
出处
《浙江工业大学学报》
CAS
北大核心
2011年第3期252-256,260,共6页
基金
浙江省重中之重学科开放基金资助项目(20090113)
文摘
L-天冬氨酸α-脱羧酶以L-天冬氨酸为底物,脱去α-羧基后生成β-丙氨酸.利用PCR扩增技术,将Escherichia coliDH5α中的PanD基因克隆后连接到pET28c(+)载体上,先转化E.coliDH5α中,经过50μg/mL卡那霉素抗性筛选和酶切、测序验证后,转化表达菌株E.coliBL21(DE3),得到具有L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的工程菌株E.coliBL21(DE3)/pET28c(+)-panD.经乳糖诱导该基因能有效表达C-末端具有组氨酸标签的L-天冬氨酸α-脱羧酶.通过对乳糖诱导时间、乳糖诱导质量浓度、诱导温度、诱导菌龄和培养基诱导初始pH值等发酵条件的优化,得到最佳培养条件为:乳糖诱导时间20 h,乳糖质量浓度12 g/L,诱导温度为35℃,诱导菌龄为3.5 h,诱导培养基初始pH 5.5,通过对转化产物β-丙氨酸的检测结果分析显示,工程菌株E.coliBL21(DE3)/pET28c(+)-panD在优化条件下,酶活力达186 U.
关键词
L-天冬氨酸α-脱羧酶
PanD
工程菌
诱导表达
培养条件
Keywords
L-aspartate α-decarboxylase
PanD
engineered strain
express
culture condition
分类号
Q939.115 [生物学—微生物学]
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作者
出处
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被引量
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1
L-天冬氨酸α-脱羧酶工程菌株的构建及其培养条件研究
洪敏
赵春田
张正波
吴瑶瑶
裘娟萍
白彦兵
《浙江工业大学学报》
CAS
北大核心
2011
8
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