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hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
1
作者
沈涛
梁峰
+4 位作者
杨礼庆
李妍
粱爽
薛峰
付勤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期141-143,共3页
目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细...
目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot。最后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位。结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功。Western blot检测GFP-hCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000。pEG-FP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。
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关键词
hCAP
WESTERN
BLOT
绿色荧光蛋白
质粒构建
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职称材料
骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位
2
作者
沈涛
李妍
+3 位作者
杨礼庆
梁爽
巴根
付勤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期237-239,共3页
目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉...
目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。
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关键词
ArgBP2
WESTERN
BLOT
免疫沉淀
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职称材料
题名
hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
1
作者
沈涛
梁峰
杨礼庆
李妍
粱爽
薛峰
付勤
机构
中国医科
大学
附属盛京医院骨科
中国医科
大学
基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点
实验
室
明尼苏达大学实验病理系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期141-143,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30800415,81070688)
文摘
目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot。最后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位。结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功。Western blot检测GFP-hCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000。pEG-FP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。
关键词
hCAP
WESTERN
BLOT
绿色荧光蛋白
质粒构建
Keywords
hCAP
Western blot
GFP
plasmid construction
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位
2
作者
沈涛
李妍
杨礼庆
梁爽
巴根
付勤
机构
中国医科
大学
附属盛京医院骨科
中国医科
大学
基础医学院细胞生物学教研室细胞生物学卫生部重点
实验
室
明尼苏达大学实验病理系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期237-239,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30800415
81070688)
文摘
目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。
关键词
ArgBP2
WESTERN
BLOT
免疫沉淀
Keywords
ArgBP2
Western blot
immunoprecipitation
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
沈涛
梁峰
杨礼庆
李妍
粱爽
薛峰
付勤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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职称材料
2
骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位
沈涛
李妍
杨礼庆
梁爽
巴根
付勤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
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引证文献
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