角膜体外重建异种生物载体材料生物相容性研究 被引量：8

1

作者 郝念 吴静 +2 位作者 李姝燕 徐锦堂 赵松滨 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期113-116,共4页

目的　研究异种 (猪 )角膜基质的生物相容性 ,评价其作为角膜体外重建载体的可行性。方法　将新鲜、脱水两种猪角膜基质分别植入新西兰白兔角膜层间 ,定期临床观察植片愈合情况 ,并于术后 2周、1、2、4、8个月取兔角膜进行组织学观察。... 目的　研究异种 (猪 )角膜基质的生物相容性 ,评价其作为角膜体外重建载体的可行性。方法　将新鲜、脱水两种猪角膜基质分别植入新西兰白兔角膜层间 ,定期临床观察植片愈合情况 ,并于术后 2周、1、2、4、8个月取兔角膜进行组织学观察。结果　临床观察 :全部植片存活 ,12只术眼未见角膜水肿混浊、角膜新生血管、排斥反应发生 ,新鲜植片在 2个月左右已透明 ,脱水植片在 6个月后透明。组织学观察 :新鲜植片 4个月时与兔角膜基质相融愈合 ,脱水植片经角膜细胞再分布、胶原纤维改建重塑 ,于 8个月后与兔角膜基质相融愈合 ,2组植片愈合过程中未见有淋巴细胞浸润及新生血管生成。结论　异种 (猪 )角膜基质具有良好的生物相容性 ,是一种理想的角膜体外重建载体材料。 展开更多

关键词 角膜基质 生物相容性 角膜重建 生物载体 异种移植

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以异种后弹力膜基质为载体培养角膜内皮细胞的研究 被引量：8

2

作者 罗小玲 徐锦堂 +3 位作者 黄菊天 赵松滨 陈建苏 吴静 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期449-452,共4页

目的　探讨以异种后弹力膜 (DM) /基质为载体培养角膜内皮细胞的可行性 ,为培养内皮细胞的临床移植提供新的方法和供体材料。方法　取厚 10 0 μm的猪角膜后层 ,冻存解冻后置中性蛋白酶 3 7℃孵育 5min ,去除内皮细胞 ,保留DM及薄层基... 目的　探讨以异种后弹力膜 (DM) /基质为载体培养角膜内皮细胞的可行性 ,为培养内皮细胞的临床移植提供新的方法和供体材料。方法　取厚 10 0 μm的猪角膜后层 ,冻存解冻后置中性蛋白酶 3 7℃孵育 5min ,去除内皮细胞 ,保留DM及薄层基质 ,置纯甘油中脱水保存 6个月 ;使用前复水 ,紫外线二面灭菌 ,制备成载体 ;接种兔角膜内皮细胞于载体的DM面并体外培养 ,行细胞形态、密度、组织学、超微结构的观察。结果　兔内皮细胞在猪DM/基质载体上贴附生长 ,形成紧密连接的单层 ,形态近似六角形分布 ;细胞密度达 ( 3 62 0± 110 2 3 )个 /mm2 ,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构。结论　角膜内皮细胞能够在异种DM/基质载体上良好生长 。 展开更多

关键词 异种角膜 后弹力膜 角膜内皮细胞 体外培养

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兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究 被引量：4

3

作者 陈瑞 陈建苏 +3 位作者 徐锦堂 丁勇 赵松滨 李施娜 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期199-204,共6页

目的:研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性,探索和改进这3种细胞体外培养的方法,为组织工程角膜奠定基础。方法:采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞,观察细胞贴壁生长情况,同时对生长良好... 目的:研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性,探索和改进这3种细胞体外培养的方法,为组织工程角膜奠定基础。方法:采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞,观察细胞贴壁生长情况,同时对生长良好的原代细胞进行消化传代,进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果:角膜上皮、内皮和基质细胞均在培养4 8～72h贴壁生长,培养6～9d能形成良好单层,细胞形态典型,进行多次传代后细胞仍维持原有形态和功能,获得的细胞能进行长期培养。结论:为兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞体外培养。 展开更多

关键词 角膜 上皮细胞 基质细胞 内皮细胞 细胞培养 兔 牛

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大鼠羊膜上皮细胞体外培养的初步研究 被引量：6

4

作者 金玲 陈剑 +4 位作者 吴静 徐锦堂 王彦平 赵松槟 郑佩娥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1036-1038,共3页

目的:研究大鼠羊膜上皮细胞(AECs)在体外培养时的形态变化和其生长特性,探讨EGF和血清对AECs生长和增殖性的影响。方法:分别取妊娠中期SD大鼠(12-14 d)和妊娠晚期SD大鼠(18-19 d)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用DMEM/F12培养液培养、传代... 目的:研究大鼠羊膜上皮细胞(AECs)在体外培养时的形态变化和其生长特性,探讨EGF和血清对AECs生长和增殖性的影响。方法:分别取妊娠中期SD大鼠(12-14 d)和妊娠晚期SD大鼠(18-19 d)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用DMEM/F12培养液培养、传代。光镜、扫描电镜下观察其生长的形态变化;MTT法检测EGF和血清对AECs生长和增殖性的影响。结果:妊娠中期和晚期AECs在体外培养时均生长良好、增殖活跃,但妊娠晚期AECs生长周期相对较短。结论:EGF和血清均能促进AECs增殖,其中EGF促进AECs的增殖更为显著。这为利用AECs进行细胞治疗和组织工程技术奠定了实验基础。 展开更多

关键词 大鼠 羊膜 上皮细胞 细胞培养

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角膜体外重构异种生物载体材料植入性实验研究 被引量：4

5

作者 吴静 郝念 +2 位作者 李姝燕 徐锦堂 王彦平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1193-1197,共5页

目的:分析测定异种(猪)角膜基质组织免疫原性,观察其角膜层间植入后与受体角膜愈合情况,以评价该材料生物相容性,并在此载体上体外重构角膜内皮组织,探讨其作为角膜重建载体材料可行性。方法:(1)将新鲜、脱水两种猪角膜基质植片分别植入... 目的:分析测定异种(猪)角膜基质组织免疫原性,观察其角膜层间植入后与受体角膜愈合情况,以评价该材料生物相容性,并在此载体上体外重构角膜内皮组织,探讨其作为角膜重建载体材料可行性。方法:(1)将新鲜、脱水两种猪角膜基质植片分别植入F344大鼠角膜基质层间,术后12、90d对外周血进行CD25和CD4/CD8双色免疫荧光标记,流式细胞仪测定分析。(2)猪角膜基质植入新西兰白兔角膜层间,定期临床观察植片愈合情况,并取受体兔角膜进行组织学观察。(3)将猫角膜内皮细胞接种于保留后弹力层的脱水猪角膜基质上,加入培养液培养7d,组织学观察体外重构的角膜内皮组织形态结构。结果:(1)测得新鲜组、脱水组大鼠外周血T淋巴细胞CD4+CD25+、CD8+CD25+双阳性表达率及CD4+/CD8+比值与同基因移植组、阴性对照组比较无显著差异(P>0.05)。(2)兔眼临床观察:全部植片存活,12只术眼未见有角膜水肿混浊、角膜新生血管、排斥反应发生,新鲜植片在2个月左右已透明,脱水植片在6个月后透明。兔角膜组织学观察:新鲜植片4个月时与兔角膜基质相融愈合,脱水植片经角膜细胞再分布、胶原纤维改建重塑于8个月后与兔角膜基质相融愈合,两组植片愈合过程中未见有淋巴细胞浸润及新生血管生成。(3)体外重构的内皮组织形态结构与正常内皮层相似。结论:异种(猪)角膜基质免疫原性低,具有良好的生物相容性,是目前较为理想的角膜体外重构载体材料。 展开更多

关键词 角膜基质 生物相容性材料 猪 猫

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人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究 被引量：3

6

作者 李彬斌 周清 +3 位作者 姚敏 张晓玲 秦晓艳 陈剑 《器官移植》 CAS CSCD 2013年第1期12-18,共7页

目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Du... 目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)组(DMEM组)、无血清DMEM与HAEC培养液1∶1混合组(混合组)、HAEC培养液组(HAEC组)。传代的角膜上皮细胞贴壁24h后,用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种培养液培养48h后收集细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HAEC培养液中白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的含量。采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素(IL)-1β信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)的表达,采用八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octapeptide,CCK-8)法检测3组细胞的增殖情况。结果 HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征。HAEC培养液中IL-1Ra的含量为(153.56±0.36)ng/L,无血清DMEM对照中未检出IL-1Ra。3组培养液中,兔角膜上皮细胞的IL-1β mRNA表达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组,3组的IL-1β mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72h后,HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高于混合组和DMEM组,DMEM组的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组(均为P<0.05)。结论 HAEC可分泌IL-1Ra抑制角膜上皮细胞IL-1β的表达,减少炎症反应及移植排斥作用,并促进角膜上皮细胞增殖。 展开更多

关键词 羊膜移植 羊膜上皮细胞 角膜上皮细胞 白介素-1 白介素-1受体拮抗剂 细胞增殖 炎症 免疫排斥

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异种角膜基质异位植入后免疫病理学研究 被引量：4

7

作者 陈根云 吴静 +1 位作者 徐锦堂 赵松滨 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期18-20,共3页

目的观察异种角膜基质异位植入后的免疫病理变化,评价其免疫相容性。方法将一定大小的新鲜的和甘油脱水的猪角膜基质植入到小鼠皮下组织内,同时以异种皮肤、假手术为阳性和阴性对照;术后1个月取材进行组织病理学观察,并通过免疫荧光细... 目的观察异种角膜基质异位植入后的免疫病理变化,评价其免疫相容性。方法将一定大小的新鲜的和甘油脱水的猪角膜基质植入到小鼠皮下组织内,同时以异种皮肤、假手术为阳性和阴性对照;术后1个月取材进行组织病理学观察,并通过免疫荧光细胞化学法检测植入材料内T淋巴细胞总数和亚群的变化。结果新鲜的和甘油脱水的猪角膜基质皮下植入后1个月,可见少量的淋巴细胞、巨噬细胞、CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞浸润,且CD4+细胞多于CD8+细胞,但未达到阳性对照水平(P<0.05)。结论异种角膜基质异位植入后早期局部未引发免疫排斥反应,免疫相容性好。 展开更多

关键词 角膜基质 异种材料 异种移植 免疫病理学 免疫荧光

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异种角膜基质材料正位植入后神经再生的研究 被引量：7

8

作者 陈根云 吴静 +1 位作者 徐锦堂 赵松滨 《眼科新进展》 CAS 2005年第6期488-491,共4页

目的探讨新鲜、甘油脱水异种角膜基质材料的神经再生特性。方法将新鲜、甘油脱水猪角膜基质材料分别植入到兔角膜基质层间,术后不同时期,通过神经组织银染技术观察受体角膜基质神经再生的状况。结果受体创缘的再生神经纤维分别于术后2... 目的探讨新鲜、甘油脱水异种角膜基质材料的神经再生特性。方法将新鲜、甘油脱水猪角膜基质材料分别植入到兔角膜基质层间,术后不同时期,通过神经组织银染技术观察受体角膜基质神经再生的状况。结果受体创缘的再生神经纤维分别于术后2个月和3个月长入新鲜材料和脱水材料,但形态走向异常;术后4个月,2种材料周边区神经纤维的数量明显增加,可见神经纤维束和神经纤维丛再生,部分象限中央区也可见神经纤维再生;术后5个月,再生神经纤维形态走向开始改建。结论异种角膜基质材料植入后易于神经再生,再生速度不一;甘油脱水工序对材料的远期神经再生率没有影响。 展开更多

关键词 神经再生 角膜基质 异种材料 异种移植

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慢病毒介导EGFP基因修饰的人羊膜上皮细胞重建角膜表层的实验研究 被引量：3

9

作者 金玲 陈剑 +4 位作者 吴静 徐锦堂 周清 叶茹珊 张宏 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期685-689,共5页

背景研究发现人羊膜上皮细胞（AECs）具有干细胞的某些特性，已有学者用其进行眼表重建，其可能是角膜表层重建的一种新型种子细胞。目的探讨经慢病毒载体（pLenti6／V5一DEST）介导增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因修饰的人AECs作为组... 背景研究发现人羊膜上皮细胞（AECs）具有干细胞的某些特性，已有学者用其进行眼表重建，其可能是角膜表层重建的一种新型种子细胞。目的探讨经慢病毒载体（pLenti6／V5一DEST）介导增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因修饰的人AECs作为组织工程化角膜表层一种新的细胞来源的应用价值。方法利用慢病毒载体携带标记基因EGFP转染人AECs，荧光显微镜下观察转染基因的瞬时表达，倒置显微镜下观察转染细胞的生长形态，用流式细胞仪检测转染细胞中EGFP的阳性表达率，然后应用EGFP基因修饰的人AECs构建复层上皮细胞一角膜基质移植材料。手术切除兔眼的全部角膜缘组织制备角膜缘干细胞缺损动物模型，随机分为2组，实验组兔眼移植EGFP基因修饰的人AECs构建的复层上皮细胞一角膜基质移植材料，对照组兔眼移植无上皮细胞的角膜基质移植材料，每天裂隙灯下观察2组兔眼角膜的混浊、结膜上皮化和新生血管化情况。1个月后处死动物摘除眼球，荧光显微镜下观察角膜植片中EGFP的表达，用免疫组织化学法检测其细胞角蛋白8（CK8）、CKl8和CKl2的表达，以鉴定移植细胞分化为角膜样的上皮细胞。结果大多数转染细胞筛选出的抗性克隆以及培养的克隆细胞与正常体外培养的人AECs形态相似，流式细胞仪检测显示瞬时转染48h的人AECs中EGFP阳性表达率最高，为61．50％，与12、24、96h转染组15．24％、38．27％、39．10％比较差异均有统计学意义（P〈0．05），与72h转染组的58．36％比较差异无统计学意义（P〉0．05）。实验组10只兔眼中有6只眼角膜恢复透明，组织片在荧光显微镜下观察能发出绿色荧光，免疫组织化学结果显示CK8、CKl8、CKl2表达均为细胞质棕色染色，细胞核蓝染。对照组兔眼角膜均混浊、水肿，荧光显微镜下未见荧光，且部分角膜组织有CK8、CKl8表达，无CKl2表达。结论EGFP基因修饰的人AECs构建的复层上皮细胞一角膜基质移植材料能较好地重建角膜缘干细胞缺乏的兔眼角膜表层，可能是组织工程角膜表层一种新的细胞来源。慢病毒载体是一种安全有效的基因转移工具。 展开更多

关键词 慢病毒 增强型绿色荧光蛋白 基因转染 人羊膜上皮细胞 角膜移植

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异种角膜基质的研究现状及问题 被引量：4

10

作者 徐锦堂 陈建苏 +2 位作者 吴静 罗小玲 潘红卫 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第7期601-604,共4页

在角膜3层(上皮层+Bowman’s膜、基质层、内皮层+Descemet’s膜)膜中,按等量计算,基质层的免疫原性是最低的。应用脱细胞的异种角膜基质移植后,神经和基质细胞可以再生,术后未见排斥反应,植片获得透明。因此,异种角膜基质有望成为板层... 在角膜3层(上皮层+Bowman’s膜、基质层、内皮层+Descemet’s膜)膜中,按等量计算,基质层的免疫原性是最低的。应用脱细胞的异种角膜基质移植后,神经和基质细胞可以再生,术后未见排斥反应,植片获得透明。因此,异种角膜基质有望成为板层角膜移植的供体和组织工程角膜的载体。现就异种角膜基质的研究现状及问题综述如下。 展开更多

关键词 异种角膜基质 脱细胞基质 角膜移植 载体

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紫外光核黄素交联治疗圆锥角膜的研究进展 被引量：14

11

作者 潘红卫 陈建苏 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期397-400,共4页

紫外光核黄素交联疗法是最近几年发展起来的一种治疗圆锥角膜的新方法,通过诱导角膜基质内纤维相互交联而提高角膜强度,从而阻止圆锥角膜的进展。介绍这一新疗法的基本原理、操作步骤和临床应用现状,并阐述关于该疗法的实验室研究成果,... 紫外光核黄素交联疗法是最近几年发展起来的一种治疗圆锥角膜的新方法,通过诱导角膜基质内纤维相互交联而提高角膜强度,从而阻止圆锥角膜的进展。介绍这一新疗法的基本原理、操作步骤和临床应用现状,并阐述关于该疗法的实验室研究成果,包括具体的治疗效应例如生物力学效应、热力学效应、超微结构改变等,以及对角膜基质细胞、内皮细胞和晶状体可能存在的不良反应。 展开更多

关键词 紫外光核黄素交联 圆锥角膜 生物力学

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异种角膜基质作为生物角膜载体的免疫学研究 被引量：5

12

作者 吴静 郝念 +2 位作者 李姝燕 徐锦堂 王彦平 《眼科新进展》 CAS 2006年第5期324-327,共4页

目的探讨异种(猪)角膜基质组织免疫原性,以评价其作为角膜重建载体材料的可行性。方法将新鲜、脱水2种猪角膜基质植片分别植入F344大鼠角膜基质层间,术后12d、90d抽取外周血,行抗CD25·FITC和抗CD4/CD8·PE双色免疫荧光标记,流... 目的探讨异种(猪)角膜基质组织免疫原性,以评价其作为角膜重建载体材料的可行性。方法将新鲜、脱水2种猪角膜基质植片分别植入F344大鼠角膜基质层间,术后12d、90d抽取外周血,行抗CD25·FITC和抗CD4/CD8·PE双色免疫荧光标记,流式细胞仪测定分析。结果测得新鲜组、脱水组大鼠术后12d外周血T淋巴细胞表面抗原CD4+和CD25+、CD8+和CD25+双阳性表达率(1.53%±0.47%,2.13%±0.53%与0·57%±0.20%,0.67%±0.18%)及CD4+/CD8+比值(1.43±0.28,1.69±0.18)与同基因移植组(1.78%±0.36%,1.50±0.19)、阴性对照组(2.06%±0.52%,1.44±0.32)比较无显著性差异(P>0.05)。术后90d,新鲜组、脱水组大鼠外周血T淋巴细胞表面抗原CD4+和CD25+、CD8+和CD25+双阳性表达率(1.48%±0.39%,1.50%±0.46%与0·55%±0.15%,0·58%±0·11%)及CD4+/CD8+比值(1.43±0.51,1.36±0.59)与同基因移植组(1.32%±0·75%,1.31±0.29)、阴性对照组(1.34%±0.18%,1.44±0.42)比较,也无显著性差异(P>0.05)。结论异种(猪)角膜基质免疫原性低,是一种理想的角膜体外重建载体材料。 展开更多

关键词 角膜基质 免疫原性 角膜重建 生物载体 异种移植

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角膜内皮细胞生理和再生特性研究进展 被引量：6

13

作者 陈根云 吴静 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期279-281,共3页

角膜内皮细胞膜上的Na+-K+-ATP酶、水通道蛋白-1和各类离子通道相辅相成,发挥离子和水液的跨膜转运功能,共同维持角膜的透明状态。影响角膜内皮细胞生理功能的因素,主要是通过影响Na+-K+-ATP酶、离子通道和水通道蛋白而发挥作用的。人... 角膜内皮细胞膜上的Na+-K+-ATP酶、水通道蛋白-1和各类离子通道相辅相成,发挥离子和水液的跨膜转运功能,共同维持角膜的透明状态。影响角膜内皮细胞生理功能的因素,主要是通过影响Na+-K+-ATP酶、离子通道和水通道蛋白而发挥作用的。人类角膜内皮细胞再生能力具有年龄差异、区域差异、在体和离体差异,以及是否存在干细胞还存在争议等特点。成年人角膜内皮细胞失去有丝分裂能力,主要与细胞接触抑制、TGFβ-2和p27kip1有密切关系。从分子水平和基因层面调控角膜内皮细胞的生理功能和再生能力,将为角膜病的防治提供新的思路。 展开更多

关键词 角膜内皮细胞 NA^+-K^+-ATP酶 水通道蛋白 离子通道 再生

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泪道黏膜超微结构研究 被引量：2

14

作者 张涛 王继群 +2 位作者 王丽华 王全军 曹庆松 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期378-380,共3页

目的:观察泪道黏膜表面超微结构,明确泪道黏膜表面是否存在纤毛系统。方法:应用扫描电镜对7例正常人鼻泪管黏膜表面的超微结构进行观察。结果:泪道黏膜表面存在皱襞,部分上皮细胞表面有微绒毛样结构,未见类似鼻腔的纤毛系统。结论:泪道... 目的:观察泪道黏膜表面超微结构,明确泪道黏膜表面是否存在纤毛系统。方法:应用扫描电镜对7例正常人鼻泪管黏膜表面的超微结构进行观察。结果:泪道黏膜表面存在皱襞,部分上皮细胞表面有微绒毛样结构,未见类似鼻腔的纤毛系统。结论:泪道黏膜表面具有黏膜皱襞以及部分上皮细胞表面存在微绒毛结构可以推测泪道上皮对泪液可能具有一定的吸收功能。泪道黏膜不具备纤毛系统提示泪道黏膜排泄泪液是通过虹吸和重力作用而无主动排泄功能。 展开更多

关键词 泪道 黏膜 超微结构

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纤维蛋白胶与兔角膜3种细胞构建组织工程细胞片研究 被引量：2

15

作者 梁晓东 陈建苏 +1 位作者 郑佩娥 陈小琳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期797-801,共5页

目的:观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长,探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法:将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3... 目的:观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长,探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法:将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长情况。结果:制备的薄层纤维蛋白胶支架光滑、透明,随培养细胞的生长部分降解,可获得仅带少量纤维蛋白胶的细胞片。角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长良好,可保持生理状态的细胞形态。角膜上皮细胞可形成单层和复层,细胞间连接紧密。角膜内皮细胞呈圆形或多角形,细胞大小一致,排列紧密。角膜基质细胞拉长生长,呈三角形或树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接。结论:体外构建的纤维蛋白胶与角膜3种细胞有组织相容性,纤维蛋白胶有望作为角膜3种细胞的生长载体构建可供移植的组织工程细胞片。 展开更多

关键词 纤维蛋白组织黏着剂 角膜 细胞培养 组织工程

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培养的兔羊膜上皮细胞构建角膜表层移植片的研究 被引量：1

16

作者 金玲 陈剑 +3 位作者 吴静 徐锦堂 周清 赵松滨 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期265-268,共4页

目的应用培养的兔羊膜上皮细胞(AECs)体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。方法取妊娠晚期新西兰大白兔(27～28孕周)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用含血清和表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养液培... 目的应用培养的兔羊膜上皮细胞(AECs)体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,探讨利用AECs重建角膜表层的可行性。方法取妊娠晚期新西兰大白兔(27～28孕周)的羊膜,制成AECs单细胞悬液,用含血清和表皮生长因子(EGF)的DMEM/F12培养液培养、传代,利用免疫组织化学单克隆抗体AE1/AE3、AE5检测培养的AECs中细胞角蛋白ck3/12的表达;将体外培养的2～3代兔AECs种植在新鲜兔角膜基质上,利用气-液界面培养法使之复层化,体外构建复层上皮细胞-角膜基质移植材料,进行光学显微镜和扫描电镜观察,并进行免疫组织化学测定。结果体外培养的兔AECs呈现单克隆抗体AE1/AE3、AE5表达阳性,AECs在新鲜兔角膜基质上能形成形态类似于正常角膜上皮细胞的3～5层复层结构,且复层化后的上皮细胞单克隆抗体AE5表达阳性。结论应用培养的AECs能成功构建类似角膜表层的复层上皮细胞-角膜基质移植材料,AECs可能成为重建角膜表层的一种新的细胞来源。 展开更多

关键词 羊膜上皮细胞 角膜上皮细胞 细胞培养 气-液界面培养法

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CM-Dil与DAPI联合标记人羊膜上皮细胞的可行性研究 被引量：1

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作者 王黎 周清 +2 位作者 杨艳 陈剑 徐锦堂 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第11期1001-1005,共5页

目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，... 目的建立人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cell，HAEC）的体外培养方法，并探讨氯甲基苯甲酰胺（CM—Dil）与4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）对HAEC进行联合标记示踪的可行性。方法运用酶消化法获取HAEC，收集第2代细胞，流式细胞仪检测CD29、CD34、CD44、CIM5和CD105的表达率，SP免疫化学法鉴定HAEC。CM—Dil与DAPI对HAEC进行体外标记，荧光倒置显微镜下观察1d、7d和14d的标记情况，台盼蓝染色检测细胞活力，CCK-8法检测细胞增殖以明确联合标记对体外培养HAEC生长特性的影响。结果HAEC贴壁培养后呈扁平多角形，CD29、CD34、CD44、CD45和CD105的阳性率分别为99．64％、2．21％、32．41％、0．84％、36．70％，细胞角蛋白Keratin阳性表达。HAEC在cM—Dil和DAPI联合标记1d后，荧光显微镜下可观察到细胞膜和细胞核分别在不同波长下呈红色和蓝色荧光，标记率为100％；14d后，经传代培养的HAEC荧光强度与1d时相近，细胞形态无改变。台盼蓝染色显示标记细胞存活率为96．8％-98．9％，CCK-8检测标记细胞的增殖力较未标记组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CM—Dil和DAPI可有效标记HAEC，染色简单、无细胞毒性，荧光衰减较慢，可作为HAEC的标记及示踪方法。 展开更多

关键词 人羊膜上皮细胞 氯甲基苯甲酰胺 4’ 6-二脒基-2-苯基吲哚 标记 示踪

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富血小板血浆促猫角膜内皮细胞增殖的研究 被引量：3

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作者 王新法 徐锦堂 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第12期1133-1136,共4页

目的观察富血小板血浆对体外培养猫角膜内皮细胞增殖的影响。方法采用揭膜法与消化法相结合获取猫角膜原代内皮细胞,培养基采用DMEM培养基(含体积分数10%胎牛血清)。采用二次离心法提取富血小板血浆。在完全培养基中加入体积分数分别为5... 目的观察富血小板血浆对体外培养猫角膜内皮细胞增殖的影响。方法采用揭膜法与消化法相结合获取猫角膜原代内皮细胞,培养基采用DMEM培养基(含体积分数10%胎牛血清)。采用二次离心法提取富血小板血浆。在完全培养基中加入体积分数分别为5%、10%、20%的富血小板血浆培养角膜内皮细胞,以未加入富血小板血浆的完全培养基为对照。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,扫描电镜观察细胞形态变化。结果富血小板血浆体外培养角膜内皮细胞时间越长,其促增殖作用越明显,与对照组比较差异均有显著统计学意义意义(均为P<0.01),且随着富血小板血浆含量的增加,角膜内皮细胞增殖越明显,呈剂量依赖性。扫描电镜检测表明,与对照组相比,PRP作用组角膜内皮细胞表面可见丰富的微绒毛,且随着富血小板血浆含量的增加,微绒毛越丰富。结论富血小板血浆能明显促进体外培养猫角膜内皮细胞增殖。 展开更多

关键词 富血小板血浆 猫 角膜内皮细胞 细胞培养 细胞增殖

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脱细胞角膜材料的生物相容性研究 被引量：1

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作者 吴连胜 陈建苏 +4 位作者 徐锦堂 丁勇 郑佩娥 徐国风 黄慧研 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期359-363,共5页

目的研究异种脱细胞猫角膜板层角膜移植术后的组织相容性。方法24只18周龄的健康新西兰白兔随机平均分成3组:A组为脱细胞猫角膜材料→兔板层移植组,B组为猫→兔异种新鲜角膜植片板层移植组,C组为兔→兔同种异体新鲜角膜植片板层移植组... 目的研究异种脱细胞猫角膜板层角膜移植术后的组织相容性。方法24只18周龄的健康新西兰白兔随机平均分成3组:A组为脱细胞猫角膜材料→兔板层移植组,B组为猫→兔异种新鲜角膜植片板层移植组,C组为兔→兔同种异体新鲜角膜植片板层移植组。用扫描电镜观察术后不同时期术眼角膜的组织病理学改变,抽取兔血测定CD4+/CD8+T细胞百分比。结果术后1个月3个组间角膜植片炎症反应指数组间比较差异均无统计学意义;2个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个月A组与B组、A组与C组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3个组间术后同期7、15、30d兔外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞活化率差异均无统计学意义(P>0.05)。组织切片显示术后3个月内,B、C两组角膜植片炎症反应轻,植片内皮细胞吸收,组织结构基本正常。A组角膜植片炎症反应显著,结构较紊乱,新生血管增生。扫描电镜可见B、C2组角膜上皮结构基本正常,细胞连接较好。A组扫描电镜可见有上皮缺损。结论脱细胞处理的异种猫角膜移植后生物相容性较新鲜角膜差,免疫反应无显著差异。 展开更多

关键词 角膜 脱细胞生物材料 板层角膜移植 异种角膜移植 免疫反应

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不同部位角膜上皮细胞体外增殖性的对比研究 被引量：1

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作者 吴静 徐锦堂 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 1998年第4期36-38,68,共4页

为观察角膜缘、角膜周边及角膜中央部上皮细胞体外增殖的规律，确定角膜干细胞以选取体外培养角膜上皮细胞的部位。应用溴代脱氧尿嘧啶（Ｂｒｄｕ，胸腺嘧啶的类似物）掺入ＤＮＡ合成，抗－Ｂｒｄｕ单克隆免疫荧光抗体记标记细胞法，在... 为观察角膜缘、角膜周边及角膜中央部上皮细胞体外增殖的规律，确定角膜干细胞以选取体外培养角膜上皮细胞的部位。应用溴代脱氧尿嘧啶（Ｂｒｄｕ，胸腺嘧啶的类似物）掺入ＤＮＡ合成，抗－Ｂｒｄｕ单克隆免疫荧光抗体记标记细胞法，在流式细胞仪（ＦＡＣＳｔａｒｐｌｕｓ）上检测体外培养的每一代角膜中央部、周边部及角膜缘上皮细胞增殖的情况。结果显示从第一代开始，角膜缘角膜周边角膜中央部上皮细胞增殖率逐渐递减；角膜缘、角膜周边、角膜中央部细胞代数依次减少；原代角膜缘及角膜周边部上皮细胞增殖率经统计学处理，无显著性差异（Ｐ＞００５）；结论：（１）角膜缘部细胞增殖潜力大；（２）角膜缘上皮细胞群中存在一定数量的长周期细胞。因此，角膜缘有角膜干细胞存在。 展开更多

关键词 角膜上皮细胞 增殖 传代培养 体外增养 角膜移植

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