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HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β/Fc蛋白的条件优化
被引量：
3
1
作者
洪坡
袁凤媚
+3 位作者
黄嘉慧
刘东晨
张途
谢秋玲
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期96-101,共6页
为优化HEK293F细胞瞬时转染条件,提高PDGFR-β的蛋白表达量,采用聚乙烯亚胺(Polyetherimide,PEI)为转染试剂,将质粒p XLG-PDGFR-β/Fc与PEI混匀聚合后加入到细胞悬液,37℃,φ=6%CO2,180 r/min悬浮振荡培养,培养7 d后收集样品,ELISA检测P...
为优化HEK293F细胞瞬时转染条件,提高PDGFR-β的蛋白表达量,采用聚乙烯亚胺(Polyetherimide,PEI)为转染试剂,将质粒p XLG-PDGFR-β/Fc与PEI混匀聚合后加入到细胞悬液,37℃,φ=6%CO2,180 r/min悬浮振荡培养,培养7 d后收集样品,ELISA检测PDGFR-β蛋白的浓度。对细胞密度、DNA浓度和m(DNA):m(PEI)、聚合时间以及添加物(丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨)进行优化。结果显示,HEK293F细胞瞬时转染的最佳条件为:细胞密度4×106cells/m L、DNA浓度2.0μg/106cells、m(DNA):m(PEI)为1:2、聚合时间5 min。同时,48 h内添加3 mmol/L丙戊酸钠,第3天补加葡萄糖和1 g/L的蛋白胨TN1可使PDGFR-β/Fc的蛋白表达量明显提高。实验表明,经过对HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β的转染条件的优化,蛋白表达量可达55 mg/L,为更大规模瞬时转染生产PDGFR-β/Fc蛋白奠定了基础。
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关键词
PDGFR-β/Fc
HEK293F细胞
瞬时表达
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职称材料
题名
HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β/Fc蛋白的条件优化
被引量：
3
1
作者
洪坡
袁凤媚
黄嘉慧
刘东晨
张途
谢秋玲
机构
暨南大学生命科学技术学院∥广东省生物工程药物重点实验室∥基因工程药物国家工程研究中心
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期96-101,共6页
基金
广东省战略性新兴产业核心技术攻关资助项目(2012A080800008)
广东省重大科技专项资助项目(2012A080202014)
文摘
为优化HEK293F细胞瞬时转染条件,提高PDGFR-β的蛋白表达量,采用聚乙烯亚胺(Polyetherimide,PEI)为转染试剂,将质粒p XLG-PDGFR-β/Fc与PEI混匀聚合后加入到细胞悬液,37℃,φ=6%CO2,180 r/min悬浮振荡培养,培养7 d后收集样品,ELISA检测PDGFR-β蛋白的浓度。对细胞密度、DNA浓度和m(DNA):m(PEI)、聚合时间以及添加物(丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨)进行优化。结果显示,HEK293F细胞瞬时转染的最佳条件为:细胞密度4×106cells/m L、DNA浓度2.0μg/106cells、m(DNA):m(PEI)为1:2、聚合时间5 min。同时,48 h内添加3 mmol/L丙戊酸钠,第3天补加葡萄糖和1 g/L的蛋白胨TN1可使PDGFR-β/Fc的蛋白表达量明显提高。实验表明,经过对HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β的转染条件的优化,蛋白表达量可达55 mg/L,为更大规模瞬时转染生产PDGFR-β/Fc蛋白奠定了基础。
关键词
PDGFR-β/Fc
HEK293F细胞
瞬时表达
Keywords
PDGFR-β/Fc
HEK293F cells
transient gene expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
HEK293F细胞瞬时表达PDGFR-β/Fc蛋白的条件优化
洪坡
袁凤媚
黄嘉慧
刘东晨
张途
谢秋玲
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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