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改进型外部引导序列抑制人巨细胞病毒UL49基因的表达(英文) 被引量：1: 1; 作者周琪曾志锋 +6 位作者李弘剑李月琴崔延伟杨丹邹奕杨光周天鸿《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期522-527,共6页; 外部引导序列(EGS)技术(The EGS-based technology)是一种新型的基因沉默技术,能诱导内源性的核酶P(RNase P)对靶mRNA进行有效切割.以人类巨细胞病毒(HCMV)UL49基因mRNA片段为靶序列,基于前人实验基础上设计出更为精简与高效的改进型EGS... 展开更多; 关键词外部引导序列(EGS) 核酶P 人巨细胞病毒基因沉默; 在线阅读下载PDF 职称材料

人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰被引量：1: 2; 作者郑青苏志坚 +6 位作者吴晓萍许华黄志锋赵文姚成灿黄亚东李校堃《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期88-91,98,共5页; 采用聚合酶链式反应 (PCR)法将人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)基因中编码第 98位和第 132位半胱氨酸 (Cys)的密码子突变为编码丝氨酸 (Ser)的密码子 ,构建重组质粒pET3c haFGFSer98,132 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,表达率达到 2 3 4 8... 展开更多; 关键词人酸性成纤维细胞生长因子定点突变突变体; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组aFGF乳酸菌的构建、表达及其对小鼠溃疡性结肠炎的药效研究被引量：1: 3; 作者仝雷张齐好 +3 位作者邱壮伟苏志坚陈红霞黄亚东《湖北农业科学》北大核心 2011年第12期2508-2512,共5页; 采用分子克隆技术构建携带人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factors,aFGF)基因序列的乳酸菌重组表达载体pGMN4,转化并筛选出高效表达aFGF的重组菌株,制成活菌制剂。口服5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7d诱导小鼠溃疡性结肠... 展开更多; 关键词乳酸菌人酸性成纤维细胞生长因子溃疡性结肠炎; 在线阅读下载PDF 职称材料

氨基酸定点突变碱性成纤维生长因子的稳定性: 4; 作者谢秋玲张玲洪岸《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期72-75,126,共5页; 为了提高碱性成纤维生长因子的体外稳定性,分析比较了野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)和半胱氨酸(Cys)定点突变型hbFGF的生物活性、肝素结合能力、体外聚合程度和聚合成分,以及两种蛋白单体的表面静电分布和溶剂可及表面面积.结... 展开更多; 关键词碱性成纤维细胞生长因子稳定性氨基酸定点突变静电作用疏水相互作用; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人角质细胞生长因子在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定: 5; 作者冯成利项琪 +4 位作者张齐好杨艳柯实黄亚东苏志坚《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1526-1531,共6页; 目的:利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人角质细胞生长因子(human keratinocyte growth factor,hKGF),为实现规模化生产重组hKGF奠定基础。方法:根据已报道的hKGF成熟肽序列,人工合成由毕赤酵母偏好密码子组成的编码hKGF的... 展开更多; 关键词人角质细胞生长因子毕赤酵母; 在线阅读下载PDF 职称材料

抗Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定: 6; 作者袁丰瑞张敏静 +3 位作者仝雷苏志坚项琪黄亚东《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期266-271,共6页; 利用小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合表达系统,在大肠杆菌Origami B(DE3)中表达人β防御素Ⅱ(humanβdefensin 2,HBD2)与抗人表皮生长因子受体2(Her-2)单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白。经20℃,l mmol/L I... 展开更多; 关键词人β防御素Ⅱ 人表皮生长因子受体2 融合蛋白靶向作用; 在线阅读下载PDF 职称材料

人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立: 7; 作者王欢歌肖雪 +4 位作者胡浩苏志坚项琪张齐好黄亚东《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期355-360,共6页; 建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法,为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测方法。将L6细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测普兰林肽对高糖培养环境下骨骼肌... 展开更多; 关键词普兰林肽人胰淀素类似物 L6细胞活性测定; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名改进型外部引导序列抑制人巨细胞病毒UL49基因的表达(英文) 被引量：1: 1; 作者周琪曾志锋李弘剑李月琴崔延伟杨丹邹奕杨光周天鸿; 机构暨南大学广东省生物工程药物重点实验室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期522-527,共6页; 基金 Supported by National Natural Science Foundation of China (No.90608024 and 303707762) Key Science and Technology Project of Guangzhou (No.2006J1-C0111) +2 种基金 China Postdoctoral Science Foundation Funded Project (No.20080430845)~~; 文摘外部引导序列(EGS)技术(The EGS-based technology)是一种新型的基因沉默技术,能诱导内源性的核酶P(RNase P)对靶mRNA进行有效切割.以人类巨细胞病毒(HCMV)UL49基因mRNA片段为靶序列,基于前人实验基础上设计出更为精简与高效的改进型EGS(miniEGS),DNA片段长度仅为12bp.构建稳定表达HCMVUL49的细胞系,通过应用荧光定量PCR及Western印迹分别鉴定miniEGS对内源性UL49的抑制效率.结果显示,miniEGS能在HeLa细胞中能达到很高的转染效率(97.9%),并且在转染稳定表达UL49的HeLa细胞系后,发现UL49基因的mRNA与蛋白表达水平都出现明显下降(50%).研究表明,改进型的EGS序列不仅能有效抑制目的基因的表达,同时因其序列设计的精简性与高效性,可更好地应用到以后的抗病毒研究中.; 关键词外部引导序列(EGS) 核酶P 人巨细胞病毒基因沉默; Keywords external guide sequence （EGS） RNase P human cytomegalovirus gene silence; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰被引量：1: 2; 作者郑青苏志坚吴晓萍许华黄志锋赵文姚成灿黄亚东李校堃; 机构暨南大学医药生物技术研究开发中心暨南大学广东省生物工程药物重点实验室; 出处《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期88-91,98,共5页; 基金广东省自然科学基金资助项目 (0 10 4 2 4 ) 86 3计划资助项目 (2 0 0 2AA2Z3318); 文摘采用聚合酶链式反应 (PCR)法将人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)基因中编码第 98位和第 132位半胱氨酸 (Cys)的密码子突变为编码丝氨酸 (Ser)的密码子 ,构建重组质粒pET3c haFGFSer98,132 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,表达率达到 2 3 4 8% .用MTT法测定产物的活性 ,发现haFGFSer98,132 突变体的比活与天然haFGF相似 .采用单甲氧基聚乙二醇 (mPEG) 5 0 0 0 -马来酸酰亚胺酯定点修饰第 31位Cys ,修饰率达到 30 %以上 ,修饰产物的比活性保留 5 5 5 3% .; 关键词人酸性成纤维细胞生长因子定点突变突变体; Keywords human acidic fibroblast growth factor site-directed mutation mutant; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组aFGF乳酸菌的构建、表达及其对小鼠溃疡性结肠炎的药效研究被引量：1: 3; 作者仝雷张齐好邱壮伟苏志坚陈红霞黄亚东; 机构暨南大学医药生物技术研究开发中心暨南大学广东省生物工程药物重点实验室; 出处《湖北农业科学》北大核心 2011年第12期2508-2512,共5页; 基金国家教育部新世纪人才计划(NCET-08-0611) 国家重大新药创制项目(009ZX09103-749) 广东省科技重点项目(2009B080701090); 文摘采用分子克隆技术构建携带人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factors,aFGF)基因序列的乳酸菌重组表达载体pGMN4,转化并筛选出高效表达aFGF的重组菌株,制成活菌制剂。口服5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液7d诱导小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC),在造模同时分别给予高、中、低剂量活菌制剂灌胃17d。通过比较小鼠的毛色、体重、便血、结肠长度、病变组织的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性,以及观察结肠组织病理形态学变化,验证重组aFGF乳酸菌对DSS诱导的小鼠UC的预防和治疗效果。实验结果表明,重组aFGF乳酸菌的表达量可达50μg/mL,高剂量重组活菌制剂能够显著改善小鼠的一般情况和溃疡导致的结肠缩短,促进组织修复,保持结肠结构的完整性,并下调MPO的活性。重组aFGF乳酸菌对小鼠UC具有良好的预防和治疗效果,将为UC治疗制剂的开发提供更加广阔的思路。; 关键词乳酸菌人酸性成纤维细胞生长因子溃疡性结肠炎; Keywords Lactococcus lactic human acidic fibroblast growth factor Ulcerative Colitis; 分类号 Q815 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名氨基酸定点突变碱性成纤维生长因子的稳定性: 4; 作者谢秋玲张玲洪岸; 机构暨南大学生物工程研究所暨南大学广东省生物工程药物重点实验室; 出处《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期72-75,126,共5页; 基金国家"十五"重大科技专项项目(2002AA2Z3344); 文摘为了提高碱性成纤维生长因子的体外稳定性,分析比较了野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)和半胱氨酸(Cys)定点突变型hbFGF的生物活性、肝素结合能力、体外聚合程度和聚合成分,以及两种蛋白单体的表面静电分布和溶剂可及表面面积.结果表明,突变型hbFGF保持了野生型hbFGF的生物活性以及肝素结合能力,并显著了降低了体外聚合程度,而单体三维结构中的静电分布和溶剂可及表面面积变化不明显.由此可见,Cys突变影响了hbFGF的共价聚合,而对非共价聚合影响不大.; 关键词碱性成纤维细胞生长因子稳定性氨基酸定点突变静电作用疏水相互作用; Keywords basic fibroblast growth factor stability amino acid site-directed mutation electrostatic interaction hydrophobic interaction; 分类号 Q518.4 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人角质细胞生长因子在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定: 5; 作者冯成利项琪张齐好杨艳柯实黄亚东苏志坚; 机构陕西省动物研究所暨南大学基因工程药物国家工程研究中心暨南大学广东省生物工程药物重点实验室; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1526-1531,共6页; 基金陕西省重大科技专项(No.2010ZDKG-54) 陕西省科学院科技专项(No.2009K-02) +1 种基金 No.2010Y-C171); 文摘目的:利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人角质细胞生长因子(human keratinocyte growth factor,hKGF),为实现规模化生产重组hKGF奠定基础。方法:根据已报道的hKGF成熟肽序列,人工合成由毕赤酵母偏好密码子组成的编码hKGF的DNA片段后连接到分泌型表达质粒pPICZαA中,获得重组表达质粒并转化毕赤酵母X-33中进行表达。优化发酵条件,并利用5 L生物反应器进行中试发酵。发酵上清通过超滤及层析方法分离纯化重组蛋白,并利用MMT法检测其对恒河猴肺上皮细胞的促增殖活性。结果:在20℃,甲醇诱导60 h后,获得分子量约为28 kD的目的蛋白,表达量约占菌体上清总蛋白的14.1%。发酵液经肝素亲和层析和Sephardex G-25分子筛分离获得纯度为95.0%以上的重组蛋白,得率为12 mg/L。该重组hKGF具有糖基化修饰,能显著促进恒河猴肺上皮细胞增殖,其ED50约为57μg/L。结论:利用毕赤酵母成功表达出糖基化修饰及具促恒河猴肺上皮细胞增殖活性的重组hKGF。; 关键词人角质细胞生长因子毕赤酵母; Keywords Human keratinocyte growth factor Pichia pastoris; 分类号 R331 [医药卫生—人体生理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名抗Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定: 6; 作者袁丰瑞张敏静仝雷苏志坚项琪黄亚东; 机构暨南大学医药生物技术研究开发中心暨南大学广东省生物工程药物重点实验室暨南大学基因工程药物国家工程研究中心; 出处《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期266-271,共6页; 基金广东省中国科学院全面战略合作项目(No.2010B090301016) 广东省教育厅产学研重大项目(No.cgzhzd0710) 温州市科技支撑计划资助项目(No.Y20090279)~~; 文摘利用小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合表达系统,在大肠杆菌Origami B(DE3)中表达人β防御素Ⅱ(humanβdefensin 2,HBD2)与抗人表皮生长因子受体2(Her-2)单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白。经20℃,l mmol/L IPTG诱导24 h后,获得相对分子质量约为41 kD的SUMO-HBD2-4D5融合蛋白,为可溶性表达,表达量占菌体上清总蛋白的42.2%。利用组氨酸亲和凝胶色谱(Ni-NTAsepharose)、特异性SUMO蛋白酶(SUMO protease)酶切和分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白HBD2-4D5,其最终得率达到15 mg/L。HBD2-4D5 200μg对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和大肠杆菌K12D31具有较明显的杀伤作用。免疫荧光分析结果显示,HBD2-4D5蛋白能结合于Her-2高表达的人乳腺癌细胞SK-BR-3表面。本实验表达的HBD2-4D5双功能蛋白具有较好的抗菌活性和特异性结合SK-BR-3表面Her-2的能力,为日后用于靶向治疗Her-2高表达的肿瘤疾病提供研究基础。; 关键词人β防御素Ⅱ 人表皮生长因子受体2 融合蛋白靶向作用; Keywords HBD2 Her-2 fusion protein target effects; 分类号 Q784 [生物学—分子生物学] R966 [医药卫生—药理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立: 7; 作者王欢歌肖雪胡浩苏志坚项琪张齐好黄亚东; 机构暨南大学生物医药研究院暨南大学基因工程药物国家工程研究中心暨南大学广东省生物工程药物重点实验室; 出处《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期355-360,共6页; 基金国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目(No.2011ZX09401-307) 广东省教育部产学研结合项目资助(No.2009B090300091) 中小企业科技创新引导资金计划项目(No.2010Q-P012)~~; 文摘建立体外人胰淀素类似物普兰林肽活性测定的方法,为普兰林肽及其制剂的质量控制提供可靠的细胞检测方法。将L6细胞培养并分化成有明显肌管的成熟骨骼肌细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测普兰林肽对高糖培养环境下骨骼肌细胞葡萄糖吸收的影响。结果显示,在1×10-9～1×10-5mol/L的浓度范围内,普兰林肽能显著增加分化后的L6细胞的糖吸收量,在16 h达到最大值。普兰林肽浓度的负对数(x)与细胞糖吸收增加量(y)间呈现出良好的线性关系(y=-4.750x+59.54,R2=0.991 9)。应用本实验建立的方法检测了市售普兰林肽醋酸盐注射剂的活性,结果显示1×10-6、1×10-7和1×10-8mol/L的普兰林肽注射剂作用于分化的L6细胞16 h,细胞的糖吸收增加率为(61.89±9.54)%,(43.68±10.06)%和(33.30±13.03)%(P<0.01);与单用胰岛素组对比,普兰林肽与胰岛素联合使用能显著提高分化后的L6细胞的糖吸收量(P<0.05),与普兰林肽注射剂的临床使用结果一致。本实验为普兰林肽的活性测定提供了一种稳定可靠的细胞替代模型。; 关键词普兰林肽人胰淀素类似物 L6细胞活性测定; Keywords pramlintide human amylin analogue L6 Cell line activity measurement; 分类号 R927.2 [医药卫生—药学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	改进型外部引导序列抑制人巨细胞病毒UL49基因的表达(英文)	周琪曾志锋李弘剑李月琴崔延伟杨丹邹奕杨光周天鸿	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2009	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	人酸性成纤维细胞生长因子突变体表达与修饰	郑青苏志坚吴晓萍许华黄志锋赵文姚成灿黄亚东李校堃	《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2005	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	重组aFGF乳酸菌的构建、表达及其对小鼠溃疡性结肠炎的药效研究	仝雷张齐好邱壮伟苏志坚陈红霞黄亚东	《湖北农业科学》北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	氨基酸定点突变碱性成纤维生长因子的稳定性	谢秋玲张玲洪岸	《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	重组人角质细胞生长因子在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定	冯成利项琪张齐好杨艳柯实黄亚东苏志坚	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	抗Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定	袁丰瑞张敏静仝雷苏志坚项琪黄亚东	《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
7	人胰淀素类似物普兰林肽体外活性测定方法的建立	王欢歌肖雪胡浩苏志坚项琪张齐好黄亚东	《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料