利用荧光定量PCR技术快速检测转基因产品的研究 被引量：7

1

作者 白卫滨 黄亚东 +2 位作者 柳忠玉 赵文 苏志坚 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期193-195,共3页

针对转基因植物普遍含有的35S启动子进行了通用引物和Tapman荧光探针的设计合成,利用荧光定量PCRfluorescencequantitativepolymerasechainreactionFQ-PCR技术对转基因大豆、玉米和辣椒进行非特异性检测,结果显示出转基因样本有阳性扩... 针对转基因植物普遍含有的35S启动子进行了通用引物和Tapman荧光探针的设计合成,利用荧光定量PCRfluorescencequantitativepolymerasechainreactionFQ-PCR技术对转基因大豆、玉米和辣椒进行非特异性检测,结果显示出转基因样本有阳性扩增条带,非转基因样本呈现阴性。实验表明,荧光定量PCR检测较普通的检测方法具有高效、准确的特点,在转基因产品的分析检测方面提供了一个实用的方法。 展开更多

关键词 转基因植物 检测 荧光定量PCR

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生物活性多肽护肤品的基础及应用 被引量：18

2

作者 李校坤 姚成灿 +1 位作者 黄亚东 郑青 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期41-43,61,共4页

生物活性多肽在人体内含量极少 ,但生物活性极高 ,具有多种重要的生物学效应和生理功能。多种生物活性多肽与皮肤细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移有关 ,它们能够提供皮肤养分 ,延缓皮肤衰老 ,促进皮肤创面修复。实验研究和临床应用... 生物活性多肽在人体内含量极少 ,但生物活性极高 ,具有多种重要的生物学效应和生理功能。多种生物活性多肽与皮肤细胞的生长、分裂、分化、增殖和迁移有关 ,它们能够提供皮肤养分 ,延缓皮肤衰老 ,促进皮肤创面修复。实验研究和临床应用均表明 ,将生物活性多肽添加到美容化妆品中 ,可以有效地与皮肤细胞发生作用 ,发挥其突出的美容护肤功效 ,对于护肤品功能提高具有重要意义。 展开更多

关键词 应用 护肤品 生物活性多肽 生长因子 生物学效应 护肤机理

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紫外辐射对皮肤角化细胞的影响及其防护的研究 被引量：8

3

作者 李校坤 姚成灿 +3 位作者 许华 郑青 黄亚东 刘树铮 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期30-32,共3页

利用紫外线照射人皮肤角化细胞 ,采用流式细胞技术观察细胞周期的进程和细胞凋亡情况 ,并研究了人参皂甙单体Rg -1和Rb -1对紫外辐射的保护作用。结果表明一定剂量的紫外线可明显诱导人皮肤角化细胞S期阻滞及细胞凋亡 ,人参皂甙单体Rg -... 利用紫外线照射人皮肤角化细胞 ,采用流式细胞技术观察细胞周期的进程和细胞凋亡情况 ,并研究了人参皂甙单体Rg -1和Rb -1对紫外辐射的保护作用。结果表明一定剂量的紫外线可明显诱导人皮肤角化细胞S期阻滞及细胞凋亡 ,人参皂甙单体Rg -1和Rb -1能够释放S期阻滞、抑制细胞凋亡 ,对细胞的紫外辐射损伤具有不同程度的保护作用 。 展开更多

关键词 紫外辐射 皮肤角化细胞 影响 防护 人角化细胞 细胞周期 细胞凋亡 人参皂甙 护肤品

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兰索拉唑抗实验性胃溃疡作用的研究 被引量：15

4

作者 许华 俞励平 +3 位作者 文洁 赵文 黄亚东 李校堃 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期698-700,共3页

目的 :研究注射用兰索拉唑对大鼠实验性胃溃疡的影响。方法 :采用大鼠出血休克性胃溃疡、水浸应激性胃溃疡及幽门结扎性胃溃疡模型 ,观察兰索拉唑静脉注射对损伤胃粘膜的保护作用。结果 :兰索拉唑 15 - 6 0mg/kg事先给药 ,对 3种胃溃疡... 目的 :研究注射用兰索拉唑对大鼠实验性胃溃疡的影响。方法 :采用大鼠出血休克性胃溃疡、水浸应激性胃溃疡及幽门结扎性胃溃疡模型 ,观察兰索拉唑静脉注射对损伤胃粘膜的保护作用。结果 :兰索拉唑 15 - 6 0mg/kg事先给药 ,对 3种胃溃疡模型都有明显的抑制溃疡形成作用 ,且有良好的量效关系。在同等剂量下兰索拉唑和奥美拉唑的抗溃疡作用无显著差异 ,但对水浸应激性胃溃疡的疗效明显强于后者 (P <0 0 1)。结论 :兰索拉唑静脉注射明显抑制大鼠实验性胃溃疡的形成。 展开更多

关键词 实验性胃溃疡 兰索拉唑 出血性休克 应激

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基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子促进创面愈合的临床研究 被引量：12

5

作者 李校坤 洪岸 +3 位作者 许华 姚成灿 付小兵 林剑 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第2期22-27,共6页

目的 :观察基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对急性创面和慢性创面愈合的促进作用。方法 :治疗组 (12 82例 )和对照组 (439例 )被分为深Ⅱ度烧伤、浅Ⅱ度烧伤、供皮区 (包括刃厚和中厚供皮区 )和慢性 (包括残余小创面和慢性溃... 目的 :观察基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对急性创面和慢性创面愈合的促进作用。方法 :治疗组 (12 82例 )和对照组 (439例 )被分为深Ⅱ度烧伤、浅Ⅱ度烧伤、供皮区 (包括刃厚和中厚供皮区 )和慢性 (包括残余小创面和慢性溃疡 )创面 4大类。分别观察应用rbFGF后不同时间创面愈合面积的百分比、创面完全愈合时间 ,以及用药前后的全身情况和不良反应。结果 :浅Ⅱ度烧伤 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 1 7%± 2 6 4 %和 (12 6± 2 9)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 70 6 %± 2 5 0 %和 (10 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。深Ⅱ度烧伤 15d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 3 3%± 2 5 4 %和 (2 1 9± 5 5 )d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 6 9 7%± 2 7 0 %和 (18 5± 4 4 )d(P <0 0 0 1)。供皮区创面 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 7 6 %± 2 9 4 %和(11 4± 2 7)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 72 1%± 2 8 0 %和 (9 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。慢性创面完全愈合时间 ,对照组为 (2 8 0± 18 0 )d ,治疗组 (2 2 1± 16 )d(P =0 0 6 8)。用药前后血常规、肝、肾功能无异常变化。结论 展开更多

关键词 基因重组碱性成纤维细胞生长因子 创面愈合 临床试验 rbFGF

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地塞米松影响小鼠胸腺细胞c-Myc表达以及凋亡研究 被引量：11

6

作者 王通 曾耀英 +3 位作者 李校堃 肇静娴 王青 付小兵 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期550-555,共6页

目的 :研究在地塞米松 (DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c -Myc信号变化特点及其与下游caspase - 3变化的相关性 ,以进一步探讨c -Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法 :以终浓度 1μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,通... 目的 :研究在地塞米松 (DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c -Myc信号变化特点及其与下游caspase - 3变化的相关性 ,以进一步探讨c -Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法 :以终浓度 1μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,通过AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术测定 30min、3h、6h和 9h凋亡和坏死细胞比率 ,在 6h时点电镜观察细胞形态 ,利用SDS -PAGE及Westernblot检测 0min、30min、1h和 3h细胞内c -Myc和caspase - 3信号变化特点。结果 :在 1μmol/LDEX诱导下 ,小鼠胸腺细胞在 30min、3h、6h和 9h凋亡比率分别为(5 70± 0 4 6 ) %、(35 79± 1 13) %、(5 0 6 1± 2 15 ) %和 (35 5 2± 1 6 6 ) % ,对照组分别为 (5 97± 0 2 5 ) %、(10 2 0±0 71) %、(12 10± 0 6 6 ) %和 (15 4 5± 0 5 1) % ,组间差异显著 (P <0 0 1)。相应DEX组坏死比率分别为 (4 5 8±0 5 1) %、(4 6 6± 0 6 7) %、(2 5 36± 1 6 4 ) %和 (46 99± 2 6 7) % ,对照组分别为 (4 38± 0 39) %、(4 19± 0 73) %、(9 6 3± 1 2 5 ) %和 (13 38± 0 72 ) % ,组间差异显著 (P <0 0 1) ;电镜观察结果显示DEX处理 6h见较多典型凋亡细胞。对照组在 0min即可检测到c -Myc的明显表达 ,30min略见增多 ,1h? 展开更多

关键词 地塞米松 胸腺细胞 细胞凋亡 C-MYC表达 半胱氨酸灭冬氨酸蛋白酶3

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实时定量聚合酶链反应的研究及应用(综述) 被引量：5

7

作者 林灼锋 李校坤 吴帆 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第5期116-122,共7页

　实时定量聚合酶链反应(real-timequantitativePCR,RQ-PCR)是综合PCR、分子杂交和酶动力学的一种新技术,它根据荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytranslation,FRET)的原理进行.目前已经成功地开发出TaqManTM、molecularbea... 　实时定量聚合酶链反应(real-timequantitativePCR,RQ-PCR)是综合PCR、分子杂交和酶动力学的一种新技术,它根据荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytranslation,FRET)的原理进行.目前已经成功地开发出TaqManTM、molecularbeaconprobe、amplifluortechnologies、LightCycler和single-labeledprobe几种相关的技术,并广泛地应用于病毒学、遗传性疾病和肿瘤等方面的诊断检测.实验研究表明:RQ-PCR作为一种快速、准确的核酸检测方法,在临床及生物学研究方面均具有相当的实用价值. 展开更多

关键词 基因诊断 实时定量聚合酶链反应 生物学 PCR 分子杂交 酶动力学 核酸检测

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3-氯-1,2-丙二醇对睾丸间质瘤细胞R2C生物活性的影响 被引量：2

8

作者 邹飞雁 白顺 +4 位作者 白卫滨 孙建霞 张磊 黄亚东 孙伟伟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期569-573,共5页

为了探讨3-氯-1,2-丙二醇(3-Monochloropropane-1,2-diol,3-MCPD)对体外培养的大鼠睾丸间质瘤细胞R2C活性的影响,分别用0.5、1、2、4、6 mmol/L的3-MCPD刺激R2C细胞,利用MTT法得到3-MCPD对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。取以上3种不同... 为了探讨3-氯-1,2-丙二醇(3-Monochloropropane-1,2-diol,3-MCPD)对体外培养的大鼠睾丸间质瘤细胞R2C活性的影响,分别用0.5、1、2、4、6 mmol/L的3-MCPD刺激R2C细胞,利用MTT法得到3-MCPD对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。取以上3种不同浓度的3-MCPD作用细胞4 h和24 h,通过单细胞凝胶电泳法(Single Cell Gel Electrophoresis,SCGE)检测其作用4 h时对DNA损伤的程度;采用放射免疫法(Radio immunoassay,RIA)检测其作用4 h和24 h对孕酮合成的影响。结果显示:实验组与对照组相比,3-MCPD能抑制R2C细胞的增殖,其IC25、IC50和IC75分别为1.027、1.802、3.160 mmol/L;浓度为IC75的3-MCPD作用R2C细胞4 h后,对其DNA有损伤作用,且孕酮的合成量降低了16.0%;当3-MCPD各浓度组作用R2C细胞24 h后,与对照组相比孕酮合成量降低9.5%至61.2%。以上结果表明,3-MCPD能抑制R2C的活性,影响细胞孕酮的合成。 展开更多

关键词 3-氯-1 2-丙二醇 睾丸间质瘤细胞 孕酮

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阿克苏黄芪抗脂质过氧化作用研究

9

作者 赵文 黄亚东 +2 位作者 任永凤 姚成灿 郑青 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1093-1095,共3页

关键词 阿克苏黄芪 多糖 脂质过氧化 丙二醛

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HSP27和CFL-1在角质细胞急性刺激反应中相关性的研究 被引量：2

10

作者 胡浩 张齐好 +2 位作者 邹萍 仝雷 黄亚东 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期319-323,共5页

研究急性刺激条件下,角质细胞中热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)和Cofilin-1(CFL-1)的表达是否具有相关性,初步探讨皮肤急性刺激反应的作用机理.通过免疫印迹法检测十二烷基硫酸钠(SDS)诱发的急性刺激反应下,角质细胞中HSP27... 研究急性刺激条件下,角质细胞中热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)和Cofilin-1(CFL-1)的表达是否具有相关性,初步探讨皮肤急性刺激反应的作用机理.通过免疫印迹法检测十二烷基硫酸钠(SDS)诱发的急性刺激反应下,角质细胞中HSP27和CFL-1蛋白的表达,并通过RNAi技术验证两者之间的相关性.结果发现,急性刺激诱导HSP27表达显著下调,CFL-1显著上调;干扰HSP27后,CFL-1的表达也随着下调,SDS刺激后,则表达上调.在急性刺激性条件下,HSP27和CFL-1的表达具有一定的浓度和时间依赖性;急性刺激能影响角质细胞骨架的改变,这些改变可能是通过HSP27和CFL-1的相互作用来调节的. 展开更多

关键词 角质细胞 急性刺激反应 HSP27 Cofilin-1

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重组麻疯树核糖体失活蛋白表达及其体外抗肿瘤活性研究

11

作者 徐单单 张波 +4 位作者 黄亚东 张齐好 苏志坚 许华 郑青 《安徽农业科学》 CAS 2012年第12期7079-7082,共4页

[目的]研究重组麻疯树核糖体失活蛋白的表达及其体外抗肿瘤活性。[方法]从麻疯树叶中克隆了curcin基因,在此基础上构建pET-22b/curcin重组表达载体,在大肠杆菌中成功表达29 KD的重组蛋白。[结果]经0.5 mM的IPTG在30℃诱导6 h,重组蛋白... [目的]研究重组麻疯树核糖体失活蛋白的表达及其体外抗肿瘤活性。[方法]从麻疯树叶中克隆了curcin基因,在此基础上构建pET-22b/curcin重组表达载体,在大肠杆菌中成功表达29 KD的重组蛋白。[结果]经0.5 mM的IPTG在30℃诱导6 h,重组蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%,重组curcin以包涵体的形式表达。经溶解、复性、纯化,获得了纯度为95.6%的重组curcin蛋白。[结论]体外研究表明,重组蛋白对A549、HepG2的肿瘤细胞有明显的增殖抑制作用,其IC50分别为92.246和691.42μg/ml,但是对HELA细胞增殖没有明显抑制作用。 展开更多

关键词 麻疯树(JatrophacurcasL.) CURCIN 克隆 表达 纯化 抗肿瘤

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人酸性成纤维细胞生长因子的高效表达 被引量：10

12

作者 李校堃 吴晓萍 +4 位作者 郑青 黄亚东 许华 姚成灿 赵文 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第12期61-64,共4页

构建能高效表达人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)的基因工程菌 ,优化产物分离纯化条件 ,并对纯化产物进行理化性质鉴定 .采用PCR方法扩增haFGFcDNA ,将该cDNA片段插入表达载体 pET3c的表达框架中 ,筛选得到了重组质粒pET3c_haFGF ,转... 构建能高效表达人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)的基因工程菌 ,优化产物分离纯化条件 ,并对纯化产物进行理化性质鉴定 .采用PCR方法扩增haFGFcDNA ,将该cDNA片段插入表达载体 pET3c的表达框架中 ,筛选得到了重组质粒pET3c_haFGF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,构建了表达菌株BL2 1(DE3) / pET3c_haFGF .IPTG诱导表达 ,通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化产物 .用MTT法测定产物的活性 .haFGF的表达量约为 2 0 % .经过两步层析纯化 ,获得了电泳纯的haFGF样品 .纯化haFGF样品的比活性为ED50 小于 4 .0ng/mL .BL2 1(DE3) / pET3c表达系统能高效表达haFGF ,经过纯化得到了理化性质及生物活性与天然haFGF对照品一致的重组人酸性成纤维细胞生长因子 . 展开更多

关键词 人酸性成纤维细胞生长因子 诱导表达 分离纯化 基因工程 氨基酸残基 理化性质 生物活性

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抗菌肽AD基因的改造及在毕赤酵母中的表达 被引量：25

13

作者 黄亚东 郑青 +2 位作者 李校 姚汝华 黄自然 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第2期13-16,共4页

采用PCR技术改造抗菌肽AD基因 ,将其C末端改造为Asn编码 ,改造后的抗菌肽CecropinAD基因克隆到 pPICZα_A载体上 ,构建成酵母重组分泌型表达载体 ,转化毕赤酵母 (Pichiapastoris)受体菌GS115中 .采用zerocin抗性标记筛选重组转化子 ,经... 采用PCR技术改造抗菌肽AD基因 ,将其C末端改造为Asn编码 ,改造后的抗菌肽CecropinAD基因克隆到 pPICZα_A载体上 ,构建成酵母重组分泌型表达载体 ,转化毕赤酵母 (Pichiapastoris)受体菌GS115中 .采用zerocin抗性标记筛选重组转化子 ,经摇瓶发酵 ,浓缩发酵液进行酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析和抑菌活性检测 .结果表明 ,改造后的CecropinAD基因在毕赤酵母中获得了表达 ,表达产物经α_Factor信号肽引导分泌到胞外 ,具有较强的杀菌活性 . 展开更多

关键词 抗菌肽 毕赤酵母 AD基因 基因克隆 基因表达 抗菌活性 Asn编码

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NK-22细胞及IL-22相关功能分子在类风湿关节炎滑膜细胞增殖中的作用 被引量：14

14

作者 任洁 周毅 +2 位作者 吴会霞 戴桃李 朱丽花 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期20-24,共5页

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者滑液(SF)自然杀伤(NK)细胞NK-22促成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖作用及相关信号通路。方法采用流式细胞术分选6例RA患者SF中NK-22细胞(2×104),体外悬浮培养2周,佛波酯(20 ng/ml)和离子霉素(0.5μmol/L)... 目的探讨类风湿关节炎(RA)患者滑液(SF)自然杀伤(NK)细胞NK-22促成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖作用及相关信号通路。方法采用流式细胞术分选6例RA患者SF中NK-22细胞(2×104),体外悬浮培养2周,佛波酯(20 ng/ml)和离子霉素(0.5μmol/L)刺激后ELISA检测NK-22细胞培养上清IL-22浓度。组织块培养法原代培养RAFLS,NK-22细胞培养上清分别作用于RAFLS24、48、72 h,MTT法检测FLS增殖;同时加入IL-22抗体检测FLS增殖情况。RT-PCR检测rhIL-22及AG490作用后RAFLS Stat3 mRNA的表达,Western blot检测RAFLS p-Stat3蛋白含量。结果①流式分选2×104NK-22细胞,细胞纯度>90%;②PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清中IL-22浓度为1273.42±254.48 pg/ml;③PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清作用于RAFLS 24 h、48 h、72 h,可明显刺激RAFLS增殖(P<0.05)。IL-22抗体能明显抑制NKp44+NK细胞上清诱导的RA FLS增殖(P<0.01);④rhIL-22(1 ng/ml)能诱导RAFLS p-Stat3表达(P<0.05);⑤AG490能抑制rhIL-22诱导的RAFLS p-Stat3表达(P<0.05)。结论 RA患者SFNK-22细胞体外可分泌高浓度的IL-22,通过激活STAT3信号通路进而刺激RAFLS增殖。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 NK-22细胞 IL-22 STAT3

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基因重组碱性成纤维细胞生长因子对大鼠视网膜神经节细胞的影响 被引量：11

15

作者 李校堃 胡爱莲 +2 位作者 郑远远 许华 姚成灿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期147-149,共3页

目的 :研究基因重组碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对大鼠视网膜神经节细胞 (RGCs)的影响。方法 :大鼠在视神经部分损伤后 ,球后注射生理盐水、维生素B12 、rbFGF ,伤后 4周进行轴突定量、视网膜神经节细胞定量以及RGCs凋亡的检测 ,观... 目的 :研究基因重组碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对大鼠视网膜神经节细胞 (RGCs)的影响。方法 :大鼠在视神经部分损伤后 ,球后注射生理盐水、维生素B12 、rbFGF ,伤后 4周进行轴突定量、视网膜神经节细胞定量以及RGCs凋亡的检测 ,观察视神经损伤修复情况。结果 :伤后 4周时 ,生理盐水和维生素B12 对RGCs无挽救作用 ,80 0U、160 0U和 2 4 0 0U的rbFGF对RGCs挽救率分别为 2 4 5 %、2 7 3 %、2 8 5 % ,80 0UrbFGF组、160 0UrbFGF组和2 4 0 0UrbFGF组未发生溃变的轴突数分别是损伤未治疗组的 2 0 3、2 4 3、2 3 1倍。流式细胞仪检测结果显示 :rbFGF治疗 7d后 ,RGCs凋亡率显著减少。结论 :rbFGF可提高视网膜神经节细胞的存活率 ,减少轴突溃变 ,有抗凋亡作用 。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子 视神经 视网膜神经节细胞 视神经损伤

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haFGF和nm-haFGF过表达对乳腺肿瘤细胞增殖及c-fos、c-jun mRNA表达的影响 被引量：5

16

作者 郑青 彭菲 +3 位作者 苏志坚 吴晓萍 许华 李校堃 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期402-407,共6页

目的研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetic human acidic fibroblast growth factor,nm-haF-GF)和人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)对恶性肿瘤细胞的增殖作用及其与对c-fos、c-jun mRNA表达的影响,探讨nm-haFGF在治疗... 目的研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non-mitogenetic human acidic fibroblast growth factor,nm-haF-GF)和人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)对恶性肿瘤细胞的增殖作用及其与对c-fos、c-jun mRNA表达的影响,探讨nm-haFGF在治疗神经系统疾病和心血管疾病等方面的临床应用安全性。方法构建细胞内真核表达载体pIRES/haF-GF、pIRES/nm-haFGF,分泌型真核表达载体pSectag/haFGF、pSectag/nm-haFGF。转染乳腺癌细胞MCF-7,Western blot鉴定细胞内及上清中aFGF的表达。用流式细胞技术分析细胞周期(G0/G1,S期,G2/M)。用半定量RT-PCR检测立早基因c-fos、c-jun mRNA的表达。结果nm-haFGF和haFGF在MCF-7细胞中能够过量表达。转染nm-haFGF组的S期和G2/M细胞比率与对照组差异无显著性,而转染haFGF组差异有显著性。转染haFGF后,c-fos、c-jun mRNA的表达明显升高,转染nm-aFGF后却与未转染组无差别。结论与haFGF相比,nm-haFGF消除了促肿瘤细胞增殖活性,基本不会诱导细胞c-fos、c-jun原癌基因的转录与表达。 展开更多

关键词 haFGF 增殖活性 C-FOS C-JUN

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haFGF突变体促细胞增殖活性降低及其机制 被引量：6

17

作者 郑青 汪小凤 +4 位作者 吴晓萍 许华 张齐好 苏志坚 李校堃 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期446-448,共3页

目的 :观察N端缺失 2 7个氨基酸残基的人酸性成纤维细胞生长因子突变体 (mhaFGF)对肝癌细胞增殖活性和信号转导的影响。方法 :用不同浓度 (0 0 1- 10 0 μg/L)的人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)及mhaFGF分别处理肝癌细胞 ,15min后用... 目的 :观察N端缺失 2 7个氨基酸残基的人酸性成纤维细胞生长因子突变体 (mhaFGF)对肝癌细胞增殖活性和信号转导的影响。方法 :用不同浓度 (0 0 1- 10 0 μg/L)的人酸性成纤维细胞生长因子 (haFGF)及mhaFGF分别处理肝癌细胞 ,15min后用半定量Westernblotting检测信号蛋白Grb2、Erk1/2在肝癌细胞中的表达 ,4 8h后用MTT法检测细胞增殖活性 ,并用流式细胞仪分析细胞周期。结果 :haFGF组G1期细胞比例显著低于和S期显著高于mhaFGF组和对照组 ,而mhaFGF组与对照组间无差别 ;mhaFGF组的Grb2和MAPK -ERk1/2信号分子表达水平低于haFGF组。结论 :mhaFGF促分裂活性的下降可能是通过下调MAPK信号通路中的MAPK -ERK1/2和Grb2信号分子的表达来实现的。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子1 信号转导 肝肿瘤

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1,3-二氯-2-丙醇对睾丸间质细胞R2C活性及孕酮合成的影响 被引量：6

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作者 白顺 孙建霞 +3 位作者 白卫滨 邹飞雁 张齐好 黄亚东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期292-295,共4页

目的:研究1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)对体外睾丸间质细胞活性及孕酮合成的影响。方法:分别用0.5、1、2、4、6mmol/L浓度的1,3-DCP作用R2C细胞48h,利用MTT法获得1,3-DCP对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。选取以上3种不同浓度的1,3-DCP作用... 目的:研究1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)对体外睾丸间质细胞活性及孕酮合成的影响。方法:分别用0.5、1、2、4、6mmol/L浓度的1,3-DCP作用R2C细胞48h,利用MTT法获得1,3-DCP对R2C细胞的IC25、IC50以及IC75。选取以上3种不同浓度的1,3-DCP作用细胞4h或24h,通过单细胞电泳法(SCGE)检测其作用4h时对DNA损伤的程度;通过放射免疫法(RIA)检测4h或24h处理时对孕酮合成的影响。结果:与对照组相比,1,3-DCP能抑制R2C细胞的增殖,其IC25、IC50、IC75分别为(1.161±0.046)、(1.897±0.018)、(3.100±0.040)mmol/L;作用4h对R2C细胞DNA有损伤作用;各浓度组作用4h或24h后与对照组相比均能降低孕酮的合成。结论:1,3-DCP能抑制R2C的活性,影响细胞孕酮的合成。 展开更多

关键词 1 3-二氯-2-丙醇 睾丸间质细胞 孕酮 细胞活性 机制

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一种新型天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体融合蛋白S的构建及表达 被引量：3

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作者 苏志坚 吴晓萍 +4 位作者 郑青 黄亚东 庞实锋 冯雅 李校堃 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第4期420-425,共6页

目的 :构建和表达一种带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和人酸性成纤维细胞生长因子 (acidicfibroblastgrowthfactor ,aFGF)突变体的融合蛋白S ,在创伤皮肤表面应用时能自动裂解成有抗感染功能的天蚕素杂合肽AD和皮肤修复功能的aFGF... 目的 :构建和表达一种带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和人酸性成纤维细胞生长因子 (acidicfibroblastgrowthfactor ,aFGF)突变体的融合蛋白S ,在创伤皮肤表面应用时能自动裂解成有抗感染功能的天蚕素杂合肽AD和皮肤修复功能的aFGF突变体。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD基因和aFGF突变体基因。再利用两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白S的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 72h ,SDS -PAGE电泳检测融合蛋白S的表达 ,并用Western -blot杂交检测融合蛋白S的免疫原性。结果 :筛选出的重组转化株在甲醇诱导后能表达相对分子质量约为 190 0 0的融合蛋白S ,而该蛋白能与aFGF抗体产生免疫反应。结论 :用PCR方法获得编码含凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽AD和aFGF突变体的融合蛋白SDNA 。 展开更多

关键词 天蚕素杂合肽AD aFGF突变体 融合蛋白S

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肝细胞生长因子拮抗放线菌素D诱导的肝细胞凋亡及机制探讨 被引量：2

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作者 李文君 李校堃 +4 位作者 蔡绍晖 戚仁斌 苏志坚 肖健 吴志玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期992-996,共5页

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对放线菌素D(ActD)诱导HL7702肝细胞凋亡的拮抗作用及可能机制。方法:本实验采用HL7702正常人肝细胞株,MTT法检测ActD对肝细胞存活力的影响;Hoechst33342进行凋亡形态学染色;DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测... 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对放线菌素D(ActD)诱导HL7702肝细胞凋亡的拮抗作用及可能机制。方法:本实验采用HL7702正常人肝细胞株,MTT法检测ActD对肝细胞存活力的影响;Hoechst33342进行凋亡形态学染色;DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡数量;Western blotting方法检测细胞总Akt及磷酸化Akt蛋白的表达。结果:ActD可以诱导HL7702肝细胞凋亡,其浓度在0.25-8 mg/L范围内呈现剂量效应关系;PI3K特异性抑制剂wortmannin能够增强ActD诱导的肝细胞凋亡作用;肝细胞生长因子(HGF)对ActD诱导的肝细胞凋亡有拮抗作用,在一定剂量范围内呈现剂量效应关系;并且HGF能够激活PI3K/Akt信号转导途径;进一步用wortmannin阻断PI3K/Akt信号途径后,HGF的拮抗凋亡作用被抑制。结论:一定剂量的ActD可以诱导肝细胞凋亡;wortmannin能够增强ActD诱导肝细胞凋亡的作用;HGF对ActD诱导的这种细胞凋亡有明显的拮抗作用,并且HGF的抗凋亡作用与其激活细胞内PI3K/Akt信号转导通路有关。 展开更多

关键词 肝细胞 细胞凋亡 信号转导 肝细胞生长因子 放线菌素D

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