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虾肝肠胞虫实时荧光RAA快速检测方法的建立
被引量：
13
1
作者
黄纪徽
吴山楠
+4 位作者
王丹云
张亮亮
陈平亚
程奇
张建勋
《养殖与饲料》
2018年第11期13-16,共4页
为了早期快速诊断近些年流行于国内的虾肝肠胞虫,根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫EHP-SSU rDNA序列比对分析,在SSU基因内确定了一段156 bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物和探针,经过优化重组酶介导的核酸技术(Recombinase-...
为了早期快速诊断近些年流行于国内的虾肝肠胞虫,根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫EHP-SSU rDNA序列比对分析,在SSU基因内确定了一段156 bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物和探针,经过优化重组酶介导的核酸技术(Recombinase-aid-amplification,RAA)反应条件,建立快速检测虾肝肠胞虫的RAA恒温荧光检测方法。在RAA进行到24个循环反应时可以检测到的质粒最小浓度是10 copies/μL,相当于10个病毒粒子。利用该方法,从天然感染EHP的虾肝胰腺组织DNA中可以检测出片段,而健康的虾和感染了传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)和虾虹彩病毒(SIV)的组织则没有扩增条带。试验表明,本研究建立的RAA恒温荧光检测方法具有快速、成本低、特异性好、准确性高的特点,为大范围早期病害的快速检测提供了新方法。
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关键词
虾肝肠胞虫
RAA检测
SSU-rDNA序列
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职称材料
鲤浮肿病毒荧光RAA快速检测方法的建立
被引量：
12
2
作者
郑晓聪
陈雨
+5 位作者
温智清
叶文涛
张建勋
黄倩君
梁晓清
刘荭
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期721-725,共5页
为建立一种简单、快速的鲤浮肿病毒(CEV)重组酶介导的链替换扩增(RAA)检测方法,本研究通过比较分析CEVP4a基因序列,设计引物与探针,经过筛选优化,建立了实时荧光RAA检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应20min即可快速、特异性地检测...
为建立一种简单、快速的鲤浮肿病毒(CEV)重组酶介导的链替换扩增(RAA)检测方法,本研究通过比较分析CEVP4a基因序列,设计引物与探针,经过筛选优化,建立了实时荧光RAA检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应20min即可快速、特异性地检测出CEV,与常见的鱼类病毒不发生交叉反应,其对质粒标准品的检测下限为2.8×10^1拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用本研究建立的方法对35份临床鲤科鱼类样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。本研究建立的检测方法操作简单,特异性强、敏感性高,结果可靠,不依赖于复杂的仪器,适用于现场对CEV的快速检测。
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关键词
重组酶介导链替换核酸扩增技术
鲤浮肿病毒
现场检测
快速检测
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职称材料
题名
虾肝肠胞虫实时荧光RAA快速检测方法的建立
被引量：
13
1
作者
黄纪徽
吴山楠
王丹云
张亮亮
陈平亚
程奇
张建勋
机构
海南出入境检验检疫局
杭州众测生物科技有限公司
出处
《养殖与饲料》
2018年第11期13-16,共4页
基金
海南省重点研发项目(ZDYF2017063)
海南省自然科学基金项目(317292)
海南出入境检验检疫局科研项目(HICIQKJ201701)
文摘
为了早期快速诊断近些年流行于国内的虾肝肠胞虫,根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫EHP-SSU rDNA序列比对分析,在SSU基因内确定了一段156 bp的特异性较强的片段作为靶序列,设计并合成引物和探针,经过优化重组酶介导的核酸技术(Recombinase-aid-amplification,RAA)反应条件,建立快速检测虾肝肠胞虫的RAA恒温荧光检测方法。在RAA进行到24个循环反应时可以检测到的质粒最小浓度是10 copies/μL,相当于10个病毒粒子。利用该方法,从天然感染EHP的虾肝胰腺组织DNA中可以检测出片段,而健康的虾和感染了传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)和虾虹彩病毒(SIV)的组织则没有扩增条带。试验表明,本研究建立的RAA恒温荧光检测方法具有快速、成本低、特异性好、准确性高的特点,为大范围早期病害的快速检测提供了新方法。
关键词
虾肝肠胞虫
RAA检测
SSU-rDNA序列
分类号
S945.4 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
鲤浮肿病毒荧光RAA快速检测方法的建立
被引量：
12
2
作者
郑晓聪
陈雨
温智清
叶文涛
张建勋
黄倩君
梁晓清
刘荭
机构
深圳海关食品检验检疫技术中心
南京农业大学
大连海洋大学
杭州众测生物科技有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期721-725,共5页
基金
国家科技部重点研发计划(2016YFD0501103)
质检科研项目(2017IK306)
文摘
为建立一种简单、快速的鲤浮肿病毒(CEV)重组酶介导的链替换扩增(RAA)检测方法,本研究通过比较分析CEVP4a基因序列,设计引物与探针,经过筛选优化,建立了实时荧光RAA检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应20min即可快速、特异性地检测出CEV,与常见的鱼类病毒不发生交叉反应,其对质粒标准品的检测下限为2.8×10^1拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用本研究建立的方法对35份临床鲤科鱼类样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。本研究建立的检测方法操作简单,特异性强、敏感性高,结果可靠,不依赖于复杂的仪器,适用于现场对CEV的快速检测。
关键词
重组酶介导链替换核酸扩增技术
鲤浮肿病毒
现场检测
快速检测
Keywords
recombinase-aid amplification
carp edema virus
on site detection
rapid detection
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
虾肝肠胞虫实时荧光RAA快速检测方法的建立
黄纪徽
吴山楠
王丹云
张亮亮
陈平亚
程奇
张建勋
《养殖与饲料》
2018
13
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鲤浮肿病毒荧光RAA快速检测方法的建立
郑晓聪
陈雨
温智清
叶文涛
张建勋
黄倩君
梁晓清
刘荭
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
12
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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