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微小RNA-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制
被引量：
6
1
作者
姜贻乾
郭庆敏
+6 位作者
谷建钟
徐小平
安素红
苏芳
鲍艳红
黄常新
管晓翔
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期349-356,共8页
目的:研究微小RNA(miRNA)-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制。方法:构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-29b转染293T细胞获得重组慢病毒,提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞MCF-7。通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例...
目的:研究微小RNA(miRNA)-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制。方法:构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-29b转染293T细胞获得重组慢病毒,提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞MCF-7。通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例来验证转染情况;实时定量PCR检测miRNA-29b的表达水平;CCK-8实验和Transwell实验检测miRNA-29b过表达后乳腺癌细胞生物学行为的变化。采用生物信息学软件对miRNA-29b调控的下游靶基因进行预测和筛选,使用双荧光素酶检测、实时定量PCR和蛋白质印迹法进行验证。对筛选出的miRNA-29b调控的下游靶基因RTKN通过siRNA-RTKN验证其对MCF-7细胞的增殖和迁移的影响。结果:成功构建了miRNA-29b的重组慢病毒表达载体。感染乳腺癌细胞MCF-7后,lenti-miRNA-29b组和空载体转染组分别有90%和60%左右的细胞出现绿色荧光;lenti-miRNA-29 b组miRNA-29 b表达量较空载体转染组和空白对照组显著增加(均P<0.05),MCF-7细胞的增殖和迁移能力较空载体转染组显著减弱(均P<0.05)。RTKN的基因编码3'UTR区中具有miRNA-29b的结合位点;野生型RTKN-WT-3'UTR报告基因载体与lenti-miRNA-29b共转染MCF-7细胞后可使荧光素酶的活性显著下降(P<0.05)。转染siRNA-RTKN后,MCF-7细胞中RTKN蛋白的水平显著下降,细胞增殖和迁移能力显著减弱(均P<0.05)。结论:miRNA-29b能够通过抑制RTKN的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。
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关键词
微RNAS
乳腺肿瘤/病理生理
慢病毒属
转染
聚合酶链反应
细
胞增殖
肿瘤转移
肿瘤细胞
培养的
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题名
微小RNA-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制
被引量：
6
1
作者
姜贻乾
郭庆敏
谷建钟
徐小平
安素红
苏芳
鲍艳红
黄常新
管晓翔
机构
南京医科
大学
金陵临床
医学院
杭州师范大学医学院附属杭州市萧山区第一人民医院肿瘤中心
浙江中医药
大学
附属
第一
医院
肿瘤
科
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期349-356,共8页
基金
国家自然科学基金(81072495)
浙江省科技计划项目(201OC33006)
杭州市卫生科技计划项目(2017B16)
文摘
目的:研究微小RNA(miRNA)-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制。方法:构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-29b转染293T细胞获得重组慢病毒,提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞MCF-7。通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例来验证转染情况;实时定量PCR检测miRNA-29b的表达水平;CCK-8实验和Transwell实验检测miRNA-29b过表达后乳腺癌细胞生物学行为的变化。采用生物信息学软件对miRNA-29b调控的下游靶基因进行预测和筛选,使用双荧光素酶检测、实时定量PCR和蛋白质印迹法进行验证。对筛选出的miRNA-29b调控的下游靶基因RTKN通过siRNA-RTKN验证其对MCF-7细胞的增殖和迁移的影响。结果:成功构建了miRNA-29b的重组慢病毒表达载体。感染乳腺癌细胞MCF-7后,lenti-miRNA-29b组和空载体转染组分别有90%和60%左右的细胞出现绿色荧光;lenti-miRNA-29 b组miRNA-29 b表达量较空载体转染组和空白对照组显著增加(均P<0.05),MCF-7细胞的增殖和迁移能力较空载体转染组显著减弱(均P<0.05)。RTKN的基因编码3'UTR区中具有miRNA-29b的结合位点;野生型RTKN-WT-3'UTR报告基因载体与lenti-miRNA-29b共转染MCF-7细胞后可使荧光素酶的活性显著下降(P<0.05)。转染siRNA-RTKN后,MCF-7细胞中RTKN蛋白的水平显著下降,细胞增殖和迁移能力显著减弱(均P<0.05)。结论:miRNA-29b能够通过抑制RTKN的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。
关键词
微RNAS
乳腺肿瘤/病理生理
慢病毒属
转染
聚合酶链反应
细
胞增殖
肿瘤转移
肿瘤细胞
培养的
Keywords
MicroRNAs
Breast neoplasms/physiopathology
Lentivirus
Transfection
Polymerase chain reaction
Cell proliferation
Neoplasm metastasis
Tumor cells, cultured
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微小RNA-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制
姜贻乾
郭庆敏
谷建钟
徐小平
安素红
苏芳
鲍艳红
黄常新
管晓翔
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
6
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