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靶向PCNA基因的小干扰RNA对鼻咽癌CNE2细胞周期的影响 被引量:6
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作者 练兵 王继群 金琳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1533-1537,共5页
目的:研究小干扰RNA抑制PCNA基因表达后对鼻咽癌CNE2细胞株增殖及细胞周期的影响。方法:利用体外合成法合成针对PCNA基因的小干扰RNA(siRNA)序列,应用脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞,实时定量PCR(real-timePCR)和免疫组织化学法观察siRNA干... 目的:研究小干扰RNA抑制PCNA基因表达后对鼻咽癌CNE2细胞株增殖及细胞周期的影响。方法:利用体外合成法合成针对PCNA基因的小干扰RNA(siRNA)序列,应用脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞,实时定量PCR(real-timePCR)和免疫组织化学法观察siRNA干扰后细胞中PCNA mRNA水平和PCNA蛋白表达,倒置相差显微镜观察转染前后CNE2细胞的生长变化,流式细胞仪检测siRNA干扰后的细胞周期。结果:在siR-NA转染CNE2细胞后,细胞增殖受到抑制,蛋白表达不同程度降低,对PCNA mRNA水平的抑制达98.5%,细胞周期在G0/G1停滞。结论:siRNA可在鼻咽癌中有效发挥RNA干扰效应,抑制PCNA mRNA及蛋白表达,降低PCNA活性,抑制鼻咽癌细胞增殖,为鼻咽癌基因治疗提供了新的方法。 展开更多
关键词 siRNA 鼻咽肿瘤 增殖细胞核抗原 CNE2细胞
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高效液相色谱-串联质谱法对家兔血浆中奥司他韦浓度的测定 被引量:3
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作者 洪爱华 李满妹 +1 位作者 刘忠 梁志红 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期131-135,共5页
建立了家免血浆中奥司他韦的高效液相色谱-串联质谱测定方法。以ZORBAXXDB—C18柱为色谱柱,乙腈-0.4%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速300μL·min-1;柱温:20℃。质谱条件为气动辅助电喷雾离子源(ESI),检测方式为正离子... 建立了家免血浆中奥司他韦的高效液相色谱-串联质谱测定方法。以ZORBAXXDB—C18柱为色谱柱,乙腈-0.4%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速300μL·min-1;柱温:20℃。质谱条件为气动辅助电喷雾离子源(ESI),检测方式为正离子多离子反应监测(MRM),以m/z313/166、313/208为定性离子对,m/z313/166为定量离子;生物样品采用固相萃取方法处理。奥司他韦的线性范围为0.05—500μg·L-1,定量下限达0.05μg·L-1,日内、日间相对标准偏差均小于6%,回收率为91%~93%,结果表明该法准确、灵敏、特异,适用于生物样品中奥司他韦的测定。该文还进一步探讨了奥司他韦主要质谱碎片的产生机理。 展开更多
关键词 高效液相色谱-串联质谱 奥司他韦 血浆 碰撞活化裂解
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nm23-H1基因对乳腺癌细胞MCF-7S增殖及移动特性的影响 被引量:2
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作者 鲁欣 王一飞 +3 位作者 张美英 肖巧学 熊盛 李久香 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2003年第2期12-18,共7页
 目的:探讨nm23-H1基因转染乳腺癌细胞后对其增殖和转移能力的影响。方法:用人nm23-H1基因与真核表达质粒pcDNA3.1(-)构建成重组表达质粒pcDNA3.1-NMH1,转染人乳腺癌细胞MCF-7S,经G418筛选4周后,筛选出稳定表达nm23-H1的细胞株,绘制其...  目的:探讨nm23-H1基因转染乳腺癌细胞后对其增殖和转移能力的影响。方法:用人nm23-H1基因与真核表达质粒pcDNA3.1(-)构建成重组表达质粒pcDNA3.1-NMH1,转染人乳腺癌细胞MCF-7S,经G418筛选4周后,筛选出稳定表达nm23-H1的细胞株,绘制其生长曲线,检测其增殖、移动能力,用SPSS统计软件处理实验数据,分析nm23-H1基因对乳腺癌细胞的作用。结果:与对照组相比,转染nm23-H1基因的MCF-7S细胞的对数生长期延长,细胞增殖速度减慢,移动距离缩短,克隆形成率降低。结论:nm23-H1基因在乳腺癌细胞的体外实验中有抑制癌细胞生长、增殖、转移能力的作用。 展开更多
关键词 NM23基因 乳腺癌 脂质体 抑癌基因
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重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达 被引量:2
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作者 冉延超 王一飞 +4 位作者 熊盛 张美英 黄文韬 罗林波 刘秋英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期954-959,共6页
目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标... 目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中 ;梯度变化表达条件获得产物高表达 ;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白 ;Westernblot鉴定产物的免疫原性 ;HPLC测定产物的激酶活性 ;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列无误 ;目的蛋白最高表达量可达 4 9 6 % ;纯化的表达产物能与天然NDPK -A的多克隆抗体特异结合 ;酶比活为 4 72U/mg ;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论 :表达质粒pQE -nm2 3H1能高效表达重组人NDPK -A ,纯化工艺简便 ,产物活性与天然NDPK -A无异。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 肿瘤抑制蛋白质类
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nm23-H1基因与人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的相关性分析 被引量:1
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作者 袁茵 王一飞 +5 位作者 张美英 熊盛 李久香 胡红梅 刘秋英 吴志聪 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2004年第4期400-407,共8页
目的 :探讨nm2 3-H1基因的表达与白血病细胞HL - 6 0增殖之间的关系。方法 :以 2 5ng/mL阿糖胞苷处理HL - 6 0细胞 ,MTT法测定细胞生长抑制率 ,NBT还原比色法判断细胞分化状况 ,RT -PCR检测nm2 3-H1基因表达的变化 ;构建nm2 3-H1基因的... 目的 :探讨nm2 3-H1基因的表达与白血病细胞HL - 6 0增殖之间的关系。方法 :以 2 5ng/mL阿糖胞苷处理HL - 6 0细胞 ,MTT法测定细胞生长抑制率 ,NBT还原比色法判断细胞分化状况 ,RT -PCR检测nm2 3-H1基因表达的变化 ;构建nm2 3-H1基因的真核表达质粒pEGFP -N1-nm2 3-H1,转染HL - 6 0细胞 ,通过细胞生长曲线和血清依赖性实验检测nm2 3-H1基因的过表达对HL - 6 0细胞生长的影响。结果 :小剂量Ara -C对HL - 6 0细胞的生长呈时间依赖性抑制 ,作用4d后细胞NBT还原能力增强且nm2 3-H1基因的表达下调 ;转染nm2 3-H1基因的HL - 6 0细胞生长加快、血清依赖性下降。结论 :Ara -C对HL - 6 0细胞增殖的抑制作用与下调nm2 3-H1基因的表达有一定关系 ;nm2 3-H1基因在HL - 6 0细胞中的过表达有促细胞增殖的作用 ,即增高了HL -6 展开更多
关键词 NM23-H1基因 HL-60细胞 细胞增殖
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夹心酶联免疫吸附试验检测人表皮生长因子的方法建立及其应用研究
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作者 夏勇 吴学诗 张美英 《实用医学杂志》 CAS 2005年第14期1588-1590,共3页
目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹... 目的:建立临床适用的表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)酶联免疫检测方法,探讨EGF在临床常见肿瘤患者血清中的含量变化规律。方法:采用EGF单抗包被酶标板,兔抗EGF多抗为二抗,以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG作为酶标抗体建立夹心法ELISA检测临床常见肿瘤患者及健康体检人群的血清EGF含量。结果:建立的EGF酶联免疫吸附法最小检测限达15.6ng/L,批内精密度为8.7%,批间精密度为11.6%,平均回收率为94.7%,符合临床检测要求。血清EGF含量在31名正常人为(1.305±0.382)ng/mL,24名乳腺癌病人术前值为(0.729±0.347)ng/mL,术后为(0.711±0.332)ng/mL,17名结直肠癌病人术前为(0.678±0.311)ng/mL,术后为(0.658±0.298)ng/mL,19名胃癌病人术前为(0.598±0.224)ng/mL,术后为(0.614±0.257)ng/mL。各肿瘤组患者血清EGF水平较健康对照组明显降低(P<0.01)。结论:建立了适用于临床检测的EGF酶联免疫检测方法,肿瘤患者血清中EGF含量较健康对照组明显下降,该检测方法的建立为进一步探讨肿瘤的发病机制提供了有效的手段。 展开更多
关键词 夹心酶联免疫吸附试验 人表皮生长因子 方法建立 酶联免疫检测方法 血清EGF ELISA检测 酶联免疫吸附法 健康对照组 factor 含量变化规律 肿瘤患者 辣根过氧化物 病人术前 临床常见 临床检测 批间精密度 平均回收率 体检人群
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