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题名mRNA差异显示技术的研究进展
被引量：7
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作者
陈永华
严钦泉
余建蒲
肖国樱
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机构
湖南农业大学
望城县成人中等专业学校
中国科学院亚热带农业生态研究所
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出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期9-12,43,共5页
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基金
湖南省杰出青年基金(03JJY1004)
中国科学院知识创新工程重要方向项目(KZCX3-SW-434)。
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文摘
针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。
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关键词
MRNA差异显示技术
研究进展
Northern
非放射性同位素
非放射性标记
dNTP浓度
锚定引物
随机引物
放射性污染
启动子序列
假阳性
重复序列
标记方法
退火温度
平行实验
反转录酶
制备过程
R参数
特异性
PCR
单碱基
专一性
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Keywords
mRNA differentially display technology
Primer design
Non-radioactive marker
False-positive
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分类号
Q781
[生物学—分子生物学]
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