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猪轮状病毒VP8截短蛋白-铁蛋白纳米颗粒的制备与免疫原性分析
1
作者
彭凤巧
李博硕
+1 位作者
杜恩岐
周宏超
《动物医学进展》
北大核心
2025年第4期59-65,共7页
在铁蛋白纳米颗粒骨架上集中展示猪轮状病毒(PoRV)VP8截短蛋白,制备一种以铁蛋白(Ferritin)为载体的PoRV纳米颗粒亚单位疫苗并评估其免疫原性。将PoRV VP8截短蛋白和铁蛋白利用SpyCatcher/SpyTag系统连接形成PoRV VP8-Ferritin,通过透...
在铁蛋白纳米颗粒骨架上集中展示猪轮状病毒(PoRV)VP8截短蛋白,制备一种以铁蛋白(Ferritin)为载体的PoRV纳米颗粒亚单位疫苗并评估其免疫原性。将PoRV VP8截短蛋白和铁蛋白利用SpyCatcher/SpyTag系统连接形成PoRV VP8-Ferritin,通过透射电镜(TEM)、高效液相色谱(HPLC)、动态光散射(DLS)对纳米颗粒进行表征分析,并配伍佐剂制备亚单位疫苗免疫小鼠。对免疫后各时间点小鼠血清的特异性IgG抗体和35 d的特异性IgG抗体进行分型(IgG2a和IgG1)检测。结果显示,VP8-Ferritin能较好地在体外组装形成平均粒径为15.56 nm的颗粒结构,组装效率可达85%。免疫后14 d VP8-Ferritin免疫组和VP8免疫组均能在小鼠血清中检测到特异性IgG抗体,OD 450值分别为0.521和0.229;免疫后42 d各免疫组的特异性IgG抗体水平达到峰值,OD 450值分别为1.197和0.531。免疫后的VP8-Ferritin亚单位疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,其特异性IgG抗体水平极显著高于VP8亚单位疫苗(P<0.01);VP8-Ferritin免疫组IgG2a/IgG1比值为2.564,显著高于VP8免疫组的IgG2a/IgG1比值1.791(P<0.05)。结果表明VP8-Ferritin纳米颗粒亚单位疫苗增强了VP8抗原的免疫原性,主要表现TH1型免疫反应,该结果为猪轮状病毒亚单位疫苗的研究提供了新思路。
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关键词
猪轮状病毒
VP8蛋白
纳米颗粒
免疫原性
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职称材料
胞内劳森氏菌鞭毛蛋白Flic的可溶性表达与免疫原性分析
2
作者
夏中秋
陈宇婧
+3 位作者
岳凯
管翠翠
杜恩岐
姚伦广
《动物医学进展》
北大核心
2022年第11期22-26,共5页
采用PCR扩增出猪回肠炎胞内劳森氏菌的鞭毛蛋白基因Flic(LI0710),再将目的基因和Msyb标签插入原核表达载体pET-28a,构建表达质粒pET28a-Msyb-Flic。然后将测序正确的质粒转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,0.5 mmol IPTG诱导阳性菌株进行...
采用PCR扩增出猪回肠炎胞内劳森氏菌的鞭毛蛋白基因Flic(LI0710),再将目的基因和Msyb标签插入原核表达载体pET-28a,构建表达质粒pET28a-Msyb-Flic。然后将测序正确的质粒转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,0.5 mmol IPTG诱导阳性菌株进行蛋白表达,采用超声破碎仪破碎菌体收集蛋白。最后使用NI柱摸索纯化条件获得目的蛋白,采用Western blot检测蛋白特异性,免疫小鼠检测抗体水平。结果表明,获得了可溶性表达的胞内劳森氏菌鞭毛蛋白Flic(LI0710),用Flic(LI0710)蛋白免疫小鼠后能产生较高水平的特异性抗体,表达蛋白与小鼠胞内劳森氏菌抗血清可发生特异性反应。结果为胞内劳森氏菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。
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关键词
胞内劳森氏菌
鞭毛蛋白
原核表达
纯化
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职称材料
题名
猪轮状病毒VP8截短蛋白-铁蛋白纳米颗粒的制备与免疫原性分析
1
作者
彭凤巧
李博硕
杜恩岐
周宏超
机构
西北农林
科技
大学动物医学院
杨凌凯瑞生物科技有限公司
出处
《动物医学进展》
北大核心
2025年第4期59-65,共7页
基金
陕西省农业厅省级农业专项(2019SJNYZX45)。
文摘
在铁蛋白纳米颗粒骨架上集中展示猪轮状病毒(PoRV)VP8截短蛋白,制备一种以铁蛋白(Ferritin)为载体的PoRV纳米颗粒亚单位疫苗并评估其免疫原性。将PoRV VP8截短蛋白和铁蛋白利用SpyCatcher/SpyTag系统连接形成PoRV VP8-Ferritin,通过透射电镜(TEM)、高效液相色谱(HPLC)、动态光散射(DLS)对纳米颗粒进行表征分析,并配伍佐剂制备亚单位疫苗免疫小鼠。对免疫后各时间点小鼠血清的特异性IgG抗体和35 d的特异性IgG抗体进行分型(IgG2a和IgG1)检测。结果显示,VP8-Ferritin能较好地在体外组装形成平均粒径为15.56 nm的颗粒结构,组装效率可达85%。免疫后14 d VP8-Ferritin免疫组和VP8免疫组均能在小鼠血清中检测到特异性IgG抗体,OD 450值分别为0.521和0.229;免疫后42 d各免疫组的特异性IgG抗体水平达到峰值,OD 450值分别为1.197和0.531。免疫后的VP8-Ferritin亚单位疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,其特异性IgG抗体水平极显著高于VP8亚单位疫苗(P<0.01);VP8-Ferritin免疫组IgG2a/IgG1比值为2.564,显著高于VP8免疫组的IgG2a/IgG1比值1.791(P<0.05)。结果表明VP8-Ferritin纳米颗粒亚单位疫苗增强了VP8抗原的免疫原性,主要表现TH1型免疫反应,该结果为猪轮状病毒亚单位疫苗的研究提供了新思路。
关键词
猪轮状病毒
VP8蛋白
纳米颗粒
免疫原性
Keywords
Porcine rotavirus
VP8 protein
Nanoparticle
Immunogenicity
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
胞内劳森氏菌鞭毛蛋白Flic的可溶性表达与免疫原性分析
2
作者
夏中秋
陈宇婧
岳凯
管翠翠
杜恩岐
姚伦广
机构
南阳师范学院生命科学与农业工程学院
河南省畜禽保健品工程技术研究中心
杨凌凯瑞生物科技有限公司
西北农林
科技
大学
出处
《动物医学进展》
北大核心
2022年第11期22-26,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31870917)
河南省高校科技创新团队项目(20IRTSTHN024)。
文摘
采用PCR扩增出猪回肠炎胞内劳森氏菌的鞭毛蛋白基因Flic(LI0710),再将目的基因和Msyb标签插入原核表达载体pET-28a,构建表达质粒pET28a-Msyb-Flic。然后将测序正确的质粒转化至大肠埃希氏菌BL21(DE3)中,0.5 mmol IPTG诱导阳性菌株进行蛋白表达,采用超声破碎仪破碎菌体收集蛋白。最后使用NI柱摸索纯化条件获得目的蛋白,采用Western blot检测蛋白特异性,免疫小鼠检测抗体水平。结果表明,获得了可溶性表达的胞内劳森氏菌鞭毛蛋白Flic(LI0710),用Flic(LI0710)蛋白免疫小鼠后能产生较高水平的特异性抗体,表达蛋白与小鼠胞内劳森氏菌抗血清可发生特异性反应。结果为胞内劳森氏菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。
关键词
胞内劳森氏菌
鞭毛蛋白
原核表达
纯化
Keywords
Lawsonia intracellularis
flagellin
prokaryotic expression
purification
分类号
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪轮状病毒VP8截短蛋白-铁蛋白纳米颗粒的制备与免疫原性分析
彭凤巧
李博硕
杜恩岐
周宏超
《动物医学进展》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
胞内劳森氏菌鞭毛蛋白Flic的可溶性表达与免疫原性分析
夏中秋
陈宇婧
岳凯
管翠翠
杜恩岐
姚伦广
《动物医学进展》
北大核心
2022
0
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职称材料
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