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基于胶体金免疫层析技术同步快速检测奶茶中的三种毒品成分
被引量：
4
1
作者
许鹏
徐淑娟
+6 位作者
马骉
厉佳丽
苏威
胥天然
周宇欣
徐涵悦
张明洲
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第14期290-296,共7页
该研究基于胶体金免疫层析技术,建立了一种快速灵敏检测奶茶中甲基苯丙胺(methamphetamine,MET)、氯胺酮(ketamine,KET)和可卡因(cocaine,COC)这3种毒品成分的方法。通过优化人工抗原包被浓度、胶体金-单克隆抗体偶联物浓度、免疫反应...
该研究基于胶体金免疫层析技术,建立了一种快速灵敏检测奶茶中甲基苯丙胺(methamphetamine,MET)、氯胺酮(ketamine,KET)和可卡因(cocaine,COC)这3种毒品成分的方法。通过优化人工抗原包被浓度、胶体金-单克隆抗体偶联物浓度、免疫反应时间等关键因素,实现奶茶中3种毒品成分的联合检测。结果显示,该方法对MET、KET和COC标准品的检测限分别为1.60、1.59、1.39 ng/mL。该方法可用于奶茶中3种毒品成分的测定,样品平均添加回收率为90%~109%,相对标准偏差<5%。该文建立的多靶标胶体金免疫层析方法具有简单、快速、灵敏、特异等优点,为现场鉴别奶茶中非法添加的MET、KET和COC提供了新思路。
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关键词
奶茶
毒品
免疫层析
胶体金
同时检测
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职称材料
白喉毒素突变体CRM197重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及免疫原性分析
2
作者
张泽月
马骉
+2 位作者
厉佳丽
许梦琪
张明洲
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025年第8期816-823,共8页
目的探究白喉毒素无毒突变体CRM197的可溶性表达,制备出安全有效的CRM197重组蛋白。方法将密码子优化后的CRM197基因序列克隆到pColdⅡ、pET-28a(+)原核表达载体中,筛选成功克隆的重组质粒并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,...
目的探究白喉毒素无毒突变体CRM197的可溶性表达,制备出安全有效的CRM197重组蛋白。方法将密码子优化后的CRM197基因序列克隆到pColdⅡ、pET-28a(+)原核表达载体中,筛选成功克隆的重组质粒并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达后通过SDS-PAGE分析确定蛋白表达形式,同时优化重组蛋白的可溶性表达条件,再经两次Ni-NTA亲和层析纯化重组CRM197蛋白,将纯化后的重组蛋白进行小鼠免疫,使用ELISA方法测定血清中的抗体水平。结果序列优化后的密码子适应指数(CAI)由原来的0.72提高到0.93。通过菌液PCR及双酶切鉴定,重组质粒pET-28a(+)-CRM197、pColdⅡ-CRM197均构建成功。表达鉴定结果显示,pET-28a(+)-CRM197主要为包涵体表达,pColdⅡ-CRM197主要为可溶性表达。优化pColdⅡ-CRM197可溶性表达条件,接种量为3%,IPTG浓度为0.4 mmol/L时,20℃诱导表达24 h,可显著提高可溶性目的蛋白表达量。利用Ni-NTA亲和层析纯化pColdⅡ-CRM197重组蛋白上清液,得到的目的蛋白纯度均高于98%。小鼠3次免疫后的ELISA结果显示,免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgG1和IgG2a抗体水平均高于对照组。结论利用pColdⅡ载体实现了CRM197重组蛋白在大肠杆菌表达系统中的可溶性表达,其纯度高、免疫原性良好,为蛋白的推广应用奠定了基础。
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关键词
CRM197蛋白
可溶性蛋白
免疫原性
纯化
大肠杆菌
结合疫苗
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职称材料
题名
基于胶体金免疫层析技术同步快速检测奶茶中的三种毒品成分
被引量：
4
1
作者
许鹏
徐淑娟
马骉
厉佳丽
苏威
胥天然
周宇欣
徐涵悦
张明洲
机构
中国计量大学生命科学学院
杭州快格科技有限公司
温州市美众医学检验实验室
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第14期290-296,共7页
基金
浙江省基础公益研究计划农业农村项目(LGN22C20015)
国家级大学生创新创业训练计划资助项目(202310356048)
浙江省大学生科技创新活动计划项目(2023R409A026)。
文摘
该研究基于胶体金免疫层析技术,建立了一种快速灵敏检测奶茶中甲基苯丙胺(methamphetamine,MET)、氯胺酮(ketamine,KET)和可卡因(cocaine,COC)这3种毒品成分的方法。通过优化人工抗原包被浓度、胶体金-单克隆抗体偶联物浓度、免疫反应时间等关键因素,实现奶茶中3种毒品成分的联合检测。结果显示,该方法对MET、KET和COC标准品的检测限分别为1.60、1.59、1.39 ng/mL。该方法可用于奶茶中3种毒品成分的测定,样品平均添加回收率为90%~109%,相对标准偏差<5%。该文建立的多靶标胶体金免疫层析方法具有简单、快速、灵敏、特异等优点,为现场鉴别奶茶中非法添加的MET、KET和COC提供了新思路。
关键词
奶茶
毒品
免疫层析
胶体金
同时检测
Keywords
milk tea
addictive drugs
lateral flow immunochromatography
colloidal gold
simultaneous testing
分类号
TS275.2 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
白喉毒素突变体CRM197重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及免疫原性分析
2
作者
张泽月
马骉
厉佳丽
许梦琪
张明洲
机构
中国计量大学生命科学学院
杭州快格科技有限公司
出处
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025年第8期816-823,共8页
基金
国家重点研发计划项目(No.2021YFF0602801)
浙江省基础公益研究计划农业农村项目(No.LGN22C200015)。
文摘
目的探究白喉毒素无毒突变体CRM197的可溶性表达,制备出安全有效的CRM197重组蛋白。方法将密码子优化后的CRM197基因序列克隆到pColdⅡ、pET-28a(+)原核表达载体中,筛选成功克隆的重组质粒并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达后通过SDS-PAGE分析确定蛋白表达形式,同时优化重组蛋白的可溶性表达条件,再经两次Ni-NTA亲和层析纯化重组CRM197蛋白,将纯化后的重组蛋白进行小鼠免疫,使用ELISA方法测定血清中的抗体水平。结果序列优化后的密码子适应指数(CAI)由原来的0.72提高到0.93。通过菌液PCR及双酶切鉴定,重组质粒pET-28a(+)-CRM197、pColdⅡ-CRM197均构建成功。表达鉴定结果显示,pET-28a(+)-CRM197主要为包涵体表达,pColdⅡ-CRM197主要为可溶性表达。优化pColdⅡ-CRM197可溶性表达条件,接种量为3%,IPTG浓度为0.4 mmol/L时,20℃诱导表达24 h,可显著提高可溶性目的蛋白表达量。利用Ni-NTA亲和层析纯化pColdⅡ-CRM197重组蛋白上清液,得到的目的蛋白纯度均高于98%。小鼠3次免疫后的ELISA结果显示,免疫小鼠血清中IgG、IgM、IgG1和IgG2a抗体水平均高于对照组。结论利用pColdⅡ载体实现了CRM197重组蛋白在大肠杆菌表达系统中的可溶性表达,其纯度高、免疫原性良好,为蛋白的推广应用奠定了基础。
关键词
CRM197蛋白
可溶性蛋白
免疫原性
纯化
大肠杆菌
结合疫苗
Keywords
CRM197 protein
soluble protein
immunogenicity
purification
Escherichia coli
conjugate vaccine
分类号
R378.71 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于胶体金免疫层析技术同步快速检测奶茶中的三种毒品成分
许鹏
徐淑娟
马骉
厉佳丽
苏威
胥天然
周宇欣
徐涵悦
张明洲
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2024
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
白喉毒素突变体CRM197重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及免疫原性分析
张泽月
马骉
厉佳丽
许梦琪
张明洲
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
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