双硫仑通过阻断RIPK1/RIPK3/MLKL通路抑制肾足细胞和巨噬细胞发生坏死性凋亡

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作者 王淑军 梁琪琦 +1 位作者 陈思远 查庆兵 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期1665-1672,共8页

目的:探索双硫仑对肾足细胞及巨噬细胞发生坏死性凋亡的影响及潜在机制。方法:体外培养小鼠肾足细胞MPC-5和巨噬细胞J774A.1、BMDM,利用TNF-α+LCL-161+IDN-6556(TSI)诱导坏死性凋亡。碘化丙啶染色检测细胞坏死水平,采用免疫印迹法检测... 目的:探索双硫仑对肾足细胞及巨噬细胞发生坏死性凋亡的影响及潜在机制。方法:体外培养小鼠肾足细胞MPC-5和巨噬细胞J774A.1、BMDM,利用TNF-α+LCL-161+IDN-6556(TSI)诱导坏死性凋亡。碘化丙啶染色检测细胞坏死水平,采用免疫印迹法检测坏死性凋亡标志物MLKL、RIPK3和RIPK1的蛋白水平,免疫荧光法检测TSI诱导的MPC-5中RIPK3、p-MLKL的亚细胞分布情况。结果:TSI处理可诱导MPC-5肾足细胞和巨噬细胞发生明显的坏死性凋亡,双硫仑能剂量依赖性地抑制TSI诱导的坏死性凋亡。双硫仑可明显抑制TSI诱导的RIPK1、RIPK3、MLKL的磷酸化,并抑制RIPK3和p-MLKL的聚集。结论:双硫仑通过抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路抑制TSI诱导的肾足细胞及巨噬细胞发生坏死性凋亡。 展开更多

关键词 坏死性凋亡 肾足细胞 巨噬细胞 MPC-5 双硫仑

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脱细胞的细胞外基质材料植入小鼠腹腔不影响小鼠固有免疫应答

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作者 徐斌 黄秀艳 +1 位作者 韦晓慧 曾耀英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期721-725,共5页

目的研究脱细胞的细胞外基质(ECM)材料植入小鼠后对其固有免疫(包括巨噬细胞和中性粒细胞)的影响,初步建立一套以小鼠为实验动物的动物源材料免疫原性去除效果的测试评价方法。方法将新鲜膜材料和新工艺制备的脱细胞和除DNA的ECM材料移... 目的研究脱细胞的细胞外基质(ECM)材料植入小鼠后对其固有免疫(包括巨噬细胞和中性粒细胞)的影响,初步建立一套以小鼠为实验动物的动物源材料免疫原性去除效果的测试评价方法。方法将新鲜膜材料和新工艺制备的脱细胞和除DNA的ECM材料移植到小鼠腹腔中,7 d后,检测脾脏指数的变化,采用BD绝对计数管检测小鼠外周血中性粒细胞和腹腔液巨噬细胞的绝对数量,采用小鼠Th1、Th2、Th17细胞因子流式微球分析技术检测小鼠血浆和腹腔液白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-17A和IL-10分泌。结果使用新鲜膜材料的小鼠体质量不增加、但脾脏指数增加,小鼠外周血中性粒细胞和腹腔液巨噬细胞的数量明显增加,IL-6和IFN-γ的分泌水平增加。而使用脱细胞的ECM材料小鼠以上参数仅有微弱的影响或无影响。结论脱细胞、除DNA的ECM材料对小鼠的固有免疫应答无明显影响。 展开更多

关键词 细胞外基质 生物材料 固有免疫 巨噬细胞 中性粒细胞 炎症

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胡椒碱与棉酚联用对前列腺癌DU145细胞生长抑制的协同作用 被引量：5

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作者 曾龙辉 徐丽慧 +3 位作者 何贤辉 欧阳东云 张延亭 任帅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1101-1105,共5页

目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉... 目的研究胡椒碱与棉酚联合用药对激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制。方法 MTS比色法检测细胞活性;流式细胞术分析细胞周期;免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白以及CYP3A4的表达。结果胡椒碱本身的细胞毒性较小,但与棉酚联用时,表现出协同作用。棉酚对细胞的半数抑制浓度IC50由单用时的21.00μmol·L-1下降到联合用药时的8.07μmol·L-1;两药相互作用指数CDI<1。胡椒碱与棉酚联合用药,可引起细胞G0/G1期阻滞和亚二倍体峰(凋亡峰)增加;同时上调细胞周期抑制蛋白p21Cip1的表达,并下调Cyclin D1、Cyclin A、CyclinB1以及药物代谢酶CYP3A4的表达。结论胡椒碱与棉酚联用,可能是通过诱导细胞周期阻滞,增强凋亡以及抑制CYP3A4药物代谢酶活性,发挥其协同抗前列腺癌作用。 展开更多

关键词 胡椒碱 棉酚 前列腺癌细胞DU145 协同作用 细胞周期 CYP3A4

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雪胆素乙通过破坏微丝结构和促进p21Cip1表达抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖 被引量：9

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作者 任帅 徐丽慧 +2 位作者 曾龙辉 欧阳东云 何贤辉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期835-841,共7页

目的分析雪胆素乙(CuⅡb)对人前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其作用机制。方法 MTS法检测CuⅡb 0.064～200μmol·L-1作用48 h后PC-3细胞增殖;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用24 h,相差显微镜观察细胞形态;CuⅡb 2和20μ... 目的分析雪胆素乙(CuⅡb)对人前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其作用机制。方法 MTS法检测CuⅡb 0.064～200μmol·L-1作用48 h后PC-3细胞增殖;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用24 h,相差显微镜观察细胞形态;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用48 h,流式细胞术分析细胞周期分布;免疫荧光染色分析CuⅡb 20μmol·L-1分别作用1,4和24 h后微丝和微管细胞骨架变化;免疫印迹法测定CuⅡb20μmol·L-1分别作用1,4和24 h后G肌动蛋白、F肌动蛋白、p21Cip1及细胞周期蛋白A,B1,E和D1的表达。结果 CuⅡb以浓度依赖方式抑制PC-3细胞的增殖(r=0.9817,P<0.05)。CuⅡb 20μmol·L-1作用48 h,使细胞周期阻滞于G2/M期,从溶剂对照组的(27.7±1.5)%上升为(45.3±1.8)%(P<0.01),相差显微镜见细胞发生明显收缩。CuⅡb 20μmol·L-1作用24 h,使G肌动蛋白水平显著下降,F肌动蛋白发生严重聚集(P<0.05),而对微管只有轻微影响。与溶剂对照组相比,CuⅡb 20μmol·L-1作用24 h后,细胞p21Cip1表达明显升高,细胞周期蛋白A表达显著下调,其他细胞周期蛋白表达上调(P<0.05)。结论 CuⅡb能明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能是通过诱导肌动蛋白聚集,破坏微丝骨架,促进抑癌因子p21Cip1表达,阻滞细胞周期的进程。 展开更多

关键词 雪胆素乙 前列腺癌细胞 肌动蛋白聚集 细胞周期阻滞

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葫芦素E对人外周血单个核细胞体外活化及细胞因子表达的影响 被引量：1

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作者 王力先 张晓钰 +3 位作者 潘浩 徐丽慧 欧阳东云 何贤辉 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期368-373,共6页

目的:分析葫芦素E(Cuc E)对二丁酸佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激的人外周血单个核细胞(PBMC)活化及促炎因子表达的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制.方法:利用流式细胞术分析人外周血PBMC活化抗原CD69和CD25表达,用流式微球陈... 目的:分析葫芦素E(Cuc E)对二丁酸佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激的人外周血单个核细胞(PBMC)活化及促炎因子表达的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制.方法:利用流式细胞术分析人外周血PBMC活化抗原CD69和CD25表达,用流式微球陈列检测白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)表达的变化.结果:Cuc E能明显抑制PDB和Ion刺激引起的CD3+T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达;同时,Cuc E以剂量依赖方式抑制PDB和Ion诱导的IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达.结论:Cuc E对人外周血CD3+T细胞的活化具有明显抑制作用,同时减少炎症相关细胞因子的表达,提示其通过对适应性免疫的调控发挥抗炎效应. 展开更多

关键词 葫芦素E 人外周血单个核细胞 CD69 CD25 细胞因子

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雪胆素乙诱导刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞凋亡及其机制的研究 被引量：1

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作者 胡波 施资坚 +3 位作者 王遥 刘坤鹏 潘浩 尹良红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期509-513,共5页

目的:分析雪胆素乙(CuIIb)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴细胞体外凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以Annexin V染色结合流式细胞术分析小鼠淋巴细胞凋亡情况;利用JC-1染色分析淋巴细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测凋... 目的:分析雪胆素乙(CuIIb)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴细胞体外凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以Annexin V染色结合流式细胞术分析小鼠淋巴细胞凋亡情况;利用JC-1染色分析淋巴细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测凋亡相关蛋白变化。结果:CuIIb处理后,早期和中期凋亡细胞比例明显增加,淋巴细胞线粒体膜电位降低。同时,CuIIb以剂量依赖方式激活caspase-3凋亡通路并明显降低抗凋亡蛋白survivin的表达。结论:CuIIb诱导淋巴细胞凋亡,其机制可能与其降低线粒体膜电位、激活caspase-3凋亡通路有关。 展开更多

关键词 雪胆素乙 淋巴细胞 刀豆蛋白A

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组蛋白去乙酰化酶6介导血清饥饿条件下LC3B-Ⅱ的去乙酰化作用

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作者 刘坤鹏 王遥 +3 位作者 徐丽慧 潘浩 欧阳东云 何贤辉 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期517-521,共5页

自噬是哺乳动物细胞内控制错误折叠蛋白和受损细胞器降解的重要机制,营养、氨基酸以及细胞因子的缺乏均能诱导自噬.在自噬的信号通路中,一些自噬蛋白已被证明受到乙酰化修饰的调控,进而影响其催化活性的发挥.但是没有研究证明微管结合蛋... 自噬是哺乳动物细胞内控制错误折叠蛋白和受损细胞器降解的重要机制,营养、氨基酸以及细胞因子的缺乏均能诱导自噬.在自噬的信号通路中,一些自噬蛋白已被证明受到乙酰化修饰的调控,进而影响其催化活性的发挥.但是没有研究证明微管结合蛋白1轻链3(LC3)是否受到乙酰化调控.该研究证明了在血清饥饿诱导的自噬过程中,LC3B-Ⅱ的乙酰化程度大幅降低.HDAC6特异性抑制剂tubacin处理细胞后,LC3B-Ⅱ的乙酰化修饰程度随之升高.同时,血清饥饿条件下,抑制HDAC6的催化活性降低了自噬通路的降解能力.该研究结果表明在血清饥饿诱导的自噬过程中,LC3B-Ⅱ发生去乙酰化,其去乙酰化调控蛋白可能是HDAC6,抑制HDAC6的催化活性会减少自噬途径蛋白的降解.HDAC6介导的LC3乙酰化修饰为自噬降解和自噬蛋白调控的研究提供了新思路. 展开更多

关键词 细胞自噬 LC3B—II 去乙酰化作用

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二甲双胍增强LPS激活的腹腔巨噬细胞在ATP刺激下的炎症小体活化 被引量：9

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作者 魏红霞 李陈广 +4 位作者 梁译丹 徐丽慧 潘浩 何贤辉 欧阳东云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期474-479,共6页

目的以脂多糖(LPS)激活的腹腔巨噬细胞为炎症细胞模型,探讨糖尿病常用药物二甲双胍对胞外ATP诱导炎症小体活化并释放白细胞介素-1β(IL^(-1)β)的影响。方法C57BL/6小鼠腹腔注射30 g·L^(-1)巯基乙酸盐(thioglycollate,TG)诱导腹腔... 目的以脂多糖(LPS)激活的腹腔巨噬细胞为炎症细胞模型,探讨糖尿病常用药物二甲双胍对胞外ATP诱导炎症小体活化并释放白细胞介素-1β(IL^(-1)β)的影响。方法C57BL/6小鼠腹腔注射30 g·L^(-1)巯基乙酸盐(thioglycollate,TG)诱导腹腔巨噬细胞大量产生;利用LPS+ATP处理激活炎症小体,采用碘化丙锭(PI)染色法检测二甲双胍对LPS+ATP诱导的腹腔巨噬细胞焦亡的影响,免疫印迹法检测该细胞胞内及上清中IL^(-1)β和caspase-1的表达水平;免疫荧光技术检测巨噬细胞P_2X_7嘌呤能ATP受体7(P_2X_7R)的亚细胞分布及荧光强度。结果单独二甲双胍不会导致LPS激活细胞发生焦亡,但二甲双胍呈剂量依赖性促进LPS+ATP诱导的细胞焦亡;免疫印迹法显示,在蛋白水平上,单独LPS(或LPS+二甲双胍)刺激不能诱导细胞释放成熟IL^(-1)β(17 ku)到细胞外;当加入ATP刺激后,成熟IL^(-1)β和活化caspase-1(10 ku)释放到胞外;而二甲双胍可以剂量依赖性地促进LPS激活、ATP刺激下腹腔巨噬细胞释放成熟IL^(-1)β和活化caspase-1的水平。结论二甲双胍增强LPS激活的腹腔巨噬细胞在ATP刺激下的炎症小体活化,提高caspase-1活化和成熟IL^(-1)β释放,促进炎症反应。 展开更多

关键词 二甲双胍 细胞焦亡 腹腔巨噬细胞 白细胞介素-1Β 半胱氨酸天冬氨酸酶-1 炎症小体

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葫芦素E抑制HeLa细胞mTORC1的活性并诱导细胞自噬 被引量：3

9

作者 张晓钰 徐丽慧 +4 位作者 赵高翔 潘浩 周单 欧阳东云 何贤辉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期807-811,共5页

目的研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响,免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素E对HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用,其24 h的IC5... 目的研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响,免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素E对HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用,其24 h的IC50为4.01μmol·L-1。通过对mTORC1底物磷酸化水平的检测发现,葫芦素E对p70S6K的磷酸化(活化)作用有明显的剂量和时间依赖性抑制作用。同时,葫芦素E增加自噬小体标志物LC3-Ⅱ的表达,氯喹能进一步提高其水平;葫芦素E还能降低p62/SQSTM1的水平,表明诱导了完整的细胞自噬过程。细胞自噬的诱导与mTORC1下游底物ULK1S757磷酸化水平的下降有正相关性。结论葫芦素E可能通过抑制mTORC1活性而诱导细胞发生自噬作用。 展开更多

关键词 葫芦素E mTORC1 LC3-Ⅱ P70S6K HELA细胞 细胞自噬

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氯化钴对人的eNOS基因启动子SP1改构体转录活性的影响 被引量：3

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作者 杨云华 樊振华 邢飞跃 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期124-129,共6页

目的:构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子,利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性的变化.方法:用不同剂量的氯化钴体外处理细胞复制缺氧模型,PCR点突变技术构建突变启动子pGL2-eNOS-... 目的:构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子,利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞-12缺氧模型研究其基因启动子活性的变化.方法:用不同剂量的氯化钴体外处理细胞复制缺氧模型,PCR点突变技术构建突变启动子pGL2-eNOS-insSP1,分别将pGL2-eNOS-insSP1和pGL2-eNOS-p载体导入HUVEC-12细胞,双荧光素酶报告基因技术用于检测启动子转录活性的变化.结果:DNA测序显示人的eNOS基因启动子SP1改构体的序列正确;改构体eNOS启动子活性在一定范围内随氯化钴刺激剂量的增加而升高.结论:SP1插入改造的方法显著提高了eNOS基因启动子的转录活性. 展开更多

关键词 HUVEC-12 细胞 氯化钴 一氧化氮合成酶 SP1

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胡椒碱对脂多糖和金黄色葡萄球菌抑制人结肠腺癌细胞系表达防御素的拮抗作用

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作者 侯小凤 潘浩 +2 位作者 徐丽慧 何贤辉 欧阳东云 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期102-107,共6页

目的:研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)和灭活金黄色葡萄球菌(SAC)菌体抑制人结肠腺癌HT-29和Caco-2细胞表达防御素(Defensin)的影响.方法:WST-1法检测PIP对HT-29和Caco-2细胞增殖的作用;定量PCR(qRT-PCR)检测人α防御素DEFA5(HD5... 目的:研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)和灭活金黄色葡萄球菌(SAC)菌体抑制人结肠腺癌HT-29和Caco-2细胞表达防御素(Defensin)的影响.方法:WST-1法检测PIP对HT-29和Caco-2细胞增殖的作用;定量PCR(qRT-PCR)检测人α防御素DEFA5(HD5)和DEFA6(HD6),人β防御素HBD-1以及胰岛再生源蛋白(Reg)Reg IIIγ等mRNA的表达水平.结果:PIP处理可剂量依赖性地抑制HT-29和Caco-2细胞的增殖,半数抑制浓度IC50分别为328.5μmol/L和155.1μmol/L,表明PIP对细胞的毒性较小;定量PCR检测显示,PIP处理对LPS或SAC下调HT-29和Caco-2细胞DEFA5和DEFA6 mRNA表达水平具有显著的拮抗作用,对DEFB1和Reg IIIγmRNA的表达没有明显影响.结论:胡椒碱可能通过拮抗病原体诱导细胞表达防御素的抑制作用,进而发挥其抗肠炎作用. 展开更多

关键词 胡椒碱 HT-29 细胞 CACO-2 细胞 LPS SAC 人防御素 抗菌肽

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灯盏花乙素对J774A.1巨噬细胞中ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响 被引量：31

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作者 景艳芸 李陈广 +4 位作者 颜亮 徐丽慧 白文静 欧阳东云 何贤辉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期174-180,共7页

目的以LPS致敏的小鼠巨噬细胞J774A.1作为炎症细胞模型,研究灯盏花乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法利用碘化丙锭(PI)染色法检测LPS+ATP诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞发生细胞焦亡的情况;免疫印迹法检测细胞裂... 目的以LPS致敏的小鼠巨噬细胞J774A.1作为炎症细胞模型,研究灯盏花乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法利用碘化丙锭(PI)染色法检测LPS+ATP诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞发生细胞焦亡的情况;免疫印迹法检测细胞裂解液和上清中IL-1β、caspase-1、HMGB1等蛋白的表达水平;基于微珠的免疫测定法(CBA)检测细胞上清中IL-1β的分泌水平。结果 ATP能够明显诱导LPS致敏的J774A.1巨噬细胞中caspase-1活化、成熟IL-1β(17 ku)和HMGB1释放至培养上清中,并诱导细胞焦亡;而灯盏花乙素预处理能够剂量依赖性地抑制ATP诱导的caspase-1活化以及成熟IL-1β、HMGB1的释放,并抑制细胞焦亡;同时,经腺苷酸环化酶抑制剂MDL12330A和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理,可以逆转灯盏花乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用。结论灯盏花乙素通过调节PKA活性,抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡,从而发挥抗炎作用。 展开更多

关键词 灯盏花乙素 细胞焦亡 巨噬细胞 NLRP3炎症小体 蛋白激酶A ATP

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