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IRF5基因慢病毒表达载体的构建及其在巨噬细胞RAW264.7中的表达
1
作者
麦莉
韦建瑞
华兴
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期452-456,共5页
目的:构建干扰素凋节因子5(IRF5)慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5并转染巨噬细胞RAW264.7,观察IRF5巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法:采用基因重组技术,将PCR技术钓取的目的基因IRF5片段克隆至线性化慢病毒表达载体LV11中,重组载体经PC...
目的:构建干扰素凋节因子5(IRF5)慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5并转染巨噬细胞RAW264.7,观察IRF5巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法:采用基因重组技术,将PCR技术钓取的目的基因IRF5片段克隆至线性化慢病毒表达载体LV11中,重组载体经PCR、双酶切和测序鉴定构建成功后,采用脂质体转染技术将表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带IRF5基因的重组慢病毒;收集病毒上清液感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用G418将非浸染的细胞致死,获得纯净的浸染细胞,即RAW264.7-IRF5细胞(实验组),并将RAW264.7-NC细胞作为对照(对照组)。分别采用RT-qPCR和Western blotting法检测2组细胞中IRF5mRNA和蛋白的表达水平。结果:重组慢病毒质粒LV11-cmv-neo-IRF5经PCR和酶切法鉴定构建成功;病毒上清液感染RAW264.7细胞并经G418筛选获得阳性细胞;RT-qPCR法检测,与对照组比较,实验组细胞中IRF5mRNA表达水平升高(P<0.001);Western blotting法检测,实验组细胞中IRF5蛋白的表达水平明显高于对照组。结论:成功构建携带IRF5基因的慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5,IRF5基因在巨噬细胞RAW264.7中稳定表达。
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关键词
干扰素调节因子5
慢病毒表达载体
动脉粥样硬化
巨噬细胞
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职称材料
鼻腔和鼻旁窦非嗜铬性副神经节瘤1例
被引量：
1
2
作者
张胜泉
肖冠英
《临床与实验病理学杂志》
CAS
CSCD
2003年第4期450-451,共2页
关键词
鼻腔
鼻旁窦
非嗜铬性副神经节瘤
病理检查
肿瘤
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职称材料
题名
IRF5基因慢病毒表达载体的构建及其在巨噬细胞RAW264.7中的表达
1
作者
麦莉
韦建瑞
华兴
机构
暨南大学医学院
附属
广州
红十字会
医院
心血管内科
暨南大学医学院附属广州红十字会医院病理科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期452-456,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(81272849)
文摘
目的:构建干扰素凋节因子5(IRF5)慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5并转染巨噬细胞RAW264.7,观察IRF5巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法:采用基因重组技术,将PCR技术钓取的目的基因IRF5片段克隆至线性化慢病毒表达载体LV11中,重组载体经PCR、双酶切和测序鉴定构建成功后,采用脂质体转染技术将表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带IRF5基因的重组慢病毒;收集病毒上清液感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用G418将非浸染的细胞致死,获得纯净的浸染细胞,即RAW264.7-IRF5细胞(实验组),并将RAW264.7-NC细胞作为对照(对照组)。分别采用RT-qPCR和Western blotting法检测2组细胞中IRF5mRNA和蛋白的表达水平。结果:重组慢病毒质粒LV11-cmv-neo-IRF5经PCR和酶切法鉴定构建成功;病毒上清液感染RAW264.7细胞并经G418筛选获得阳性细胞;RT-qPCR法检测,与对照组比较,实验组细胞中IRF5mRNA表达水平升高(P<0.001);Western blotting法检测,实验组细胞中IRF5蛋白的表达水平明显高于对照组。结论:成功构建携带IRF5基因的慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5,IRF5基因在巨噬细胞RAW264.7中稳定表达。
关键词
干扰素调节因子5
慢病毒表达载体
动脉粥样硬化
巨噬细胞
Keywords
interferon regulatory factor 5
lentiviral vector
atherosclerosis
macrophages
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
鼻腔和鼻旁窦非嗜铬性副神经节瘤1例
被引量：
1
2
作者
张胜泉
肖冠英
机构
暨南大学医学院附属广州红十字会医院病理科
出处
《临床与实验病理学杂志》
CAS
CSCD
2003年第4期450-451,共2页
关键词
鼻腔
鼻旁窦
非嗜铬性副神经节瘤
病理检查
肿瘤
分类号
R739.62 [医药卫生—肿瘤]
R730.264 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
IRF5基因慢病毒表达载体的构建及其在巨噬细胞RAW264.7中的表达
麦莉
韦建瑞
华兴
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
在线阅读
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职称材料
2
鼻腔和鼻旁窦非嗜铬性副神经节瘤1例
张胜泉
肖冠英
《临床与实验病理学杂志》
CAS
CSCD
2003
1
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