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MGMT在双氧水诱导的氧化损伤模型中对晶状体上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响
1
作者
蔡卫华
郭仁建
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2024年第12期955-960,共6页
目的探讨DNA修复基因MGMT在氧化损伤环境中对晶状体上皮细胞(LECs)中DNA的损伤修复能力以及凋亡影响。方法采用不同浓度H_(2)O_(2)(0、200、400、600μmol·L^(-1))处理培养的晶状体上皮细胞(LECs),确认不同浓度H_(2)O_(2)对LECs的...
目的探讨DNA修复基因MGMT在氧化损伤环境中对晶状体上皮细胞(LECs)中DNA的损伤修复能力以及凋亡影响。方法采用不同浓度H_(2)O_(2)(0、200、400、600μmol·L^(-1))处理培养的晶状体上皮细胞(LECs),确认不同浓度H_(2)O_(2)对LECs的影响,将培养的LECs分为Control组(不做处理)、H_(2)O_(2)组(加入400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2))、H_(2)O_(2)+HA组[加入400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)与对照质粒(HA)]及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组[加入400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)与5μL pcDNA3.1-MGMT(过表达质粒)及12μL Lipofectamine8000(脂质体转染试剂)]。CCK-8实验检测各组细胞活力;Western blot实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜组织(ARC组)及各组细胞蛋白(DNA损伤标志蛋白γH2A与促凋亡蛋白Bax/Bcl2)表达水平;免疫荧光检测各组细胞DNA损伤修复能力(检测DNA损伤标志物15A3),TUNEL染色实验检测各组细胞凋亡情况。结果Western blot实验检测结果显示,Control组与ARC组患者细胞中MGMT蛋白相对表达水平分别为1.000±0.002与0.597±0.001,差异有统计学意义(P<0.0001)。LECs的MGMT蛋白相对表达水平随H_(2)O_(2)浓度上升呈下降趋势。Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组γH2A相对表达水平分别为1.000±0.005、1.424±0.011、1.359±0.009、0.586±0.004,Bax/Bcl2表达水平分别为1.000±0.003、2.132±0.017、1.491±0.006、0.687±0.008,与H_(2)O_(2)+HA组比较,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。免疫荧光检测结果显示,Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组15A3相对表达水平分别为1.000±0.128、1.842±0.207、2.104±0.267、0.723±0.073,与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组15A3染色荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.001)。TUNEL染色检测结果显示,Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞凋亡的荧光强度分别为1.800±0.002、13.660±0.002、18.000±0.011、2.150±0.003,与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞凋亡的染色荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.0001)。CCK-8检测结果显示,Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞活力分别为100.09±1.54、57.09±2.09、60.39±3.87、74.16±1.96,与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞活力增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MGMT在ARC患者前囊膜组织以及H_(2)O_(2)诱导的LECs氧化损伤模型中的表达均下降。MGMT过表达参与双链断裂修复通路和碱基切除修复通路促进LECs内损伤性DNA的修复,从而增加细胞的活力和减少凋亡的发生,调控ARC的发生发展。
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关键词
年龄相关性白内障
氧化损伤
MGMT基因
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职称材料
题名
MGMT在双氧水诱导的氧化损伤模型中对晶状体上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响
1
作者
蔡卫华
郭仁建
机构
上海交通大学医学院苏州九龙
医院
杭州市萧山经济技术开发区医院眼科
出处
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2024年第12期955-960,共6页
文摘
目的探讨DNA修复基因MGMT在氧化损伤环境中对晶状体上皮细胞(LECs)中DNA的损伤修复能力以及凋亡影响。方法采用不同浓度H_(2)O_(2)(0、200、400、600μmol·L^(-1))处理培养的晶状体上皮细胞(LECs),确认不同浓度H_(2)O_(2)对LECs的影响,将培养的LECs分为Control组(不做处理)、H_(2)O_(2)组(加入400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2))、H_(2)O_(2)+HA组[加入400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)与对照质粒(HA)]及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组[加入400μmol·L^(-1) H_(2)O_(2)与5μL pcDNA3.1-MGMT(过表达质粒)及12μL Lipofectamine8000(脂质体转染试剂)]。CCK-8实验检测各组细胞活力;Western blot实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜组织(ARC组)及各组细胞蛋白(DNA损伤标志蛋白γH2A与促凋亡蛋白Bax/Bcl2)表达水平;免疫荧光检测各组细胞DNA损伤修复能力(检测DNA损伤标志物15A3),TUNEL染色实验检测各组细胞凋亡情况。结果Western blot实验检测结果显示,Control组与ARC组患者细胞中MGMT蛋白相对表达水平分别为1.000±0.002与0.597±0.001,差异有统计学意义(P<0.0001)。LECs的MGMT蛋白相对表达水平随H_(2)O_(2)浓度上升呈下降趋势。Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组γH2A相对表达水平分别为1.000±0.005、1.424±0.011、1.359±0.009、0.586±0.004,Bax/Bcl2表达水平分别为1.000±0.003、2.132±0.017、1.491±0.006、0.687±0.008,与H_(2)O_(2)+HA组比较,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组表达均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。免疫荧光检测结果显示,Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组15A3相对表达水平分别为1.000±0.128、1.842±0.207、2.104±0.267、0.723±0.073,与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组15A3染色荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.001)。TUNEL染色检测结果显示,Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞凋亡的荧光强度分别为1.800±0.002、13.660±0.002、18.000±0.011、2.150±0.003,与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞凋亡的染色荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.0001)。CCK-8检测结果显示,Control组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+HA组及H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞活力分别为100.09±1.54、57.09±2.09、60.39±3.87、74.16±1.96,与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+OE-MGMT组细胞活力增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MGMT在ARC患者前囊膜组织以及H_(2)O_(2)诱导的LECs氧化损伤模型中的表达均下降。MGMT过表达参与双链断裂修复通路和碱基切除修复通路促进LECs内损伤性DNA的修复,从而增加细胞的活力和减少凋亡的发生,调控ARC的发生发展。
关键词
年龄相关性白内障
氧化损伤
MGMT基因
Keywords
age-related cataract
oxidative damage
O6-methylguanine-DNA methyltransferase gene
分类号
R776.1 [医药卫生—眼科]
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题名
作者
出处
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被引量
操作
1
MGMT在双氧水诱导的氧化损伤模型中对晶状体上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响
蔡卫华
郭仁建
《眼科新进展》
CAS
北大核心
2024
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