MTT法在抗真菌药敏实验中的应用 被引量：18

1

作者 张晶 林晨 +6 位作者 岑颖洲 沈伟哉 刑莹莹 江振友 袁桂秀 韦静 李小兰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2003年第6期36-40,共5页

　目的:研究MTT法在抗真菌药敏实验中的应用。方法:采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐方案测定两性霉素B和伊曲康唑对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌)的最低抑菌浓度(MIC)... 　目的:研究MTT法在抗真菌药敏实验中的应用。方法:采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐方案测定两性霉素B和伊曲康唑对5种常见真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子丝菌和石膏样小孢子癣菌)的最低抑菌浓度(MIC),终点判定分别采用NC CLS推荐的直接观察法和MTT法,对两法进行比较。结果:MTT法与常规直接观察法进行MIC终点判定所得结果具有很好的一致性。MTT法测得的A值与接种菌量具有正相关性。两性霉素B与伊曲康唑对丝状真菌和念珠菌都具有很好的抑制作用,MTT法测得的A值随药物浓度的增加而显著降低。结论:MTT法较之常规直接观察法结果更为客观、准确,且可量化,因而可以很好的替代肉眼观察法来判定真菌药敏试验的终点。 展开更多

关键词 真菌药敏实验 MTT法 最低抑菌浓度 NCCLS方案

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枸骨叶抗真菌作用初探 被引量：13

2

作者 张晶 林晨 +1 位作者 岑颖洲 沈伟哉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1562-1562,共1页

关键词 枸骨叶 抗真菌作用 瑶药 提取物 正丁醇 乙酸乙酯

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瑶药枸骨叶不同溶剂组分体外抑菌活性比较 被引量：14

3

作者 邢莹莹 岑颖洲 +2 位作者 王一飞 林晨 张晶 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第1期119-121,共3页

　采用微量稀释法测定瑶药枸骨叶5种不同溶剂组分的最小抑菌浓度(MIC),探讨枸骨叶不同溶剂提取物的体外抑菌活性.结果表明枸骨叶中的3种溶剂组分均显示一定的抑菌效果,其乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的抑菌效果最为显... 　采用微量稀释法测定瑶药枸骨叶5种不同溶剂组分的最小抑菌浓度(MIC),探讨枸骨叶不同溶剂提取物的体外抑菌活性.结果表明枸骨叶中的3种溶剂组分均显示一定的抑菌效果,其乙酸乙酯萃取物对金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的抑菌效果最为显著,醇提物和正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌也显示较好的抑菌效果. 展开更多

关键词 枸骨叶 广东连南 抑菌活性

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热灭活和紫外线照射灭活结核分枝杆菌的实验效果分析 被引量：5

4

作者 赖赛麟 李海成 +8 位作者 王威 孙毅凡 郭卉欣 陈涛 江勇 钱明 江振友 周琳 钟球 《中国防痨杂志》 CAS 2013年第8期621-623,共3页

我国卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中结核分枝杆菌被列为第二类病原微生物（危害程度为Ⅲ级）,属高致病性病原微生物[1]。实验室研究课题中,大部分涉及到结核分枝杆菌的操作,实验室生物安全是首先要解决的问题。至今,已有... 我国卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中结核分枝杆菌被列为第二类病原微生物（危害程度为Ⅲ级）,属高致病性病原微生物[1]。实验室研究课题中,大部分涉及到结核分枝杆菌的操作,实验室生物安全是首先要解决的问题。至今,已有一些关于实验室工作人员患结核病的报道,其中呼吸道吸入感染是实验室感染的最主要类型[2]。 展开更多

关键词 实验室生物安全 结核分枝杆菌 紫外线照射 热灭活 病原微生物 实验室工作人员 实验室感染 危害程度

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重组骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨复合物应用于拔牙窝修复的动物实验研究 被引量：2

5

作者 孔卫东 林巍 +2 位作者 李小兰 邓国珍 沈丽佳 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2001年第2期75-79,共5页

目的 :探讨重组骨形成蛋白 - 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein ,rhBMP - 2 ) /珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )与珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :12只成年狗作为实验动物 ,拔除两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并... 目的 :探讨重组骨形成蛋白 - 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein ,rhBMP - 2 ) /珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )与珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :12只成年狗作为实验动物 ,拔除两侧上颌第 2及第 3切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚骨作为对照。并于植骨后 4、8、12周取材 ,采用组织学观察及计算机图像分析方法 ,观察比较两种植入材料在拔牙窝内的骨修复能力及修复效果。结果 :复合骨具有较强的骨修复作用 ,植入牙槽窝后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断形成 ,12周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示复合骨组新生骨形成的比值明显高于珊瑚骨组 ,两组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5)。结论 :复合骨在拔牙窝中的骨修复能力和修复效果明显优于珊瑚骨。 展开更多

关键词 骨形成蛋白-2 珊瑚人工骨 拔牙窝 修复

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登革病毒促进人树突状细胞分泌TNF-α、IL-6、IFN-γ的动态观察 被引量：3

6

作者 史毓杰 江振友 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1203-1206,共4页

目的:研究登革病毒(DV)对人树突状细胞(DC)产生细胞因子的影响。方法:人外周新鲜血常规分离单核细胞,经细胞因子GM-CSF、IL-4诱导培养DC,形态学特征、细胞表型和淋巴细胞刺激能力鉴定。用登革病毒2型感染DC,于作用后6、12、24、48、72h... 目的:研究登革病毒(DV)对人树突状细胞(DC)产生细胞因子的影响。方法:人外周新鲜血常规分离单核细胞,经细胞因子GM-CSF、IL-4诱导培养DC,形态学特征、细胞表型和淋巴细胞刺激能力鉴定。用登革病毒2型感染DC,于作用后6、12、24、48、72h分别收集上清液和细胞,间接免疫荧光法检测细胞上病毒抗原表达,ELISA法检测登革病毒感染后细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ水平的动态变化。结果:人外周血经GM-CSF、IL-4诱导培养1周即可得到典型树突状细胞。间接免疫荧光法证明感染的DC胞浆和胞膜上携带登革病毒抗原,DV感染使DC分泌TNF-α、IL-6能力显著大于对照组(P<0.01),但其分泌IFN-γ的能力无明显改变。结论:树突状细胞是登革病毒的靶细胞,登革病毒感染可促进树突状细胞分泌TNF-α、IL-6。树突状细胞可能参与机体抗登革病毒感染的免疫防御机制。 展开更多

关键词 登革热病毒 树突细胞 细胞因子类

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重组人骨形成蛋白-2-珊瑚人工骨复合物在拔牙窝牙槽骨修复中的作用 被引量：1

7

作者 林巍 李小兰 +2 位作者 孔卫东 邓国珍 沈丽佳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第8期734-736,共3页

目的 :探讨重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :拔除 12只成年狗两侧上颌第二及第三切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于... 目的 :探讨重组人骨形成蛋白 - 2与珊瑚人工骨复合物 (复合骨 )在拔牙窝修复中的作用。方法 :拔除 12只成年狗两侧上颌第二及第三切牙 ,并去除牙槽窝之间的牙槽间隔 ,一侧随即植入复合骨 ,对侧植入珊瑚人工骨 (珊瑚骨 )作为对照。并于植入后 4、8、12周取材 ,采用组织学观察、图像分析和 [99Tcm]-MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果 :复合骨植入牙槽骨后 ,材料被逐渐降解吸收 ,新骨不断生成 ,12周后 ,植入材料完全被成熟的骨组织取代 ;图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组(P <0 0 5 ) ;4和 8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组 ,12周两组核素浓聚程度差异不明显。结论 展开更多

关键词 骨形成蛋白 移植存活 拔牙 牙槽骨修复 珊瑚人工骨

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HCV-C蛋白抗原在人肝细胞株中的表达和鉴定 被引量：1

8

作者 李君武 许小亮 李科 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期423-426,共4页

目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其... 目的:构建HCV-C蛋白基因的真核表达载体,并在正常人肝细胞HL-7702中表达与鉴定。方法:从含有丙肝病毒全长基因的重组质粒pBRTM/HCV1-3011质粒中,扩增HCVcore基因片段,构建pcDNA3.1(-)/core重组真核表达质粒。然后采用阳离子多聚体将其转染人正常肝细胞HL-7702,用免疫组化染色(SP)法检测HCVC蛋白的表达,并通过Westernblot进行鉴定。结果:所克隆的HCV-C基因片段的大小为573bp,序列正确。成功地构建了pcDNA3.1(-)/core重组表达质粒。以其转染HL-7702细胞后,用SP免疫组化染色法检测到了C蛋白的表达。Westernblot显示,其相对分子质量(Mr)约为21000。结论:构建的真核表达载体pcD-NA3.1(-)/core在人肝细胞中能有效表达HCV-C蛋白,为以后相应抗体的制备打下了基础。 展开更多

关键词 HCV C蛋白 真核表达

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γ干扰素活化的THP-1源巨噬细胞杀伤荧光BCG的实验研究 被引量：1

9

作者 赖赛麟 孙毅凡 +3 位作者 陈涛 杨晓 周琳 钟球 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第5期362-368,共7页

目的研究γ干扰素（IFN-γ）活化的THPI源巨噬细胞对BCG的杀伤作用，并探讨其杀伤机制是否与自噬有关。方法Phorbol-12-myristate-13-acetate（PMA，也称佛波酯）诱导THP-1分化成巨噬细胞。牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI（multi... 目的研究γ干扰素（IFN-γ）活化的THPI源巨噬细胞对BCG的杀伤作用，并探讨其杀伤机制是否与自噬有关。方法Phorbol-12-myristate-13-acetate（PMA，也称佛波酯）诱导THP-1分化成巨噬细胞。牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI（multiplicityofinfection，细菌数与细胞数的比例）10：1感染未活化（Control组）、IFN7活化（IFN-γ组）、Rapamycin诱导自噬（Rapa组）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬（IFN-γ＋3-MA组）4组不同预处理的巨噬细胞。感染48h后，超纯水裂解细胞，收集裂解液和培养上清混合，相同比例取各组混合液10μl，连续10倍稀释3次涂7H10平板培养基，置37℃生化培养箱培养，第3至4周观察记录菌落数，计算生存率Econtrol组的菌落数为分母，其他组（包括control组）的菌落数为分子相除得到的数值为生存率]。同时在感染过程的不同时间点裂解细胞提取总蛋白，以Westernblot方法检测自噬标志蛋白LC3B的表达，监测细胞自噬水平的变化。实验结果数据以3次重复实验数据的“x±s”形式展示（Westernblot结果除外，只采用其中-个结果数据为代表）。用SPSS17．0软件进行统计分析：巨噬细胞贴壁率比较和凋亡率比较用两独立样本t检验；巨噬细胞活化后不同时间点分泌的TNF-α浓度比较和BCG感染各组巨噬细胞后的生存率比较用One-WayANOVA检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果BCG感染各组巨噬细胞48h后的生存率：Control组为（100％±0％），IFN7组（45Yo±3％），Rapa组（48％±3％），IFN-γ＋3-MA组（91％±2％）。BCG生存率经One-WayANOVA检验，与Control组（未活化组）比较：IFN-γ组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；Rapa组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；IFN-γ＋3MA组BCG生存率无下降（P=0．13），细胞自噬水平无增高。结论BCG感染巨噬细胞，或者说巨噬细胞吞噬BCG，两者的相互作用微妙而复杂。巨噬细胞在IFN7活化期间遭遇BCG，可以明显杀伤BCG，杀伤机制与自噬有关。 展开更多

关键词 卡介苗 干扰素Ⅱ型 巨噬细胞 自噬 细胞系 肿瘤

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携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定

10

作者 李君武 宫君原 +2 位作者 刘鑫 叶秋萍 黄清华 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期1-6,共6页

构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6... 构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 乙肝病毒 大包膜蛋白L基因 Esat6基因 globulin-l

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细胞表面唾液酸及其连接方式对乳腺癌细胞黏附的影响

11

作者 王晓玉 林绍强 +2 位作者 李君武 Wolfgang Kemmner 丁彦青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期742-746,共5页

目的研究肿瘤细胞总唾液酸及α2,6-连接唾液酸对乳腺癌细胞MDA-MB435黏附力的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-435转染顺义或反义α2,6唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA,以黑接骨木凝集素SNA筛选高、低表达α2,6唾液酸细胞克隆,检测各转染细胞的... 目的研究肿瘤细胞总唾液酸及α2,6-连接唾液酸对乳腺癌细胞MDA-MB435黏附力的影响。方法乳腺癌细胞MDA-MB-435转染顺义或反义α2,6唾液酸转移酶(ST6Gal-I)cDNA,以黑接骨木凝集素SNA筛选高、低表达α2,6唾液酸细胞克隆,检测各转染细胞的同源凝集作用,并比较唾液酸酶处理前后肿瘤细胞对胶原IV黏附力的变化。结果顺义转染克隆细胞-细胞之间的同源黏附能力下降,与胶原IV的黏附增强;反义转染克隆细胞-细胞之间同源黏附能力增强,而与胶原IV的黏附降低。唾液酸酶处理后肿瘤细胞与胶原IV的黏附力下降至未处理前的31%￣57%。结论乳腺癌MDA-MB435细胞表面唾液酸及α-2,6唾液酸化对肿瘤细胞的黏附有重要影响。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 唾液酸转移酶 细胞外基质 细胞黏附 肿瘤转移

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碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠硬腭穿孔的愈合

12

作者 孔卫东 林巍 +2 位作者 李小兰 沈丽佳 邓国珍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期451-453,I000,共4页

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对硬腭穿孔愈合的影响。方法：在大鼠硬腭部制作 早期硬腭穿孔动物模型，外用ｂＦＧＦ治疗硬腭穿孔。采用肉眼观察、病理学检查的方法进行评价。结果：肉眼观 察发现ｂＦＧＦ组伤口愈合率... 目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对硬腭穿孔愈合的影响。方法：在大鼠硬腭部制作 早期硬腭穿孔动物模型，外用ｂＦＧＦ治疗硬腭穿孔。采用肉眼观察、病理学检查的方法进行评价。结果：肉眼观 察发现ｂＦＧＦ组伤口愈合率明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；病理学检查表明ｂＦＧＦ能刺激肉芽组织的增长，成纤维 细胞分裂增殖；ｂＦＧＦ组成纤维细胞的核仁形成区嗜银蛋白颗粒数目为３．７３±０．５２，对照组为２．１１±０．３１（Ｐ＜ ０．０５）。结论：ｂＦＧＦ有助于肉芽组织的生长，具有显著促进硬腭穿孔创伤愈合的作用，有助手硬腭穿孔的修复。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子 伤口愈合 大鼠 硬腭穿孔

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携带结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体的构建及鉴定

13

作者 李君武 刘艳 +1 位作者 黄清华 叶秋萍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期1-4,共4页

构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经... 构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。重组质粒双酶切可见0.8bp和10kb的两条特异性条带,与预期大小相一致。重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致。成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Ag85B基因 globulin-1

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登革病毒受体的研究进展

14

作者 肖瑞 江振友 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期97-100,共4页

登革病毒(dengue virus,DEN virus)受体研究一直是登革病毒研究的热点之一,已提出的可能受体有蛋白质类、Fc受体类、乙酰硫酸肝素、与CD14相关的细胞表面结构(CD14-associated cell surface structure)等。近来,有关登革病毒在多种易感... 登革病毒(dengue virus,DEN virus)受体研究一直是登革病毒研究的热点之一,已提出的可能受体有蛋白质类、Fc受体类、乙酰硫酸肝素、与CD14相关的细胞表面结构(CD14-associated cell surface structure)等。近来,有关登革病毒在多种易感细胞上特异性受体成分的研究取得重大进展,已从多种登革病毒易感细胞株中分离出多个与登革病毒表面蛋白区域结合的受体组分:如热休克蛋白(heat-shock protein,HSP)、GRP78(Bip)、LAMR1、DC-SIGN等。本文就登革病毒相关细胞受体的最新研究进展作一综述。 展开更多

关键词 登革热病毒 病毒受体 综述文献 细胞表面结构

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妊娠相关糖蛋白对E型选择素介导的内皮细胞黏附作用研究

15

作者 王晓玉 林绍强 +2 位作者 屈洋 Jeschke U Stahn R 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1155-1158,共4页

目的:本实验旨在探讨高度纯化的羊水和孕妇血清人绒毛膜促性腺激素(human chrionic gonadotropin,hCG)和glycodelin对E型选择素介导的HepG2细胞与内皮细胞黏附过程的影响。方法:以色谱仪分离和纯化羊水和血清的hCG和glycodelin,进一步测... 目的:本实验旨在探讨高度纯化的羊水和孕妇血清人绒毛膜促性腺激素(human chrionic gonadotropin,hCG)和glycodelin对E型选择素介导的HepG2细胞与内皮细胞黏附过程的影响。方法:以色谱仪分离和纯化羊水和血清的hCG和glycodelin,进一步测定[51Cr]标记的肝癌细胞系-HepG2细胞在不同来源、不同浓度hCG和glycodelin作用下和经过白细胞介素-1β(IL-1β)刺激后表达E型选择素的内皮细胞的黏附能力,从而评价这两种糖蛋白对E型选择素介导的内皮细胞黏附过程的影响。结果:羊水和血清hCGs能有效抑制E型选择素介导的内皮细胞黏附,其抑制作用呈浓度依赖关系,IC50分别为1·5×10-7mol/L和2·1×10-7mol/L,相对抑制力分别为纯四糖结构sialyl-Lewisx(sLex)的1·5×104和1·1×104倍;羊水和血清glycodelin同样有此作用,其IC50分别为3·2×10-6mol/L和6·3×10-6mol/L,相对抑制力分别为sLex的7·2×102和3·7×102倍;纯四糖结构sialyl-Lewisx(sLex)的IC50为2·3×10-3mol/L。结论:妊娠相关糖蛋白hCG和glycodelin是E型选择素介导的内皮细胞黏附的有效抑制物。 展开更多

关键词 人绒毛膜促性腺激素 GLYCODELIN E-选择素 细胞粘附

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变性高效液相色谱法在α-血红蛋白稳定蛋白基因检测中的应用

16

作者 王志鹏 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期335-341,共7页

建立了采用变性高效液相色谱（DHPLC）对α-血红蛋白稳定蛋白（AHSP）基因进行基因分型和突变筛查的新方法。将AHSP基因序列分成6个片段,因第一、二、四、六个片段均含有1~2个常见单核苷酸多态性（single nu-cleotide polymorphism,SNP... 建立了采用变性高效液相色谱（DHPLC）对α-血红蛋白稳定蛋白（AHSP）基因进行基因分型和突变筛查的新方法。将AHSP基因序列分成6个片段,因第一、二、四、六个片段均含有1~2个常见单核苷酸多态性（single nu-cleotide polymorphism,SNP）位点,需单个标本分别进行检测;第三、五个片段不含有常见SNP位点,采用DHPLC结合DNA（脱氧核糖核酸）池的方法进行检测。以基因测序为金标准对所建立的AHSP基因检测方法进行方法学评价,结果显示：40个样品的DHPLC检测结果与测序结果之间完全吻合,说明所建立的检测方法能对AHSP基因6种常见SNP进行准确基因分型。应用DHPLC对365个样品的AHSP基因进行检测,发现2个罕见SNP（11 810G〉A和12 802C〉T）;同时还发现2个错义突变（AHSP D29V和AHSP V56G）,AHSP D29V突变为新突变,AH-SP V56G为罕见突变。结果表明采用DHPLC法可有效地对AHSP基因进行基因分型和突变筛查。 展开更多

关键词 变性高效液相色谱 α-血红蛋白稳定蛋白基因 基因分型 突变筛查

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南海红树林底泥放线菌Streptomyces sp.H41-26的抗菌化学成分研究 被引量：4

17

作者 李聆莉 许琳雅 +7 位作者 唐晓翠 施珊珊 蒲小明 张英 沈会芳 江振友 林壁润 周光雄 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期J0031-J0036,共6页

目的对分离自我国南海红树林底泥的链霉菌Streptomyces sp.H41-26菌株的发酵物抗菌活性成分进行分离和鉴定。方法对链霉菌Streptomyces sp.H41-26菌株的发酵菌丝体采用95%乙醇提取,醇提取物经乙酸乙酯萃取获得抗菌活性部位,通过ODS开放... 目的对分离自我国南海红树林底泥的链霉菌Streptomyces sp.H41-26菌株的发酵物抗菌活性成分进行分离和鉴定。方法对链霉菌Streptomyces sp.H41-26菌株的发酵菌丝体采用95%乙醇提取,醇提取物经乙酸乙酯萃取获得抗菌活性部位,通过ODS开放柱层析分离和反相高效液相制备纯化。结果分离得到4个化合物,经NMR和MS等波谱学方法分别鉴定为:放线菌素D(1)、放线菌素X_2(2)、放线菌素X_β(3)和放线菌素X_a(4)。结论化合物1~4在0.1mg/mL时,对大肠埃希菌(ATCC8739)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538P)、伤寒沙门菌(ATCC6539)、乙型副伤寒沙门菌(50094)和乙型溶血性链球菌(ATCC32204)具有明显的抗菌活性,其中化合物2在0.01mg/mL时,对除大肠埃希菌外的其他4种细菌抑制效果仍很明显。 展开更多

关键词 红树林 放线菌 放线菌素 抗菌活性

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水飞蓟宾通过上调 P15INK4B 和 P21WAF1／CIP1活化 JNK 诱导人胰腺癌细胞 G1期阻滞及细胞凋亡 被引量：3

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作者 王莉 张晓凯 +4 位作者 张鹏 王娟娟 吴志慧 林晨 蒋建伟 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期21-28,共8页

目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋... 目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05),水飞蓟宾作用于As PC-1细胞48、72 h的IC50浓度分别为224.20、87.25μmol/L;克隆形成抑制实验显示,随着水飞蓟宾浓度增加,As PC-1细胞克隆形成逐渐减少.细胞周期检测结果显示,随着水飞蓟宾浓度的增加,胰腺癌As PC-1细胞出现明显G1期阻滞;水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1表达下降,细胞周期蛋白激酶CDK4、CDK6表达不变,细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达升高,与流式检测的结果相一致.不同浓度水飞蓟宾作用48 h后,出现明显的凋亡细胞群;同时发现Caspase-9、Caspase-3活化降解,Caspase3下游效应蛋白PARP出现切割条带.JNK蛋白表达增加并磷酸化活化,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,BH3-only蛋白Bclxs、Bid、Bim表达增加.结论:水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖,通过诱导P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在G1期,并通过诱导JNK活化激活线粒体细胞凋亡途径,进而诱导胰腺癌As PC-1细胞凋亡. 展开更多

关键词 水飞蓟宾 胰腺癌 AsPC -1 细胞 细胞周期 凋亡

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环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用评估 被引量：26

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作者 陈涛 周琳 +11 位作者 周杰 李海成 江勇 彭东东 周志刚 彭建明 文力 何超文 钱明 孙毅凡 石磊 钟球 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第7期413-418,共6页

目的进行环介导等温扩增法(LAMP法)快速检测结核分枝杆菌的临床验证与应用,评估该方法在结核病临床诊断中的效能。方法选取广东6地市专业结核病防治机构(简称"结防机构")的肺部不同疾病及健康人员的痰标本2129份,分别采用直... 目的进行环介导等温扩增法(LAMP法)快速检测结核分枝杆菌的临床验证与应用,评估该方法在结核病临床诊断中的效能。方法选取广东6地市专业结核病防治机构(简称"结防机构")的肺部不同疾病及健康人员的痰标本2129份,分别采用直接涂片法、罗氏固体培养法及LAMP法检测痰标本中结核分枝杆菌;另广州、汕头两市337例结核病患者的痰标本浓缩处理后进行实时荧光定量(qPCR)及LAMP两种方法检测。结果2129例痰标本中,直接涂片法、罗氏固体培养法和LAMP法的阳性检出率分别为13.2%(282/2129)、21.7%(463/2129)和20.3%(432/2129);同罗氏培养法相比,LAMP法灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为89.1%(432/485)、95.5%(1570/1644)、85.4%(432/506)和96.7%(1570/1623);337例浓缩处理后的痰标本qPCR阳性率为35.0%(118/337),LAMP阳性率为35.9%(121/337);LAMP法同直接涂片法检测、罗氏固体培养法和qPCR法比较,检测结果实际一致率分别为87.9%(Kappa值=0.612)、96.1%(Kappa值=0.89)和91.4%(Kappa值=0.812)。结论LAMP法用于痰标本中结核分枝杆菌检测,其效能同罗氏培养法及qPCR法相当,同直接涂片法相比,LAMP法能够大幅提高阳性检出率,具有很好的临床应用和推广前景。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 核酸扩增技术

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结核抗原诱导的人外周血细胞因子调控网络在结核病诊断中的价值 被引量：2

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作者 陈涛 陈亮 +13 位作者 李海成 郭卉欣 林东子 王威 李玉美 余丽 黎贞燕 孙琦 黄新春 李国周 周杰 赵梅桂 钟球 周琳 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第8期827-835,共9页

目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI... 目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI者的筛查，以及这些细胞因子之间的相互调控网络关系。方法40份健康人（简称“健康组”）血液样本，40份确诊为活动性肺结核患者（简称“肺结核组”）的血液样本，40份LTBI者（简称“LTBI组”）的血液样本；通过结核分枝杆菌特异性抗原[早期分泌抗原靶6（ESAT6）和培养滤液蛋白10（CFP10）]进行刺激；通过人细胞因子芯片对刺激后的细胞因子表达变化进行检测；并筛选显著变化的因子，进行细胞因子调控网络构建。结果在肺结核组患者的外周血中嗜酸粒细胞趋化蛋白（CCI。）1（I-309）、趋化因子CXCLgE又称为Mig，即monokineinducedbyIFN-7（IFN-7诱导的单核因子）]、白细胞介素（IL）10、IL6、集落刺激因子（CSF）2、CSF3、IL8、IL1α、IL7、转化生长因子（TGF）-β1、CCL2、IL2、IL13、肿瘤坏死因子（TNF）α等因子在结核特异性抗原刺激后显著上调（2．06倍至3．18倍）；而在健康组和LTBI组当中却没有显著上调。在肺结核组和LTBI组患者的外周血中CCL3、IL1b、CCL8、IFN-γ、CXCL10因子在结核分枝杆菌特异性抗原刺激后明显上调（2．44倍至11．56倍）；而在健康组中这些因子没有明显的上调。趋化因子CCL4和巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α因子在健康组、LTBI组和肺结核组外周血中，经过结核分枝杆菌特异性抗原刺激后，表达都明显上调。细胞因子调控网络显示，这些表达上调的因子，主要集中于IFNγ和IL1α因子调控网络中。结论CXCL10（IP10）、CCL3、CCL8和ILII？因子可能比IFNγ更适合用于结核病或LTBI者的筛查。 展开更多

关键词 结核 肺/诊断 细胞因子类 抗原 细菌 细菌蛋白质类 生物学标记

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