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单增李斯特菌免疫磁珠的制备研究 被引量:16
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作者 徐金亭 李志清 +2 位作者 向军俭 唐勇 杨红宇 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期323-327,共5页
目的:制备可高效、特异地分离单增李斯特菌的免疫磁珠。探讨羧基修饰磁珠与多克隆抗体的不同偶联条件和免疫磁珠捕获单增李斯特菌的能力。方法:以单增李斯特菌作为抗原,免疫新西兰兔,获得兔源多克隆抗体,鉴定其与单增李斯特菌体的结合能... 目的:制备可高效、特异地分离单增李斯特菌的免疫磁珠。探讨羧基修饰磁珠与多克隆抗体的不同偶联条件和免疫磁珠捕获单增李斯特菌的能力。方法:以单增李斯特菌作为抗原,免疫新西兰兔,获得兔源多克隆抗体,鉴定其与单增李斯特菌体的结合能力;选择6种不同的偶联缓冲溶液,设置了6个主要偶联时间和6组偶联温度,通过比较磁珠与抗体偶联后上清中剩余的抗体量来确定最佳偶联条件。结果:制备的多克隆抗体效价为1.3×105,该抗体与单增李斯特菌体有较好的结合,抗体与1mg羧基修饰磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水吗啉乙磺酸缓冲溶液(MES)中,37℃偶联2h,偶联抗体的量为160μg;制得的免疫磁珠的捕获率可达77.0%。结论:获得羧基磁珠与抗体偶联的最佳条件,该免疫磁珠用于食品中单增李斯特菌的检测,与常规的平皿增菌培养显色法比较,检测时间至少缩短20h。 展开更多
关键词 免疫磁珠 单增李斯特菌 偶联
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自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的检测 被引量:4
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作者 向军俭 漆秋兰 +4 位作者 邓宁 王彤歌 王宏 唐勇 江振友 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期625-627,共3页
目的:探索自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况。方法:通过对封闭条件、酶标板类型及抗原用量等条件进行优化,建立了检测自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF抗体的ELISA检测方法。采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫性... 目的:探索自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况。方法:通过对封闭条件、酶标板类型及抗原用量等条件进行优化,建立了检测自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF抗体的ELISA检测方法。采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫性疾病患者的血清进行了bFGF自身抗体IgG和IgM的检测。结果:在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、慢性肾炎、皮肌炎(DM)、不明原因发热(FOU)和特发性血小板减少紫癜(IPT)等患者血清中检测到了高滴度的抗bFGF的IgG、IgM自身抗体,各组的平均值和阳性率均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:在自身免疫性疾病患者体内广泛存在着bFGF的自身抗体,对bFGF自身抗体的调查研究将为自身免疫性疾病的机制的探讨奠定基础。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 自身抗体 ELISA 自身免疫性疾病
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抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析 被引量:9
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作者 向军俭 唐琦 +5 位作者 罗辉武 江天久 邓宁 唐勇 杨红宇 凌钦婕 《生态科学》 CSCD 2005年第2期132-135,共4页
制备抗麻痹性贝毒GTX2,3单克隆抗体。利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。免疫小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。将筛选的阳性... 制备抗麻痹性贝毒GTX2,3单克隆抗体。利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。免疫小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。将筛选的阳性细胞株制备腹水。获得三株稳定分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株F4、F10、G9。间接ELISA法检测F10细胞株腹水抗体效价为1.4×10-5。半抗原GTX2,3与载体蛋白偶联后,作为免疫原,可制备高滴度的抗GTX2,3抗血清和单克隆抗体。该抗体对于藻毒素具有高特异性和高亲和力,可用于污染海产品的麻痹性贝毒的检测。 展开更多
关键词 GTX2 3 麻痹性贝毒 单克隆抗体
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双抗体夹心ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子 被引量:2
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作者 徐晓鹏 向军俭 +4 位作者 李贵生 邓宁 唐勇 王宏 杨红宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期268-269,共2页
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 ELISA
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河虾主要过敏组分的分离、纯化、鉴定及其致敏性分析 被引量:10
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作者 黄建芳 林婷婷 +1 位作者 向军俭 杨红宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期444-446,452,共4页
目的:鉴定河虾中的过敏原组分,对主要过敏原组分进行纯化并分析其致敏性强弱。方法:用磷酸盐缓冲液(PBS)制备河虾蛋白粗提液,将其与11例虾过敏症患者血清IgE进行Westernblot,鉴定各种分子量的河虾过敏原组分;河虾蛋白粗提液用硫酸铵沉淀... 目的:鉴定河虾中的过敏原组分,对主要过敏原组分进行纯化并分析其致敏性强弱。方法:用磷酸盐缓冲液(PBS)制备河虾蛋白粗提液,将其与11例虾过敏症患者血清IgE进行Westernblot,鉴定各种分子量的河虾过敏原组分;河虾蛋白粗提液用硫酸铵沉淀、G-50凝胶层析和阴离子交换层析等方法纯化其主要过敏原组分,再用虾过敏患者血清IgE进行Westernblot鉴定;并将纯化的相对分子质量(Mr)为21000、36000、800003种主要过敏原组分与虾过敏症患者血清IgE做间接ELISA,以分析其致敏性强弱。结果:West-ernblot结果显示,河虾蛋白粗提液出现9个阳性条带;其中3种主要过敏原组分21000、36000、80000与患者血清的反应率为36.4%,63.6%,45.5%;将这3种Mr的蛋白组分分别做间接ELISA,结果显示21000、36000、80000过敏原组分与11例虾过敏症患者的混合血清IgE结合的吸光值都显著高于河虾蛋白粗提液。结论:河虾中至少存在9个过敏原组分;21000、36000、8000等3种蛋白组分为河虾的主要过敏原组分,其中以36000过敏原组分致敏率和致敏性最强。进一步研究将探明21000、36000、80000等3种河虾过敏原组分的共同抗原表位,以期为明确食物过敏原检测、临床诊断和虾过敏原疫苗设计提供基础。 展开更多
关键词 河虾 过敏原 食物过敏
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牛乳中主要过敏原组分的分离纯化及鉴定 被引量:9
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作者 毛露甜 向军俭 张在军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期305-308,共4页
目的:分离纯化并鉴定牛乳中引起过敏反应的主要致敏组分。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)分析了脱脂乳和乳清的蛋白组分,用饱和硫酸铵分段盐析-DEAE离子交换柱层析纯化过敏原蛋白,脱脂乳和乳清蛋白皮下注射Balb/c小鼠获得高效... 目的:分离纯化并鉴定牛乳中引起过敏反应的主要致敏组分。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)分析了脱脂乳和乳清的蛋白组分,用饱和硫酸铵分段盐析-DEAE离子交换柱层析纯化过敏原蛋白,脱脂乳和乳清蛋白皮下注射Balb/c小鼠获得高效价特异性IgE抗血清用于免疫印迹分析。结果:免疫印迹分析显示β-乳球蛋白(β-Lg)是引起牛乳过敏的主要过敏原,建立了牛乳过敏小鼠模型。结论:明确了牛乳过敏的主要过敏组分,对牛乳过敏症的诊断治疗以及无过敏原牛乳的制备提供了实验依据。 展开更多
关键词 牛乳 食物过敏原 免疫印迹 DEAE离子交换层析
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bFGF mRNA、bFGF及FGFR1与神经胶质瘤细胞恶性行为的相关性 被引量:3
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作者 向军俭 秦艳芳 +2 位作者 邓宁 王宏 杨红宇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期440-444,共5页
目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、成纤维细胞生长因子受体1(fibro-blastgrowthfactorreceptor1,FGFR1)及bFGFmRNA三者与肿瘤细胞(神经胶质瘤细胞)恶性行为的相关性。方法:设计、合成bFGF反义寡核苷... 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、成纤维细胞生长因子受体1(fibro-blastgrowthfactorreceptor1,FGFR1)及bFGFmRNA三者与肿瘤细胞(神经胶质瘤细胞)恶性行为的相关性。方法:设计、合成bFGF反义寡核苷酸,转染SWO-38神经胶质瘤细胞,用原位杂交、免疫组化及图像分析、间接ELISA、细胞增殖MTT法、细胞集落形成等方法,分别检测转染前后bFGF、FGFR1、bFGFmRNA表达的改变,观察不同剂量bFGF反义寡核苷酸转染后细胞生长、集落形成的变化。结果:大部分细胞bFGFmRNA和细胞生长可被bFGF反义寡核苷酸抑制,细胞生长的抑制呈浓度依赖性,最高抑制率可达到48%,其抑制作用可被外源性bFGF完全逆转;反义寡核苷酸处理组大部分细胞表达的FGFR1减少、细胞分泌的bFGF明显减少,集落形成抑制率达35%;外源性bFGF的逆转作用为8%。正义组和阴性对照组均无以上的明显改变。结论:揭示了反义寡核苷酸可特异性抑制bFGFmRNA和肿瘤细胞的bFGF合成表达,但不能拮抗外源性bFGF结合bFG-FR的生物学作用;FGFR1随肿瘤细胞SWO-38中bFGF表达水平的降低而下调。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 BFGF FGFR1 mRNA 肿瘤
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