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人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定
被引量：
1
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作者
夏超
沈良华
+5 位作者
李满妹
唐维
易善泽
牛得伟
王峰
李药兰
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期301-307,共7页
目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆...
目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆转录得c DNA,使用Primer 6.0软件设计特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增得到FHRA-HRB片段,测序成功后,将FHRA-HRB插入p ET-15b脱磷载体中,转化入Rosettagami表达宿主,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导FHRA-HRB的体外表达,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白.用Western-blot法鉴定FHRA-HRB蛋白表达.结果:成功扩增了大小约1100 bp的FHRA-HRB片段,克隆进p ET-15b载体后,菌液PCR验证与测序分析结果表明FHRA-HRB片段序列与预期一致且读码框插入正确,表达载体构建成功.工程菌经IPTG诱导后成功表达大小约43 000的FHRA-HRB蛋白,经Ni-NTA agarose纯化后FHRA-HRB蛋白纯度达95%以上.纯化后的FHRA-HRB蛋白经Western-blot鉴定其大小正确.结论:成功构建p ET-15b-FHRA-HRB表达载体,经表达纯化后,得到了纯度较高的FHRA-HRB蛋白,纯化蛋白经Western-blot鉴定正确.本研究为进一步研究其抗RSV活性和开发以F蛋白为靶点的抗RSV药物提供实验依据.
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关键词
呼吸道合胞病毒
FHRA-HRB片段
载体构建
蛋白表达
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职称材料
题名
人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定
被引量：
1
1
作者
夏超
沈良华
李满妹
唐维
易善泽
牛得伟
王峰
李药兰
机构
暨南大学药学院中药与天然产物药物研究所
中药
药效物质基础及创新
药物
研究
广东省高校重点实验室
暨南大学药学院
基因组
药物
研究所
出处
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期301-307,共7页
基金
国家自然科学基金项目(81473116)
高等学校学科创新引智计划项目(B13038)
+1 种基金
广东省自然科学基金重点项目(S2013020012864)
广东省教育厅科技创新项目(2012KJCX0017)
文摘
目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆转录得c DNA,使用Primer 6.0软件设计特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增得到FHRA-HRB片段,测序成功后,将FHRA-HRB插入p ET-15b脱磷载体中,转化入Rosettagami表达宿主,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导FHRA-HRB的体外表达,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白.用Western-blot法鉴定FHRA-HRB蛋白表达.结果:成功扩增了大小约1100 bp的FHRA-HRB片段,克隆进p ET-15b载体后,菌液PCR验证与测序分析结果表明FHRA-HRB片段序列与预期一致且读码框插入正确,表达载体构建成功.工程菌经IPTG诱导后成功表达大小约43 000的FHRA-HRB蛋白,经Ni-NTA agarose纯化后FHRA-HRB蛋白纯度达95%以上.纯化后的FHRA-HRB蛋白经Western-blot鉴定其大小正确.结论:成功构建p ET-15b-FHRA-HRB表达载体,经表达纯化后,得到了纯度较高的FHRA-HRB蛋白,纯化蛋白经Western-blot鉴定正确.本研究为进一步研究其抗RSV活性和开发以F蛋白为靶点的抗RSV药物提供实验依据.
关键词
呼吸道合胞病毒
FHRA-HRB片段
载体构建
蛋白表达
Keywords
RSV
FHRA-HRB fragment
vector construction
protein expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定
夏超
沈良华
李满妹
唐维
易善泽
牛得伟
王峰
李药兰
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2017
1
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