丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞氯通道的激活作用 被引量：8

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作者 李媛 刘善文 +6 位作者 李华荣 马文波 潘廷才 朱林燕 叶文才 王立伟 陈丽新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1205-1209,共5页

目的研究丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)氯通道的激活作用并分析该通道的生理学和药理学特性。方法采用膜片钳全细胞记录技术记录丹参酮ⅡA激活的CNE-2Z细胞氯电流,细胞外高张刺激或灌流氯离子通道阻断剂,观察并分析电流的特性。... 目的研究丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)氯通道的激活作用并分析该通道的生理学和药理学特性。方法采用膜片钳全细胞记录技术记录丹参酮ⅡA激活的CNE-2Z细胞氯电流,细胞外高张刺激或灌流氯离子通道阻断剂,观察并分析电流的特性。结果细胞外灌流1nmol.L-1的丹参酮ⅡA激活CNE-2Z细胞产生一个具有明显外向优势的电流,该电流没有明显的电压依赖性和时间依赖性的失活,电流的翻转电位为(-5.9±0.2)mV,接近氯离子平衡电位。渗透性容积缩小可以完全抑制该电流,氯通道阻断剂NPPB可以部分抑制该电流。结论丹参酮ⅡA激活鼻咽癌细胞膜上的氯通道,诱导氯电流,该电流具有容积敏感性。 展开更多

关键词 中药药理 丹参酮ⅡA 氯通道 鼻咽肿瘤 氯通道阻 断剂 膜片钳技术

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DSF-Cu通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡 被引量：7

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作者 杨亚萍 汪亚帷 +7 位作者 李梦佳 张可凡 孙晓雪 梁志红 陈丽新 王立伟 杨海峰 朱林燕 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1208-1217,共10页

目的探测双硫仑(disulfiram,DSF)螯合氯化铜(DSF-Cu)通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡。方法采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成以及线粒体膜电位(mitochond... 目的探测双硫仑(disulfiram,DSF)螯合氯化铜(DSF-Cu)通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡。方法采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的改变。AFM探测细胞表面形貌和超微结构、细胞高度、宽度及粗糙度的变化。激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)观察细胞骨架F-actin的分布和重组。结果细胞周期检测显示DSF-Cu将CNE-2Z细胞周期阻滞于G2/M期。Annexin-V/PI检测细胞凋亡显示随药物浓度增加,与对照组相比,实验组早凋率和晚凋率、坏死率细胞均明显增加。进一步检测凋亡相关信号发现DSF-Cu可促进CNE-2Z细胞内活性氧水平的增加及诱导MMP下降。AFM成像表明,与对照组相比,随着药物浓度增大,细胞逐渐变小,胞质浓缩,高度增加,膜表面粗糙度降低,变得平整光滑;细胞伪足由对照组的丰富密集,逐渐变短、萎缩,甚至完全破坏。LSCM进一步观察发现DSF-Cu引起F-actin荧光强度减弱,结构重排,严重影响微丝的功能。结论 DSF-Cu可诱导CNE-2Z细胞依赖线粒体的凋亡途径,利用AFM在单细胞水平上分析DSF-Cu对细胞膜的毒性作用,为鼻咽癌的治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 双硫仑 原子力显微镜 细胞骨架 活性氧 凋亡 鼻咽癌 线粒体膜电位

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人脐带间充质干细胞的快速分离、纯化及冻存 被引量：7

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作者 王跃春 李业霞 +2 位作者 段阿林 李佳穗 郑乔丹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1658-1661,共4页

目的:建立在一般实验条件下快速分离、纯化及冻存人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的简便有效方法并研究其冻存复苏后的增殖及多向分化能力。方法:用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步离心法从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs,通过把握传代... 目的:建立在一般实验条件下快速分离、纯化及冻存人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的简便有效方法并研究其冻存复苏后的增殖及多向分化能力。方法:用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步离心法从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs,通过把握传代时的消化程度及酸化培养基来快速纯化UC-MSCs,以流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定;用简易二步法(-4℃停留30 min,-20℃存放2 h,-80℃长期保存)冻存UC-MSCs,半年后复苏,扩增、传代,检测其胚胎干细胞特异性抗原Oct4、SSEA-4和人端粒酶逆转录酶hTERT的表达情况,并诱导其向神经元样细胞、成肌细胞和肝细胞样细胞分化。结果:通过双酶次序消化结合二步离心法,2 h可提取全脐带中的MSCs,原代培养7 d即可传代,通过适度消化传代和选用弱酸性培养基培养,第3代即可得到纯化的UC-MSCs,UC-MSCs表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,极低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD106。简易法冻存半年后复苏的UC-MSCs表达Oct4、SSEA-4和hTERT,可向三个胚层来源的细胞分化。结论:双酶次序消化结合二步离心法是从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs的一种简便有效方法,偏酸性环境有利于UC-MSCs的扩增及纯化;简易二步法冻存对UC-MSCs增殖和多向分化能力没有明显影响。 展开更多

关键词 脐带 间质干细胞 细胞分离

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ClC-3 siRNA抑制鼻咽癌细胞调节性容积回缩 被引量：4

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作者 叶东 张海峰 +2 位作者 朱林燕 王立伟 陈丽新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期216-220,共5页

目的用siRNA沉默ClC-3氯通道,探讨ClC-3氯通道在鼻咽癌CNE-2Z细胞调节性容积回缩(regulatory volumedecrease,RVD)中的作用。方法使用终浓度100 nmol/L的ClC-3 siRNA转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,流式细胞术检测siRNA的转染率,Western blottin... 目的用siRNA沉默ClC-3氯通道,探讨ClC-3氯通道在鼻咽癌CNE-2Z细胞调节性容积回缩(regulatory volumedecrease,RVD)中的作用。方法使用终浓度100 nmol/L的ClC-3 siRNA转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,流式细胞术检测siRNA的转染率,Western blotting检测ClC-3蛋白表达,活细胞图像系统分析对照组和ClC-3 siRNA组细胞在低渗(160mOsm/L)刺激时的容积调节能力。结果 ClC-3 siRNA转染率为(63.8±3.8)%(n=3,P<0.01),与对照组相比,ClC-3氯通道蛋白的表达减少(60.9±4.0)%(n=3,P<0.01)。对照组细胞的RVD为(42.6±2.8)%(n=20),ClC-3 siRNA组细胞在低渗液中的最大容积与对照组没有显著性差异,但RVD仅为(10.5±4.8)%,RVD抑制率达75.4%(P<0.01)。结论 ClC-3 siRNA成功转染鼻咽癌CNE-2Z细胞,特异性抑制ClC-3蛋白表达,显著降低细胞RVD能力,提示ClC-3氯通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中起重要作用。 展开更多

关键词 ClC-3氯通道 SIRNA 鼻咽癌细胞 细胞容积

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冰片对鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道的激活作用 被引量：3

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作者 孟龙 王海波 +8 位作者 邓志钦 汪源 伍嘉宝 赖周毅 吕瑞玲 孙晓雪 朱林燕 陈丽新 王立伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1671-1676,共6页

目的探讨冰片对低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活CNE-2Z细胞膜电流,分析其电流特性;用活细胞图像法观察并测量冰片对细胞体积的影响。结果细胞外灌流冰片(20μmol
... 目的探讨冰片对低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活CNE-2Z细胞膜电流,分析其电流特性;用活细胞图像法观察并测量冰片对细胞体积的影响。结果细胞外灌流冰片(20μmol·L-1)诱导CNE-2Z细胞膜氯通道开放,产生氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位接近氯离子平衡电位,该电流可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制,细胞外灌流47%高渗溶液完全抑制该电流。细胞外灌流冰片30 min,细胞体积缩小约9.4%,该作用可被tamoxifen完全抑制。结论冰片可以激活低分化鼻咽癌细胞容积敏感性氯通道,导致细胞体积缩小,氯通道在冰片引起细胞体积缩小中起着重要作用。 展开更多

关键词 冰片 氯通道 氯通道阻断剂 癌细胞 膜片钳技术 细胞体积

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钩吻总碱对肝癌细胞氯通道的激活作用 被引量：3

6

作者 王海波 孙晓雪 +6 位作者 邓志钦 吕瑞玲 赖周毅 孟龙 朱林燕 陈丽新 王立伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1529-1535,共7页

目的探讨钩吻总碱对肝癌(HepG_2)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法活细胞图像法观察记录钩吻总碱作用后HepG_2细胞容积的变化;全细胞膜片钳技术记录钩吻总碱对HepG_2细胞膜电流的作用,通过细胞外灌流高渗液,氯通道阻断剂ta... 目的探讨钩吻总碱对肝癌(HepG_2)细胞氯通道的激活作用及对细胞容积的影响。方法活细胞图像法观察记录钩吻总碱作用后HepG_2细胞容积的变化;全细胞膜片钳技术记录钩吻总碱对HepG_2细胞膜电流的作用,通过细胞外灌流高渗液,氯通道阻断剂tamoxifen和5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)研究电流的生理学及药理学特性。结果细胞外灌流钩吻总碱50min,细胞体积减小(12.48±2.2)%(P<0.01),该现象可被氯通道阻断剂tamoxifen抑制。膜片钳结果显示,细胞外灌流钩吻总碱(2μmol·L^(-1))可激活HepG_2细胞膜氯电流,该电流有明显外向优势,无电压及时间依赖性失活,其翻转电位为(-3.21±0.67)mV,接近氯离子平衡电位(-0.9mV),可被氯通道阻断剂tamoxifen和NPPB抑制,细胞外灌流47%高渗溶液亦可明显抑制该电流。结论钩吻总碱可引起肝癌HepG_2细胞体积缩小,诱导凋亡性容积缩小(AVD)发生,该作用可被氯通道阻断剂明显抑制,提示氯通道可能为钩吻总碱抗癌作用的靶点之一。 展开更多

关键词 钩吻总碱 肝癌细胞 凋亡性容积缩小 膜片钳技术 氯通道 氯通道阻断剂

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大黄素阻抑人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期进程 被引量：6

7

作者 李梦佳 马莲顺 +5 位作者 杨亚萍 朱玮玮 陈丽新 王立伟 朱林燕 杨海峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1417-1421,共5页

目的:探讨大黄素抗人乳腺癌MCF-7细胞增殖及其相关机制。方法:采用MTT法检测大黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析周期分布和凋亡情况;原子力显微镜(AFM)观察细胞膜表面超微结构的变化。结果:大黄素呈剂量依赖性地抑制MCF-7... 目的:探讨大黄素抗人乳腺癌MCF-7细胞增殖及其相关机制。方法:采用MTT法检测大黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析周期分布和凋亡情况;原子力显微镜(AFM)观察细胞膜表面超微结构的变化。结果:大黄素呈剂量依赖性地抑制MCF-7细胞的增殖;大黄素能使MCF-7细胞阻滞在G0/G1期;Annexin V/PI双染法结果表明,大黄素对MCF-7细胞没有明显的促凋亡作用。AFM观察细胞膜超微结构,结果显示对照组细胞核区饱满,膜表面平坦光滑;大黄素作用48 h可致细胞核区坍塌萎缩,细胞表面颗粒密集,膜表面的平均粗糙度(Ra)和均方粗糙度(Rq)与对照组相比均有显著增加(P<0.05)。结论:大黄素通过阻断MCF-7细胞的细胞周期进程及影响细胞膜超微结构而发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 大黄素 MCF-7细胞 细胞增殖 细胞周期 原子力显微镜

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氯通道在藤黄酸诱导低分化鼻咽癌细胞凋亡中的作用 被引量：3

8

作者 柏志全 李华荣 +5 位作者 张海峰 刘善文 朱林燕 叶文才 陈丽新 王立伟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1304-1308,共5页

目的探讨氯离子通道在藤黄酸诱导低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡过程中的作用。方法采用MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色法分析细胞凋亡,全细胞膜片钳技术记录氯电流。结果藤黄酸明显抑制CNE-2Z细胞增殖,其抑制作用呈时间和浓度... 目的探讨氯离子通道在藤黄酸诱导低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡过程中的作用。方法采用MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色法分析细胞凋亡,全细胞膜片钳技术记录氯电流。结果藤黄酸明显抑制CNE-2Z细胞增殖,其抑制作用呈时间和浓度依赖性,IC50为3.1μmol/L;8μmol/L藤黄酸诱导细胞凋亡作用可被氯离子通道阻断剂NPPB和Tamoxifen抑制。藤黄酸诱发CNE-2Z细胞产生一个有明显外向优势的氯电流,可被NPPB明显抑制。结论藤黄酸可能通过激活氯离子通道而诱导CNE-2Z细胞凋亡和抑制细胞增殖,提示氯通道参与藤黄酸诱导的细胞凋亡。 展开更多

关键词 藤黄酸 鼻咽癌 细胞凋亡 氯离子通道 膜片钳技术

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肥胖2型糖尿病患者与大鼠胃旁路术后血清总胆汁酸水平的变化 被引量：3

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作者 何伟丽 翟贺宁 +3 位作者 许戈阳 杨景哥 杨华 王存川 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期462-468,共7页

目的:观察胃旁路术对肥胖2型糖尿病患者及肥胖2型糖尿病模型大鼠血清总胆汁酸水平的影响,并探讨其分子机制。方法:收集并分析2011年6月~2016年6月暨南大学附属第一医院肥胖2型糖尿病患者共87例术后血糖恢复情况及血清总胆汁酸水平变化... 目的:观察胃旁路术对肥胖2型糖尿病患者及肥胖2型糖尿病模型大鼠血清总胆汁酸水平的影响,并探讨其分子机制。方法:收集并分析2011年6月~2016年6月暨南大学附属第一医院肥胖2型糖尿病患者共87例术后血糖恢复情况及血清总胆汁酸水平变化数据。动物实验选用SD大鼠,高脂喂养联合腹腔注射低剂量链脲佐菌素的方法制作肥胖2型糖尿病模型,分为正常对照(普通饲料喂养非手术)组、胃旁路手术组及假手术组,检测手术前后大鼠血糖及血清总胆汁酸水平,HE染色观察大鼠胰腺组织病理变化,ELISA方法检测大鼠肝组织胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)含量,real-time PCR和Western blot分别检测各组大鼠肝组织CYP7A1和小分子异源二聚体伴侣(SHP)mRNA和蛋白水平。结果:肥胖2型糖尿病患者及模型大鼠胃旁路术后空腹血糖降低,血清总胆汁酸水平升高,肝组织合成胆汁酸经典途径的限速酶CYP7A1含量降低,CYP7A1 mRNA和蛋白表达量均减少,肝组织胆汁酸合成的负性调节因子SHP mRNA和蛋白表达量均增加,与假手术组比较差异显著(P<0.05)。结论:胃旁路手术后肥胖2型糖尿病患者及模型动物血清总胆汁酸水平升高,且该变化并非因经典途径合成胆汁酸增多。 展开更多

关键词 胃旁路术 肥胖 2型糖尿病 胆汁酸

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沉默ClC-3氯通道基因对HeLa细胞周期分布的影响 被引量：3

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作者 叶东 邢德刚 +2 位作者 曾志 陈丽新 王立伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期257-262,共6页

目的:探讨沉默HeLa细胞的ClC-3氯通道基因后细胞周期分布的变化及其作用机制。方法:依照siRNA设计原则构建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并转染HeLa细胞;实验分为空白对照组(control组)、转染试剂对照组(Lipo组)、阴性对照组(negative si... 目的:探讨沉默HeLa细胞的ClC-3氯通道基因后细胞周期分布的变化及其作用机制。方法:依照siRNA设计原则构建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并转染HeLa细胞;实验分为空白对照组(control组)、转染试剂对照组(Lipo组)、阴性对照组(negative siRNA组)和ClC-3 siRNA组。采用real-time PCR检测ClC-3 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测细胞周期分布情况;Western blot检测ClC-3蛋白及相关细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4、CDK6、P21和P27等表达。结果:CIC-3 siRNA成功沉默HeLa细胞的ClC-3基因。和其它组相比,ClC-3 siRNA组的细胞周期被阻抑在G_0/G_1期。CIC-3 siRNA组的cyclin D1、CDK4和CDK6蛋白表达水平明显下降,P21和P27蛋白表达水平明显上升。结论:沉默HeLa细胞ClC-3氯通道基因可影响cyclin D1、CDK4、CDK6、P21和27蛋白的表达水平胆抑HeLa细胞周期停滞在G_0/G_1期。 展开更多

关键词 ClC-3氯通道 HELA细胞 细胞周期 细胞周期蛋白依赖激酶 P21 P27

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ClC-3氯通道蛋白磷酸化及其功能的研究进展 被引量：3

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作者 柏志全 李华荣 +3 位作者 张海峰 朱林燕 王立伟 陈丽新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1647-1651,共5页

细胞容积调节广泛参与细胞的各种生理病理过程，如上皮细胞物质转运、物质代谢、细胞兴奋性、激素释放、细胞迁移、细胞增殖及细胞坏死凋亡等。

关键词 ClC-3氯通道 磷酸化 信号转导通路

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氯通道在阿霉素诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用 被引量：2

12

作者 刘梅 罗海 +8 位作者 林嘉伟 魏燕 李媛 刘善文 孟龙 邹丽莉 朱林燕 王立伟 陈丽新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1249-1253,共5页

目的研究氯离子通道在阿霉素诱导的低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及凋亡性容积减小中的作用。方法采用全细胞膜片钳技术记录氯电流,流式细胞术检测细胞凋亡,活细胞图像分析法检测细胞容积变化。结果 (1)阿霉素诱导CNE-2Z细胞凋亡;(2)阿霉... 目的研究氯离子通道在阿霉素诱导的低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及凋亡性容积减小中的作用。方法采用全细胞膜片钳技术记录氯电流,流式细胞术检测细胞凋亡,活细胞图像分析法检测细胞容积变化。结果 (1)阿霉素诱导CNE-2Z细胞凋亡;(2)阿霉素诱导CNE-2Z细胞发生凋亡性容积减小,细胞外灌流阿霉素2 h,细胞容积减小约10%;(3)阿霉素可激活氯通道,产生一个有较明显外向优势的氯电流;(4)氯通道阻断剂5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)-benzoate(NPPB)明显抑制阿霉素诱导的凋亡性容积减小、细胞凋亡和氯电流。结论阿霉素可通过激活氯通道而诱导细胞凋亡,氯通道在阿霉素诱导的鼻咽癌细胞凋亡中发挥重要作用。 展开更多

关键词 阿霉素 鼻咽肿瘤 氯通道 膜片钳技术 凋亡 凋亡性容积减小

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ClC-3基因过表达对小鼠骨量和骨结构的影响 被引量：3

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作者 汪源 邓志钦 +8 位作者 吕瑞玲 王海波 高宏 梁协稠 谭秋婵 朱林燕 李青南 王立伟 陈丽新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期499-503,共5页

目的:研究过表达电压门控氯通道家族蛋白成员3(voltage-gated chloride channel family protein 3,ClC-3)基因对小鼠骨骼的影响。方法:3月龄雄性FVB小鼠用鼠尾基因检测法确定基因型后分为2组:野生型(WT)组和ClC-3过表达(ClC-3 transgene... 目的:研究过表达电压门控氯通道家族蛋白成员3(voltage-gated chloride channel family protein 3,ClC-3)基因对小鼠骨骼的影响。方法:3月龄雄性FVB小鼠用鼠尾基因检测法确定基因型后分为2组:野生型(WT)组和ClC-3过表达(ClC-3 transgene)组,每组各8只。分别测量2组小鼠体重,右侧胫骨长度和重量。取胫骨上段和中段进行脱钙,石蜡包埋,切片,HE染色后,采用骨形态计量学分析胫骨上段松质骨的骨小梁面积百分数(percent trabecular area,%Tb.Ar)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁宽度(trabecular width,Tb.Wi)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)和胫骨中段皮质骨的骨组织总面积(total tissue area,T.Ar)、皮质骨面积(cortical area,Ct.Ar)、皮质骨面积百分数(percent cortical area,%Ct.Ar)、骨髓腔面积(marrow area,Ma.Ar)、骨髓腔面积百分数(percent marrow area,%Ma.Ar)。结果:小鼠经鼠尾基因检测后确认为野生型或ClC-3过表达型。与WT组相比,ClC-3 transgene组小鼠体重及胫骨长度重量均减小(P<0.05);松质骨的%Tb.Ar和Tb.Wi均减小(P<0.05),Tb.Sp增大(P<0.05),Tb.N的变化无统计学意义;皮质骨的T.Ar、Ct.Ar和%Ct.Ar均减小(P<0.05),%Ma.Ar增大(P<0.05),Ma.Ar的变化无统计学意义。结论:ClC-3过表达导致小鼠的皮质骨和松质骨骨量减少,骨结构变差,提示ClC-3可能参与了骨形成和/或骨吸收。 展开更多

关键词 电压门控氯通道家族蛋白成员3 骨形态计量学 松质骨 皮质骨

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P53结合位点对人NOD8基因的调控 被引量：2

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作者 曾琪 张芸 +3 位作者 田莉 唐清亮 胡巢凤 柏志全 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2362-2367,共6页

目的:探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用。方法:利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的NOD8基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的NOD8基因... 目的:探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用。方法:利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的NOD8基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的NOD8基因启动子驱动的、表达绿色荧光蛋白-NOD8融合蛋白的质粒pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8和mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8;将构建的重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞中,并加入不同浓度的P53抑制剂pifithrin alpha(PFT-α)处理HEK293细胞,用RT-PCR和Westren blotting方法检测NOD8 mRNA和蛋白的表达;此外,用pNOD8(760 bp)-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用染色质免疫共沉淀法(ChIP)观察P53是否与NOD8启动子结合。结果:经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。ChIP实验证实P53能与NOD8启动子结合。pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组中NOD8 mRNA的表达显著高于pEGFP-C2转染组(P<0.05),并且NOD8 mRNA在缺失人P53结合位点的mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8转染组中的表达明显降低(P<0.01);同时发现加入PFT-α的pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8 mRNA的表达显著下降,并呈剂量依赖关系,其中90μmol/L PFT-α对NOD8mRNA表达的抑制作用最为显著(P<0.01)。与mRNA检测结果一致的是pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量显著高于对照组pEGFP-C2;而mpNOD8(750 bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量明显低于pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组和加入PFT-α的pNOD8(760 bp)-EGFP-NOD8转染组(P<0.01)。结论:P53结合位点在NOD8基因调控中起着重要的作用,并且P53结合位点与NOD8基因之间可能存在正反馈调节。 展开更多

关键词 启动子 基因 NOD8 P53结合位点 核苷酸结合寡聚结构域样受体

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乙醇激活的鼻咽癌细胞氯电流的分子机制 被引量：2

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作者 林娜 左婉红 +5 位作者 赖周毅 伍嘉宝 陈美苑 汪源 陈丽新 王立伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1179-1183,共5页

目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响；全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响；应用氯通道阻断剂分析该电流的特性；siR-NA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子... 目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响；全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响；应用氯通道阻断剂分析该电流的特性；siR-NA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子本质。结果：在等渗灌流液中记录到微弱的背景氯电流，随灌流液中乙醇浓度（0．17～170 mmol/L）的升高，所激活的氯电流呈倒U型曲线状，17 mmol/L的乙醇激活电流达到峰值，电流呈较明显的外向优势，能被高渗液及氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropylamino）benzoic acid（NPPB）所阻断；干扰ClC-3氯通道基因表达后乙醇激活的氯电流明显减小。结论：乙醇可能通过激活CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道，诱导氯电流的产生。 展开更多

关键词 乙醇 鼻咽肿瘤 氯通道 膜片钳术

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细胞外低渗诱导大鼠胚胎心肌细胞H9c2容积激活性氯电流和调节性细胞容积回缩 被引量：2

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作者 刘振锋 厉冰雪 +6 位作者 滕双凤 罗海 林娜 黄维渊 朱林燕 王立伟 陈丽新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1399-1404,共6页

目的:研究细胞外低渗诱导的大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)容积激活性氯电流和调节性容积回缩(regulatory volume decrease,RVD)。方法:采用全细胞膜片钳技术记录低渗激活的H9c2细胞氯电流并分析电流特性;用实时活细胞影像系统拍摄细胞图像,测... 目的:研究细胞外低渗诱导的大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)容积激活性氯电流和调节性容积回缩(regulatory volume decrease,RVD)。方法:采用全细胞膜片钳技术记录低渗激活的H9c2细胞氯电流并分析电流特性;用实时活细胞影像系统拍摄细胞图像,测量细胞容积,探讨氯通道在H9c2细胞调节性容积回缩(RVD)过程中的作用。结果:等渗灌流下,可在H9c2细胞记录到一个较小的背景电流。47%低渗液灌流可迅速诱发一个具有外向优势的电流,该电流无明显时间依赖性失活和电压依赖性失活;在+80 mV和-80 mV电压钳制下,细胞的平均电流密度分别为(47.77±3.80)pA/pF和(-33.36±2.80)pA/pF;翻转电位为(-9.02±0.61)mV,接近氯离子的平衡电位(-0.9 mV)。高渗灌流液可以完全抑制该电流。此外,该电流可被氯通道阻断剂他莫昔芬、5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)和ATP不同程度抑制。同时,细胞外灌流47%低渗液可诱发H9c2细胞产生RVD,100μmol/L的NPPB几乎完全抑制低渗诱发的RVD。结论:细胞外低渗刺激可以诱导H9c2细胞容积激活性氯电流和RVD。容积激活性氯通道在H9c2细胞RVD中起重要作用。 展开更多

关键词 H9C2细胞 氯通道 膜片钳术 容积调节

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房水对培养的角膜基质细胞的影响 被引量：2

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作者 唐光霞 陈建苏 +4 位作者 徐锦堂 吴连胜 潘红卫 林熙 唐建军 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期416-419,共4页

目的观察房水对角膜基质细胞生长的作用。方法将新西兰大白兔的角膜去除后弹力层、内皮层和上皮层后,得到基质层,用组织块培养法体外培养角膜基质细胞。在实验组的培养基中加入10%房水,对照组使用常规培养基培养。通过CCK8实验测得角膜... 目的观察房水对角膜基质细胞生长的作用。方法将新西兰大白兔的角膜去除后弹力层、内皮层和上皮层后,得到基质层,用组织块培养法体外培养角膜基质细胞。在实验组的培养基中加入10%房水,对照组使用常规培养基培养。通过CCK8实验测得角膜基质细胞的吸光度(A)值以分析细胞增生的情况。分别在培养基中加入2.5%、5%、10%、15%、20%的房水,用明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMPs)的活性。结果倒置显微镜观察可见培养的角膜基质细胞呈多角形或树枝状,与对照组相比,实验组的细胞生长状态良好,培养的角膜基质细胞数量明显增加。明胶酶谱法显示实验组的条带比对照组清晰。实验第1～5天分别测角膜基质细胞的A值,实验组的检测条带明显强于对照组,>10%的房水培养组检测的条带明显强于2.5%、5%房水培养组。CCK8检测表明,培养1～5d实验组的角膜基质细胞A值明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论房水作用于角膜基质细胞后,可促进角膜基质细胞的生长,10%房水对体外培养角膜细胞有促细胞增生的作用。 展开更多

关键词 房水 角膜基质细胞 细胞培养

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mTOR信号通路在糖代谢中作用 被引量：6

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作者 许戈阳 刘芬婷 +1 位作者 沈哲民 张炜真 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期94-98,共5页

哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是一种高度保守的丝氨酸-苏氨酸类激酶,通过在体内形成两种不同的复合体对机体生长、代谢产生调控作用。m TOR信号分子可对多种营养信号作出应答而成为细胞内重要的能量... 哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是一种高度保守的丝氨酸-苏氨酸类激酶,通过在体内形成两种不同的复合体对机体生长、代谢产生调控作用。m TOR信号分子可对多种营养信号作出应答而成为细胞内重要的能量感受分子。近年来研究发现能量感受分子m TOR与糖代谢关系密切,可以通过影响胰岛素信号通路、胰岛β细胞发育以及调控ghrelin、nesfatin-1等代谢调节激素的合成分泌等多种途径对糖代谢产生影响。本文就m TOR信号通路及其在糖代谢乃至于糖尿病发生过程中作用作一综述。 展开更多

关键词 MTOR 糖代谢

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氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用 被引量：1

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作者 吕瑞玲 高宏 +6 位作者 邓志钦 王海波 梁协稠 谭秋蝉 朱林燕 王立伟 陈丽新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期647-654,共8页

目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用... 目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。 展开更多

关键词 氯通道 三氧化二砷 鼻咽癌 细胞凋亡

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神经胶质细胞与HIV相关神经认知障碍 被引量：1

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作者 董军 陈桂玲 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期427-431,共5页

HIV-1相关神经认知障碍（HIV-1associated neurocognitive disorder，HAND）是艾滋病患者中枢神经系统（central nervous system，CNS）的常见并发症，其患病率高达40％～60％，是40岁以下成人痴呆的最主要原因之一；患者从确诊到死亡... HIV-1相关神经认知障碍（HIV-1associated neurocognitive disorder，HAND）是艾滋病患者中枢神经系统（central nervous system，CNS）的常见并发症，其患病率高达40％～60％，是40岁以下成人痴呆的最主要原因之一；患者从确诊到死亡的平均时间约为4～6个月，且其发病机理尚待研究．已有的研究表明，HIV-1不感染神经元，但在HAND的发病机制中，神经胶质细胞的过度活化和由此而引发的神经炎症起着重要的作用．本文就神经胶质细胞在HAND的发牛发展中的作用进展进行综述． 展开更多

关键词 HIV-1相关神经认知障碍 小胶质细胞 星形胶质细胞 少突胶质细胞

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