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固相转染HPV16-siRNA对荷宫颈癌细胞SiHa小鼠瘤体体积及P53、P16表达的影响 被引量：6
1
作者 廖百花 冯亦军 +1 位作者 曾禄贤 肖小敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期509-513,共5页
目的:观察靶向基因治疗后不同时点荷宫颈癌细胞小鼠HPV16-DNA、瘤体体积、P53及P16蛋白的变化,探讨在体固相转染HPV16-siRNA的有效性。方法:采用SiHa细胞皮下注射建立荷宫颈癌细胞SCID小鼠模型。制备HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝... 目的:观察靶向基因治疗后不同时点荷宫颈癌细胞小鼠HPV16-DNA、瘤体体积、P53及P16蛋白的变化,探讨在体固相转染HPV16-siRNA的有效性。方法:采用SiHa细胞皮下注射建立荷宫颈癌细胞SCID小鼠模型。制备HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶。将40只荷宫颈癌细胞SCID小鼠随机分为对照组8只和研究组32只和研究组使用HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶进行基因治疗,对照组仅使用Lipo2000-卡波姆凝胶处理;分别于治疗后4 d、8 d、12 d、16 d处死小鼠,每个时点研究组处死8只、对照组处死2只。PCR检测两组小鼠瘤体中HPV16-DNA滴度,测各时点的瘤体体积,常规病理切片检测肿瘤细胞形态,免疫组化检测P16及P53的表达。结果:(1)研究组治疗后8 d及12 d时点瘤体内HPV16-DNA明显降低,与对照组之间的差异显著(P<0.05),4 d及16 d 2个时点与对照组之间的差异不显著(P>0.05);(2)治疗后12 d瘤体平均体积明显缩小,与对照组之间的差异显著(P<0.05);(3)转染后12 d肿瘤细胞核异质性较对照组减轻,核浆比例减小;(4)P16的表达强度在各时点研究组与对照组之间的差异不显著(P>0.05);治疗后8 d及12 d研究组P53的表达强度明显降低,与对照组之间的差异显著(P<0.05)。结论:SCID小鼠所荷宫颈癌细胞瘤体经靶向转染HPV16-siRNA后8 d及12 d时点瘤体内HPV16-DNA和P53均较对照组明显下降,12 d瘤体体积较对照组明显下降;在体固相转染siRNA可以在一定时段内有效抑制HPV-DNA的复制及肿瘤的生长速度。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 RNA干扰 人乳头状瘤病毒 P53蛋白 P16蛋白
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兔宫颈固相转染靶向HPV16 siRNA抑制荷宫颈癌SCID小鼠HPV的复制 被引量：3
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作者 廖百花 冯亦军 肖小敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期695-699,共5页
目的:(1)探讨在体细胞固相转染siRNA的可行性、安全性及有效性。(2)探讨改变宫颈表面黏膜通透性提高转染效果的可能性。方法:(1)设计针对HPV16 siRNA,长度为21nt,采用Cy3荧光标记,制备siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶。(2)选新西兰雌性未孕... 目的:(1)探讨在体细胞固相转染siRNA的可行性、安全性及有效性。(2)探讨改变宫颈表面黏膜通透性提高转染效果的可能性。方法:(1)设计针对HPV16 siRNA,长度为21nt,采用Cy3荧光标记,制备siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶。(2)选新西兰雌性未孕兔12只,随机分为实验组及对照组,实验组在转染前使用200mmol/L高渗盐水处理兔宫颈表面10min,对照组则使用生理盐水处理兔宫颈,将siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶1.5mL涂于兔宫颈表面,进行siRNA转染,持续24h。24h后将兔处死,取其宫颈组织。(3)肉眼观察宫颈局部有无红肿、破溃等改变,取部分作快速冰冻切片,荧光显微镜检测转染siRNA的转染效果;部分组织进行石蜡包埋切片,普通显微镜观察宫颈局部组织细胞形态,评估siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶的副反应。(4)将12只荷HPV宫颈癌SCID小鼠随机分为siRNA转染组及对照组,转染组使用siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶进行基因治疗,对照组仅使用Lipo2000-卡波姆凝胶,转染后取瘤体,采用PCR检测治疗前后瘤体中HPV16-DNA滴度,鉴定siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶疗效。结果:(1)高渗氯化钠预处理组及对照组兔宫颈局部上皮组织内均可见红色的荧光;被转染组织局部无红肿、破溃等不良反应。宫颈局部组织结果正常,细胞形态完整,局部无炎性细胞浸润。(2)使用siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶治疗后小鼠瘤体中HPV-DNA的滴度较前明显下降(P<0.05)。结论:(1)siRNA可通过Lipo2000成功转染入在体宫颈局部组织细胞中,siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶对宫颈局部组织无明显毒、副反应。(2)siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶可有效降低荷SiHa细胞宫颈癌瘤体中HPV16-DNA滴度,具有抑制HPV复制的作用。(3)目前没有足够的证据表明转染前增加宫颈黏膜的通透性可以提高siRNA的转染效果。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 siRNA 固相转染 Cy3荧光标记 乳头状瘤病毒 人
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人子宫内膜癌细胞系的建立及其生物学特性研究 被引量：3
3
作者 陆琳 杜彬 +3 位作者 刘继红 郑军生 王自能 钟雪云 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期990-992,共3页
目的建立人子宫内膜癌细胞系,为子宫内膜癌体外实验提供研究材料。方法将人子宫内膜癌手术标本移植于BALB/C(nu/nu)裸鼠皮下,成瘤后对移植瘤原代培养,进行传代。结果建立子宫内膜癌细胞系,取名EAC,成功传代至51代.该细胞系生长快,稳定传... 目的建立人子宫内膜癌细胞系,为子宫内膜癌体外实验提供研究材料。方法将人子宫内膜癌手术标本移植于BALB/C(nu/nu)裸鼠皮下,成瘤后对移植瘤原代培养,进行传代。结果建立子宫内膜癌细胞系,取名EAC,成功传代至51代.该细胞系生长快,稳定传代,形态学特征符合腺上皮恶性肿瘤细胞特征。染色体检查为超二倍体。雌孕激素受体检查阴性。P53、MDM2表达阴性。致瘤率100%,移植瘤病理学特征与原细胞系相似。结论成功建立人子宫内膜癌细胞系,为开展人类子宫内膜癌基础和临床研究提供了理想实用的模型。 展开更多
关键词 子宫肿瘤 细胞系 肿瘤细胞 培养的
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