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链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
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作者 奚茜 李沐洁 +4 位作者 龚云飞 陈宗伦 方结红 王唯芬 张明洲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第5期181-185,共5页
通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫... 通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。 展开更多
关键词 链霉素 人工抗原 多克隆抗体 间接ELISA法
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赭曲霉毒素A直接竞争ELISA试剂盒的研制 被引量:6
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作者 李沐洁 奚茜 +2 位作者 张明洲 陈宗伦 王唯芬 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第9期116-123,共8页
在多克隆抗体的基础上研制了赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫检测(cd-ELISA)试剂盒。在0~10 ng/mL范围内,该试剂盒50%抑制率(IC50)为1.09 ng/mL,检测灵敏度(IC15)为0.08 ng/mL;与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为6.28%和0.16%,而与... 在多克隆抗体的基础上研制了赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫检测(cd-ELISA)试剂盒。在0~10 ng/mL范围内,该试剂盒50%抑制率(IC50)为1.09 ng/mL,检测灵敏度(IC15)为0.08 ng/mL;与赭曲霉毒素B、C的交叉反应率分别为6.28%和0.16%,而与黄曲霉毒素B1等生物毒素未见有交叉反应;板内与板间平均变异系数分别为2.21%和2.79%;花生、玉米和玉米粉3种样品中OTA的检测低限分别为1.71,1.26和1.85μg/kg,平均添加回收率在83.80%~91.40%;与HPLC检测方法具有较高的相关性,相关系数(R2)分别为0.940、.88和0.90;检测时间只需20 min,可用于花生、玉米及玉米粉中OTA的批量快速筛查。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 多克隆抗体 直接竞争ELISA
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化学发光免疫法检测食品中恩诺沙星残留的研究 被引量:4
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作者 龚云飞 邹晓楠 +4 位作者 张露露 吴莹莹 戴明雁 陈宗伦 张明洲 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期66-69,75,共5页
建立了基于多克隆抗体的化学发光免疫检测技术,用于测定动物源性食品中恩诺沙星残留含量。反应条件优化结果为:抗体包被最佳稀释倍数为64000倍,最佳酶标抗原稀释倍数为256000倍。结果显示:该方法的回归曲线方程为y=-13.898x+110... 建立了基于多克隆抗体的化学发光免疫检测技术,用于测定动物源性食品中恩诺沙星残留含量。反应条件优化结果为:抗体包被最佳稀释倍数为64000倍,最佳酶标抗原稀释倍数为256000倍。结果显示:该方法的回归曲线方程为y=-13.898x+110.38(R。=0.9893),检测线性范围为3-810pg/mL,IC50为69.63pg/mL,ICm为1.41pg/mL;鸡肉、鱼肉、虾肉、蜂蜜、牛奶空白组织样品中恩诺沙星的最低检测限分别为3.76、4.59、2.85、2.65、4.20pg/mL,最低定量限分别为6.13、7.35、3.57、3.73和6.48pg/mL,回收率在88.28%-102.6%,板内和板间的平均变异系数分别为2.61%和4.71%。表明本研究建立的化学发光免疫检测方法满足动物源性食品恩诺沙星残留的检测要求。 展开更多
关键词 恩诺沙星 化学发光免疫检测技术 食品安全
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磺胺二甲嘧啶快速直接竞争ELISA试剂盒的研制及应用 被引量:2
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作者 龚云飞 王唯芬 +3 位作者 张明洲 陈宗伦 李沐洁 奚茜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1007-1014,共8页
在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶(SMZ)残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法比较和验证。将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中,用所制备的试剂盒... 在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶(SMZ)残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法比较和验证。将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中,用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。研究结果表明,磺胺二甲嘧啶浓度在0.5~50ng.mL-1,方法的检测灵敏度IC10=0.47ng.mL-1,板内平均变异系数为7.4%,板间平均变异系数为9.27%。猪肝、猪肉与鸡肉组织样品中SMZ最低检测限分别为3.91、4.81与1.59μg.kg-1。在添加10.0~50.0μg.kg-1时,平均回收率在85%~110%。试剂盒的检测时间为12.6min,在4℃至少可以保存6个月。研制的试剂盒可以满足猪肝、猪肉和鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留的现场快速检测。 展开更多
关键词 磺胺二甲嘧啶 ELISA试剂盒 猪肝 猪肉 鸡肉
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三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定 被引量:5
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作者 王旻子 应永飞 +3 位作者 龚云飞 方结红 陈宗伦 张明洲 《安徽农业科学》 CAS 2012年第5期2574-2576,共3页
[目的]制备抗三聚氰胺单克隆抗体,并对其效价、敏感性与特异性进行测定。[方法]通过三聚氰胺人工抗原MEL-BSA免疫BALB/c小鼠以及细胞融合等方法,获得分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并利用小鼠体内腹水诱生法制备抗三聚氰胺单... [目的]制备抗三聚氰胺单克隆抗体,并对其效价、敏感性与特异性进行测定。[方法]通过三聚氰胺人工抗原MEL-BSA免疫BALB/c小鼠以及细胞融合等方法,获得分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并利用小鼠体内腹水诱生法制备抗三聚氰胺单克隆抗体;采用间接竞争ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、敏感性与特异性。[结果]经小鼠免疫、细胞融合与亚克隆后获得了2株分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1B12和2H9;间接ELISA检测结果显示,杂交瘤细胞1B12和2H9腹水型单抗的效价分别为1∶25 600与1∶12 800,IC50分别为8.0 ng/ml与8.3 ng/ml,且该2种单抗只与三聚氰胺有反应,与三聚氰胺类似物无交叉反应。[结论]该研究获得了高效价、高灵敏度的三聚氰胺特异性单克隆抗体,为后续研究提供了良好基础。 展开更多
关键词 三聚氰胺 单克隆抗体
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三聚氰胺人工抗原合成与鉴定 被引量:1
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作者 王旻子 应永飞 +3 位作者 龚云飞 方结红 陈宗伦 张明洲 《安徽农学通报》 2011年第23期43-45,共3页
采用戊二醛法与甲醛树脂法分别将三聚氰胺(Melamine,Mel)偶联到牛血清白蛋白(BSA)与鸡卵清蛋白上,合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(Mel-BSA)与包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(Mel-OVA)。通过快速凝胶液相层析(FPLC)纯化后,合成抗原进行紫... 采用戊二醛法与甲醛树脂法分别将三聚氰胺(Melamine,Mel)偶联到牛血清白蛋白(BSA)与鸡卵清蛋白上,合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白(Mel-BSA)与包被原三聚氰胺-鸡卵清蛋白(Mel-OVA)。通过快速凝胶液相层析(FPLC)纯化后,合成抗原进行紫外扫描、红外扫描和SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明三聚氰胺已偶联到载体蛋白,为进一步制备三聚氰胺的特异性抗体与建立三聚氰胺免疫检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 三聚氰胺 人工抗原 合成 鉴定
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动物源性食品中齐帕特罗一步法ELISA试剂盒的研制 被引量:3
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作者 董李学 葛怀礼 +5 位作者 郑百芹 李爱军 张建民 蒙君丽 苗建民 李亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第3期242-247,共6页
本研究依据直接竞争ELISA原理建立了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒。以齐帕特罗与载体蛋白偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔制得齐帕特罗多克隆抗体,棋盘包被法确定其最佳抗体包被浓度、酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色... 本研究依据直接竞争ELISA原理建立了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒。以齐帕特罗与载体蛋白偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔制得齐帕特罗多克隆抗体,棋盘包被法确定其最佳抗体包被浓度、酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认。结果表明,成功组装了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒,并建立了尿液、饲料、奶粉和奶汁,以及组织等样品的前处理方法,检测限均远低于1μg/kg。该试剂盒线性检测范围为0.15~10ng/mL,IC50浮动范围0.43~0.79ng/mL,样品板内、批内、批间的变异系数均小于15%,平均回收率在70%~110%之间,与其同类药物的交叉反应率均小于0.1%。提示,本试验研制的试剂盒重复性、特异性、稳定性等各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中齐帕特罗药物残留的检测。 展开更多
关键词 动物源性食品 ELISA 齐帕特罗
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