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HLA-A*0207重链胞外区原核表达载体的构建及表达
被引量：
2
1
作者
何贤辉
徐丽慧
+2 位作者
曾耀英
刘毅
蔡小嫦
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
2004年第4期413-419,共7页
目的 :克隆HLA -A 0 2 0 7(A2 )重链基因 ,构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BirAsubstratepeptide ,BSP)的A2重链胞外区原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT-PCR方法从HLA -A2 + 供者白细胞中克隆A2基因并进行DNA测...
目的 :克隆HLA -A 0 2 0 7(A2 )重链基因 ,构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BirAsubstratepeptide ,BSP)的A2重链胞外区原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT-PCR方法从HLA -A2 + 供者白细胞中克隆A2基因并进行DNA测序 ,并以PCR方法构建在羧基端融合BSP的A2重链胞外区表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达。结果 :从 31名HLA -A2 + 供者白细胞中克隆到的基因经DNA测序显示 ,只有从供者 2得到的基因是HLA -A 0 2 0 7。将编码该基因编码重链胞外区 1- 2 75的序列和编码BSP的序列融合 ,构建融合蛋白表达载体 ,并以测序验证。融合蛋白在BL2 1(ED3)中获得高效表达 ,产物相对分子质量为 35 0 0 0 ,约占菌体总蛋白的 30 % ,主要存在于包涵体中 ,对包涵体进行洗涤后得到纯度为 80 %的重组蛋白。结论 :成功克隆HLA -A 0 2 0 7基因 。
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关键词
人类白细胞抗原
CDNA克隆
融合蛋白
包涵体
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职称材料
CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究
被引量：
1
2
作者
何贤辉
徐丽慧
+2 位作者
刘毅
蔡小嫦
曾耀英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期135-139,共5页
目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦...
目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。
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关键词
CTLA4
绿色荧光蛋白
融合蛋白
共聚焦显微术
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职称材料
题名
HLA-A*0207重链胞外区原核表达载体的构建及表达
被引量：
2
1
作者
何贤辉
徐丽慧
曾耀英
刘毅
蔡小嫦
机构
暨南大学
组织移植与免疫教育部重点实验室
暨南大学第一附属医院皮肤科
出处
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
2004年第4期413-419,共7页
基金
国家自然科学基金重点项目 (30 2 30 35 0 )
国家重点基础研究发展规划项目 ("973") (G2 0 0 0 0 5 70 0 6 )
广东省"十五"重大专项 (A30 2 0 2 0 2 0 4 )
文摘
目的 :克隆HLA -A 0 2 0 7(A2 )重链基因 ,构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BirAsubstratepeptide ,BSP)的A2重链胞外区原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT-PCR方法从HLA -A2 + 供者白细胞中克隆A2基因并进行DNA测序 ,并以PCR方法构建在羧基端融合BSP的A2重链胞外区表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达。结果 :从 31名HLA -A2 + 供者白细胞中克隆到的基因经DNA测序显示 ,只有从供者 2得到的基因是HLA -A 0 2 0 7。将编码该基因编码重链胞外区 1- 2 75的序列和编码BSP的序列融合 ,构建融合蛋白表达载体 ,并以测序验证。融合蛋白在BL2 1(ED3)中获得高效表达 ,产物相对分子质量为 35 0 0 0 ,约占菌体总蛋白的 30 % ,主要存在于包涵体中 ,对包涵体进行洗涤后得到纯度为 80 %的重组蛋白。结论 :成功克隆HLA -A 0 2 0 7基因 。
关键词
人类白细胞抗原
CDNA克隆
融合蛋白
包涵体
Keywords
human leukocyte antigen
cDNA cloning
fusion protein
inclusion body
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究
被引量：
1
2
作者
何贤辉
徐丽慧
刘毅
蔡小嫦
曾耀英
机构
暨南大学
组织移植与免疫教育部重点实验室
暨南大学第一附属医院皮肤科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期135-139,共5页
基金
国家自然科学基金重点项目资助(No .30 2 30 350 )
国家重点基础研究发展规划 ( 973)项目资助 (No .G2 0 0 0 570 0 6 )
文摘
目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。
关键词
CTLA4
绿色荧光蛋白
融合蛋白
共聚焦显微术
Keywords
CTLA4
green fluorescent protein
fusion protein
confo cal microscopy
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HLA-A*0207重链胞外区原核表达载体的构建及表达
何贤辉
徐丽慧
曾耀英
刘毅
蔡小嫦
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
2004
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究
何贤辉
徐丽慧
刘毅
蔡小嫦
曾耀英
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
1
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职称材料
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