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喂食转基因大豆对子代雄鼠生殖系统的影响 被引量：9
1
作者 芦春斌 周文 刘标 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期119-123,共5页
亲代小鼠分别喂食转基因和非转基因大豆饲料,120 d后组内交配获得子一代小鼠。以转基因饲料喂食的亲代所繁殖的子代小鼠作为实验组,断乳后子鼠继续喂食转基因大豆饲料;对照组子鼠为亲代非转基因喂食组所繁殖,断乳后继续喂食非转基因大... 亲代小鼠分别喂食转基因和非转基因大豆饲料,120 d后组内交配获得子一代小鼠。以转基因饲料喂食的亲代所繁殖的子代小鼠作为实验组,断乳后子鼠继续喂食转基因大豆饲料;对照组子鼠为亲代非转基因喂食组所繁殖,断乳后继续喂食非转基因大豆饲料。分别于喂食30、60、90、120 d取子代小鼠的睾丸称重并计算脏器系数,伊红法染色检测精子存活率与畸形率;制作石蜡切片HE染色后观察睾丸病理学变化。结果表明:与对照组相比,实验组小鼠睾丸系数、精子存活率与畸形率均无显著性差异;组织切片镜检未发现两组小鼠的睾丸出现明显病理损伤。实验结果说明转基因大豆饲料喂食120 d未对子代雄鼠精子质量和睾丸组织病理造成影响,表明亲代长期喂食转基因大豆饲料后无潜在遗传毒性及积累效应。 展开更多
关键词 转基因大豆 小鼠 睾丸系数 精子质量 病理
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抗草甘膦转基因大豆对雄鼠睾丸的影响 被引量：3
2
作者 芦春斌 蔡娟 +1 位作者 戚青林 隗洋洋 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期245-249,共5页
以雄性昆明小鼠为动物模型,分别以抗草甘膦转基因大豆和非转基因大豆饲料喂食,于30、90 d后,取其睾丸.采用流式细胞术检测睾丸组织中各生殖周期细胞比例、Hoechst33258染色观察睾丸细胞凋亡、组织化学染色技术观察睾丸组织病理学变化.... 以雄性昆明小鼠为动物模型,分别以抗草甘膦转基因大豆和非转基因大豆饲料喂食,于30、90 d后,取其睾丸.采用流式细胞术检测睾丸组织中各生殖周期细胞比例、Hoechst33258染色观察睾丸细胞凋亡、组织化学染色技术观察睾丸组织病理学变化.研究抗草甘膦转基因大豆对雄鼠睾丸的影响.结果显示,30、90 d实验组和对照组小鼠睾丸精细胞单倍体、2倍体、4倍体比例均正常且趋于稳定,单倍体比例占主导地位,且实验组与对照组相比无统计学差异.在荧光显微镜下实验组睾丸细胞的细胞核呈正常的蓝色,与对照组相比,未发现明显的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白的凋亡细胞.组织病理观察也未发现两组小鼠的睾丸出现明显病理损伤.30 d喂食抗草甘膦转基因大豆急性毒理研究和90 d喂食抗草甘膦转基因大豆亚慢性毒理研究对雄鼠睾丸均无显著影响. 展开更多
关键词 转基因大豆 雄鼠 流式细胞术 细胞凋亡 组织病理
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围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101) 被引量：2
3
作者 谢琪璇 黄卉卉 +3 位作者 蒋启荣 高桥祐司 秋山泰身 秦俊文 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期134-138,共5页
揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床... 揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床期胚胎的內细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强。结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用。 展开更多
关键词 TSG101 表达型 胚胎 围着床期
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球状脂联素对卵巢微血管内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响 被引量：1
4
作者 陈雷 卢小圣 +3 位作者 李雅兰 毛周飞 肖銮娟 禹艳红 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期614-621,共8页
目的分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素... 目的分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素受体以及血管内皮细胞标记v WF;通过血管生成因子(VEGFA)处理检测卵巢微血管内皮细胞在Matrigel上的毛细管形成特性。重组的球状脂联素蛋白处理卵巢微血管内皮细胞,通过MTS检测细胞增殖;细胞划痕愈合法检测细胞迁移;Matrigel基质胶的血管形成,Western blot检测单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化激活。结果分离出的细胞表现为卵泡刺激素受体阴性,黄体生成素受体阳性,v WF阳性,且VEGFA能够促进血管生长,具有卵巢特异的血管内皮生长特性。高剂量浓度(1μg/m L和3μg/m L)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管内皮细胞数量分别增加(158.72±14.50)%和(186.50±4.20)%,促进细胞增殖(P<0.01);高剂量浓度(1μg/m L和3μg/m L)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管划痕愈合率分别为(49.43±3.43)%(P<0.05)和(69.67±1.2)%(P<0.01);3μg/m L的脂联素处理卵巢微血管内皮细胞形成的毛细管状长度为对照组的7.63±0.66倍(P<0.01)。3μg/m L的球状脂联素蛋白处理饥饿处理后的卵巢微血管内皮细胞培养15 min后p AMPK/AMPK、30 min后p AMPK/AMPK显著高于未加入蛋白处理的对照(P<0.01)。Compound C抑制了球状脂联素促进的卵巢微血管内皮细胞的管状结构形成及AMPK磷酸化激活。结论成功分离了卵巢微血管内皮细胞,球状脂联素蛋白能够通过激活AMPK信号途径促进卵巢微血管内皮细胞的血管新生。 展开更多
关键词 球状脂联素 卵巢 血管新生 血管内皮细胞 AMPK
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ZP2抑或ZP3——精卵识别机制的争辩 被引量：3
5
作者 曹佐武 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期129-133,143,共6页
本文综述受精研究的新进展,精子与卵透明带的识别是受精过程中的一个关键过程。自从上世纪七十年代以来,国际上有关实验室对受精机理进行了系统的研究,取得了明显的进展,建立了精卵识别的经典理论,认为卵透明带ZP3是精子的初级受体与顶... 本文综述受精研究的新进展,精子与卵透明带的识别是受精过程中的一个关键过程。自从上世纪七十年代以来,国际上有关实验室对受精机理进行了系统的研究,取得了明显的进展,建立了精卵识别的经典理论,认为卵透明带ZP3是精子的初级受体与顶体反应的诱导剂。然而,近年来的深入研究结果与原来的理论发生明显冲突,使得原来清晰的阐述变得迷糊,原来顺理成章的结论重新变成疑点。 展开更多
关键词 透明带 受精 精子受体 顶体反应 多精子受精
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基于Cre-LoxP系统的新型慢病毒表达载体pLOX-CMV-E/P的构建与鉴定
6
作者 高文勇 夏景波 +4 位作者 陈卓莹 吴彩红 王健欢 龙颖妍 齐绪峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期160-167,共8页
目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ire... 目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ires TK慢病毒载体为模板,用Spe I与Kpn I进行双酶切,去除TERT-ires TK片段,然后与人工设计合成的多克隆位点片段连接,构建p LOX-MCS表达载体.同时,以p B513载体为模板扩增EF1α-EGFP-Puro表达框(带有Bam HI及Kpn I酶切位点),然后与经过Bam HI及Kpn I双酶切的p LOX-MCS载体连接,进而构建p LOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro(简称p LOX-CMV-E/P)载体.将p LOX-CMV-E/P载体与慢病毒包装载体p CMVR8.74及p MD2.G共转染293T细胞,包装病毒进行报告基因的功能分析.结果:菌落聚合酶链式反应(PCR)、酶切鉴定及测序结果均与预期结果一致,绿色荧光蛋白及抗药性基因均有较好的活性与功能.结论:成功构建了p LOX-MCS及p LOX-CMV-E/P慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒表达系统. 展开更多
关键词 慢病毒表达载体 CRE-LOXP 系统 绿色荧光蛋白基因 嘌呤霉素抗性基因
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人ZP3的N端肽的体外表达
7
作者 曹佐武 徐放 +2 位作者 谢琪璇 乜春城 姚冠颖 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期583-587,共5页
目的：为了深入研究透明带的功能，体外表达人ZP3的N 端肽段。方法：通过PCR克隆人ZP3的第77～703的DNA序列，利用该片段构建hZP3的N端肽的原核表达载体，转化大肠杆菌Rosetta （DE3）进行体外表达，利用分离的表达产物免疫小鼠，通过EL... 目的：为了深入研究透明带的功能，体外表达人ZP3的N 端肽段。方法：通过PCR克隆人ZP3的第77～703的DNA序列，利用该片段构建hZP3的N端肽的原核表达载体，转化大肠杆菌Rosetta （DE3）进行体外表达，利用分离的表达产物免疫小鼠，通过ELISA检测抗体反应，利用Western blotting和免疫组化检测抗血清与重组透明带蛋白和人卵巢天然的透明带蛋白的特异反应。结果：Western blotting结果显示，获得了约27 ku的重组蛋白，用该蛋白免疫小鼠获得了抗体滴度近20000的抗血清，该抗体能与重组透明带蛋白和人卵巢天然的透明带蛋白的特异反应。结论：成功表达人ZP3的N端重组肽，表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 透明带 抗原性 体外表达 免疫组化
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4种酶质量浓度对小鼠睾丸间质细胞分离效果的比较
8
作者 黄瑞 朱伟杰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期397-401,共5页
目的:比较4种酶质量浓度对原代小鼠睾丸间质细胞的分离效果.方法:将20只成年雄性昆明小鼠睾丸平均分成A、B、C、D 4组,分别用0.05%、0.125%、0.25%胰酶和0.02%胶原酶Ⅱ消化分离睾丸间质细胞,比较4种酶质量浓度分离的间质细胞数量和存活... 目的:比较4种酶质量浓度对原代小鼠睾丸间质细胞的分离效果.方法:将20只成年雄性昆明小鼠睾丸平均分成A、B、C、D 4组,分别用0.05%、0.125%、0.25%胰酶和0.02%胶原酶Ⅱ消化分离睾丸间质细胞,比较4种酶质量浓度分离的间质细胞数量和存活率;分别用苏木素-伊红染色、苏丹Ⅲ染色观察间质细胞及其脂滴形态.结果:A组和B组分离的间质细胞数多于C组和D组(P<0.05).4种酶质量浓度所分离的间质细胞存活率均在90%以上,差异无统计学意义(P>0.05).低浓度胰酶(0.05%和0.125%)所分离的间质细胞生长状态良好,细胞内脂滴小而丰富,长时间体外培养后胞质空泡化,脂滴发生融合.结论:低质量浓度胰酶对原代间质细胞分离效果好. 展开更多
关键词 间质细胞 胰酶 胶原酶Ⅱ 脂滴 小鼠
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慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力 被引量：3
9
作者 廉滋珍 曹佐武 +6 位作者 陈冉 陈雷 薛樱子 秦俊文 齐绪峰 张春雪 禹艳红 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1359-1364,共6页
目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表... 目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。 展开更多
关键词 RNA干扰 附睾特异表达蛋白 meClps 慢病毒 精子运动
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Ionomycin诱导小鼠精子顶体反应的初步研究
10
作者 姚冠颖 曹佐武 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期261-265,共5页
目的:探讨Ionomycin诱导精子顶体反应的效果.方法:收集小鼠附睾尾精子,体外获能后用不同终浓度的Ionomycin处理相同时间,以及用相同浓度的Ionomycin处理不同时间.FITC-PNA染色观察并统计精子顶体反应率.结果:用终浓度为1、5、10、50μmo... 目的:探讨Ionomycin诱导精子顶体反应的效果.方法:收集小鼠附睾尾精子,体外获能后用不同终浓度的Ionomycin处理相同时间,以及用相同浓度的Ionomycin处理不同时间.FITC-PNA染色观察并统计精子顶体反应率.结果:用终浓度为1、5、10、50μmol/L Ionomycin处理1 h的精子AR率分别为31.6%、52.2%、57.4%和64.0%.用终浓度为5μmol/L的Ionomycin处理10、30、45、60、120、180 min的精子AR率分别为17.2%、25.0%、41.2%、52.2%、54.0%和55.0%.结论:Ionomycin可以诱导小鼠精子的顶体反应,且顶体反应率随着浓度和诱导时间的变化而变化. 展开更多
关键词 小鼠 顶体反应 精子
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