为了观察A-Raf的突变体A-Raf-S214C对MAPK(mitogen-activated protein kinase,丝裂原活化蛋白激酶)信号通路的影响,并探讨其诱发肺癌和朗格汉斯增生症的可能分子机制。通过定点突变构建pc DNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C突变质粒,并利用该质...为了观察A-Raf的突变体A-Raf-S214C对MAPK(mitogen-activated protein kinase,丝裂原活化蛋白激酶)信号通路的影响,并探讨其诱发肺癌和朗格汉斯增生症的可能分子机制。通过定点突变构建pc DNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C突变质粒,并利用该质粒构建稳定表达A-Raf-S214C突变体的HEK293细胞系,之后通过检测下游ERK磷酸化程度,确定该突变体对MAPK信号通路的影响。结果显示,通过实验成功构建了稳定表达A-Raf-S214C突变体的细胞系,在不同浓度的多西环素诱导下,其表达量有所不同。与野生型相比,A-Raf-S214C突变体可明显增强MAPK信号通路中下游信号分子ERK的磷酸化。结果表明A-Raf-S214C突变体是A-Raf激酶的激活突变体,可以导致MAPK信号通路下游信号分子ERK磷酸化明显增强。展开更多
文摘为了观察A-Raf的突变体A-Raf-S214C对MAPK(mitogen-activated protein kinase,丝裂原活化蛋白激酶)信号通路的影响,并探讨其诱发肺癌和朗格汉斯增生症的可能分子机制。通过定点突变构建pc DNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C突变质粒,并利用该质粒构建稳定表达A-Raf-S214C突变体的HEK293细胞系,之后通过检测下游ERK磷酸化程度,确定该突变体对MAPK信号通路的影响。结果显示,通过实验成功构建了稳定表达A-Raf-S214C突变体的细胞系,在不同浓度的多西环素诱导下,其表达量有所不同。与野生型相比,A-Raf-S214C突变体可明显增强MAPK信号通路中下游信号分子ERK的磷酸化。结果表明A-Raf-S214C突变体是A-Raf激酶的激活突变体,可以导致MAPK信号通路下游信号分子ERK磷酸化明显增强。
